UN CRISTAL ET UN SEL DÉRIVÉS DE M -DIHYDROXYBENZÈNE ET PROCÉDÉ DE FABRICATION CORRESPONDANT

本发明涉及一种间苯二酚类衍生物的结晶、盐及其制备方法。

目前针对癌症的靶向治疗基于促使肿瘤发展的特定蛋白质的鉴别和能够发挥出拮抗该蛋白质的效果的特定药剂的鉴别。制药工业大多致力于非常有限数量的已充分验证的蛋白质靶标。常见缺陷是在用这些特定抑制剂治疗的癌症患者中经常发现耐药突变的产生。近来，一般认为同时阻断涉及癌症发展的信号传导途径预期可促成更好的抗肿瘤效果，并且也降低了耐药性发展的可能性。HSP90属于通常分享连接至三磷腺苷的非常特定的C型模式(Bergerat折叠)的蛋白小家族(GHKL，来源于DNA促旋酶，HSP90，组氨酸激酶，mutL)。HSP90是细胞中的量最大的蛋白质之一，对真核生物的生存能力至关重要。人类细胞包含四种HSP90同种型：组成性表达的细胞溶质β-同种型、可诱导的α-形式、在内质网中的GRP94/gp96和线粒体的TRAP1/HSP75。α-和β-形式显示出85％的序列同源性。

HSP90是伴侣结构的关键组分，其在正常细胞中和在应激条件下催化被称为HSP90的客户蛋白(client protein)的折叠和质量控制。严格取决于三磷酸腺苷酶活性的分子伴侣的活性紧密地受其它调节性辅陪伴分子结合的调控。有强有力的证据表明，在例如癌症或其它增殖疾病的疾病状态下，由于特定致癌基因的突变或过表达，或者由于肿瘤经常具有过载的错误折叠的蛋白(其导致分子伴侣功能需求的增加)，HSP90变得至关重要。

HSP90在结构上是由三种主要结构域组成的同源二聚体：非常保守的N末端结构域、中间结构域的三磷酸腺苷酶结构域和C末端结构域。N和C末端结构域可以结合三磷腺苷。大多数目前已知的抑制剂，例如格尔德霉素、根赤壳菌素、二芳基吡唑和嘌呤衍生物显示出对N末端三磷腺苷结合位点的三磷腺苷竞争性结合，而新生霉素是与C末端口袋结合的抑制剂的原型。

目前报道的HSP90的客户蛋白日益增多(Jolly等，J.Natl.Cancer Inst.92；1564-1572(2000))，所述HSP90的客户蛋白属于激酶家族(Her2，B-RAF V600E，bcr-Abl，Flt3，NPM-ALK，Akt，Npm-Alk，ZAP-70)、转录因子(p53，HIF)端粒酶、其它分子伴侣，它们中的大多数与癌症发展密切相关。HSP90抑制损伤折叠或稳定其客户蛋白的能力导致这些未折叠的蛋白基于蛋白酶的降解。这些客户蛋白的降解经常用作HSP90抑制的标志，典型地使用的是过表达Her2的细胞，例如BT474乳癌细胞中，用化合物处理后，Her2被降解。

经证明，通过其竞争性结合至N末端三磷腺苷结合位点和抑制HSP90三磷酸腺苷酶活性的功能，天然化合物格尔德霉素确实可以阻断多种肿瘤细胞的增殖，这最初在HSP90抑制剂领域引起大量研究。令人惊奇的是，该化合物在正常细胞中没有活性，可能是由于HSP90存在于仅出现在肿瘤细胞中的活性络合物(对格尔德霉素有高亲和性)中(Kamal等，Nature 425，407-410(2003))。对肿瘤的选择性灵敏度的另一个可能原因是许多HSP90抑制剂显示的肿瘤滞留。

现正对坦螺旋霉素(17-AAG)、格尔德霉素(GDA)的半合成衍生物以及其它相关衍生物(alvespimycin，17-DMAG，IPI-504)进行大量的临床评价，但是其效果似乎受大量因素限制：制备复杂，依赖代谢产生活性代谢物，缺乏患者的富集，可能与醌部分相关的肝毒性。这使得需进行大量努力以鉴别具有更好的类药性特征和更好的耐受性的第二代HSP90抑制剂。这导致嘌呤衍生物和取代芳基-间苯二酚衍生物的鉴别。

神经变性疾病，例如阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿病和阮病毒病的主要原因是错误折叠的蛋白的蓄积导致噬斑形成。这些错误折叠的蛋白依赖分子伴侣(HSP70、HSP40等)进行蛋白聚集体的再成熟、解聚和再增溶。已显示热休克蛋白在多种细胞培养模型中提供该功能。HSF1可诱导HSP，在正常细胞中HSF1受HSP90的密切调节。已证明例如格尔德霉素和17-AAG衍生物的HSP90抑制剂可破坏该相互作用并导致HSP诱导，进而导致错误折叠蛋白的神经保护活性和再增溶与解聚。HSP90过表达可显著降低错误折叠蛋白的蓄积，错误折叠蛋白的蓄积是阿尔茨海默病的原因，事实上已证明聚合tau和HSP70/90水平之间存在反相关。通过HSP70、HSP27和HSP40的过表达可减少异常tau聚集(通过降解)，其通过HSP90的抑制而触发。基于在帕金森氏病小鼠模型中GDA在体内对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱 导的神经毒性的效果，应用HSP90抑制剂治疗帕金森氏病。GDA保护神经元免受MPTP引起的毒性，其与HSP70水平升高密切相关。此外，也已表明HSP90过表达可显著降低错误折叠蛋白的蓄积，其是运动损伤、多发性硬化、脊髓延髓肌肉萎缩症和其它疾病的原因。

在GB1,406,345中公开了具有药理学活性的4,6-二取代的间苯二酚化合物。其它专利申请描述了作为HSP90抑制剂的苯基-杂环化合物，所有化合物特征为具有五元杂环的特定取代模式，例如申请人为Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha的WO2006/101052；申请人为Vernalis的WO2005/000300，WO2004/072051和WO2004/056782；申请人为Ribotargets的WO2003/055860，申请人为Synta Pharmaceuticals的WO2008/097640和申请人为Kyowa Hakko Kogyo的WO2005/063222。

WO2004072051涉及一类HSP90抑制剂，其中包括Luminespib：

WO2006055760A1报道了一些化合物如

CN1771235A公开了一些化合物，比如

这些化合物在药效、药代动力学、水溶性、成药性等方面不甚理想。尽管已有上述发展，仍需要开发更加有效、低副作用的HSP90抑制剂。

发明内容

本发明提供了结晶形式的式(I)化合物，

在一种实施方式中，本发明提供了结晶形式的式(I)化合物，所述结晶形式为A型结晶。

本发明的一些方案中，式(I)化合物的A型结晶的X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有衍射峰：10.66±0.2°，15.09±0.2°，19.17±0.2°。

本发明的一些方案中，式(I)化合物的A型结晶的X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有衍射峰：10.66±0.2°，11.41±0.2°，15.09±0.2°，19.17±0.2°，20.43±0.2°，22.19±0.2°，25.76±0.2°。

本发明的一些方案中，式(I)化合物的A型结晶的X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有衍射峰：10.66±0.2°，11.41±0.2°，15.09±0.2°，17.85±0.2°，19.17±0.2°，19.60±0.2°，20.43±0.2°，21.81±0.2°，22.19±0.2°，25.76±0.2°。

本发明的一些方案中，式(I)化合物的A型结晶的X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有衍射峰：10.66±0.2°，11.41±0.2°，15.09±0.2°，15.84±0.2°，17.85±0.2°，18.22±0.2°，19.17±0.2°，19.60±0.2°，20.19±0.2°，20.43±0.2°，21.81±0.2°，22.19±0.2°，22.86±0.2°，24.57±0.2°，25.76±0.2°，26.05±0.2°，27.75±0.2°。

本发明的一些方案中，上述式(I)化合物的A型结晶的X射线粉末衍射图谱解析数据如表1所示。

本发明的一些方案中，上述式(I)化合物的A型结晶的X射线粉末衍射图谱如图1所示。

本发明的一些方案中，上述式(I)化合物的A型结晶的差示扫描量热曲线在198±5℃处具有吸热峰的起始点。

本发明的一些方案中，上述式(I)化合物的A型结晶的差示扫描量热曲线如图2所示。

本发明的一些方案中，上述式(I)化合物的A型结晶的制备方法包括以下步骤：

(1)将式(I)化合物加入溶剂中，在70-100℃下搅拌至完全溶解；

(2)在搅拌下自然降温至0-30℃，在该温度条件下继续搅拌析晶。

(3)过滤、收集固体并干燥。

其中，所述溶剂为水、甲醇、乙醇、异丙醇、叔丁醇、丙酮、甲基乙基酮、苯、甲苯、二甲苯、乙醚、叔丁基甲基醚、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃或1,4-二氧六环。

本发明的一些方案中，上述式(I)化合物的A型结晶的制备方法包括以下步骤：

(1)将式(I)化合物加入溶剂中，在15-40℃下搅拌1-48小时后离心；

(2)过滤、收集固体并干燥。

其中，所述溶剂选自丙酮、甲醇、乙醇、异丙醇、四氢呋喃或1,4-二氧六环的单一溶剂；或分别独立地选自甲醇、乙醇、乙腈和异丙醇中的任一者与水的混合溶剂；在本发明的一个实施方式中，甲醇、乙醇、乙腈和异丙醇中的任一者与水的体积比为3:1。

本发明还提供了上述A型结晶的结晶组合物。其中A型结晶的结晶组合物是指，组合物中式(I)化合物的A型结晶的重量占组合物重量的50％以上、优选70％以上、更优选90％以上、最优选95％以上，该组合物中可含有少量式(I)化合物的其它结晶或无定形物，包括但不限于式(I)化合物的B型结晶、C型结晶、D型结晶或无定形物。

在一种实施方式中，本发明提供了结晶形式的式(I)化合物，所述结晶为B型结晶。

本发明的一些方案中，式(I)化合物的B型结晶的X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有衍射峰：7.34±0.2°，14.69±0.2°，22.15±0.2°。

本发明的一些方案中，式(I)化合物的B型结晶的X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有衍射峰：7.34±0.2°，12.23±0.2°，12.53±0.2°，14.69±0.2°，18.72±0.2°，19.03±0.2°，20.67±0.2°，22.15±0.2°。

本发明的一些方案中，上述式(I)化合物的B型结晶的X射线粉末衍射图谱解析数据如表2所示。

本发明的一些方案中，上述式(I)化合物的B型结晶的X射线粉末衍射图谱如图3所示。

本发明的一些方案中，上述式(I)化合物的B型结晶的差示扫描量热曲线在55±5℃处具有吸热峰的起始点。

本发明的一些方案中，上述式(I)化合物的B型结晶的差示扫描量热曲线如图4所示。

本发明还提供了上述B型结晶的结晶组合物。其中B型结晶的结晶组合物是指，组合物中式(I)化合物的B型结晶的重量占组合物重量的50％以上、优选70％以上、更优选90％以上、最优选95％以上，该组合物中可含有少量式(I)化合物的其它结晶或无定形物，包括但不限于式(I)化合物的A型结晶、C型结晶、D型结晶或无定形物。

在一种实施方式中，本发明提供了结晶形式的式(I)化合物，所述结晶为C型结晶。

本发明的一些方案中，式(I)化合物的C型结晶的X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有衍射峰：6.45±0.2°，7.68±0.2°，12.91±0.2°，13.58±0.2°。

本发明的一些方案中，式(I)化合物的C型结晶的X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有衍射峰：6.45±0.2°，7.68±0.2°，10.56±0.2°，12.91±0.2°，13.58±0.2°，15.40±0.2°，21.14±0.2°，26.32±0.2°。

本发明的一些方案中，式(I)化合物C型结晶的X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有衍射峰：6.45±0.2°，7.68±0.2°，10.56±0.2°，12.91±0.2°，13.58±0.2°，15.40±0.2°，16.72±0.2°，21.14±0.2°，23.16±0.2°，25.74±0.2°，26.32±0.2°。

本发明的一些方案中，上述式(I)化合物的C型结晶的X射线粉末衍射图谱解析数据如表3所示。

本发明的一些方案中，上述式(I)化合物的C型结晶的X射线粉末衍射图谱如图5所示。

本发明的一些方案中，上述式(I)化合物的C型结晶的差示扫描量热曲线在108±5℃处具有吸热峰的起始点。

本发明的一些方案中，上述式(I)化合物的C型结晶的差示扫描量热曲线如图6所示。

本发明还提供了上述C型结晶的结晶组合物。其中C型结晶的结晶组合物是指，组合物中式(I)化合物的C型结晶的重量占组合物重量的50％以上、优选70％以上、更优选90％以上、最优选95％以上，该组合物中可含有少量式(I)化合物的其它结晶或无定形物，包括但不限于式(I)化合物的A型结晶、B型结晶、D型结晶或无定形物。

在一种实施方式中，本发明提供了结晶形式的式(I)化合物，所述结晶为D型结晶。

本发明的一些方案中，式(I)化合物的D型结晶的X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有衍射峰：5.96±0.2°，9.53±0.2°，19.43±0.2°。

本发明的一些方案中，式(I)化合物的D型结晶的X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有衍射峰：5.96±0.2°，9.53±0.2°，9.65±0.2°，11.94±0.2°，16.42±0.2°，19.43±0.2°，22.01±0.2°，25.49±0.2°。

本发明的一些方案中，式(I)化合物的D型结晶的X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有衍射峰：5.96±0.2°，9.53±0.2°，9.65±0.2°，11.94±0.2°，12.46±0.2°，14.43±0.2°，14.92±0.2°，16.42±0.2°，19.43±0.2°，20.26±0.2°，22.01±0.2°，23.06±0.2°，25.49±0.2°，27.15±0.2°。

本发明的一些方案中，上述式(I)化合物的D型结晶的X射线粉末衍射图谱解析数据如表4所示。

本发明的一些方案中，上述式(I)化合物的D型结晶的X射线粉末衍射图谱如图7所示。

本发明的一些方案中，上述式(I)化合物的D型结晶的差示扫描量热曲线在141±5℃处具有吸热峰的起始点。

本发明的一些方案中，上述式(I)化合物的D型结晶的差示扫描量热曲线如图8所示。

本发明还提供了上述D型结晶的结晶组合物。其中D型结晶的结晶组合物是指，组合物中式(I)化合物的D型结晶的重量占组合物重量的50％以上、优选70％以上、更优选90％以上、最优选95％以上，该组合物中可含有少量式(I)化合物的其它结晶或无定形物，包括但不限于式(I)化合物的A型结晶、B型结晶、C型结晶或无定形物。

本发明的式(I)化合物的A型结晶或A型结晶的结晶组合物、B型结晶或B型结晶的结晶组合物、C型结晶或C型结晶的结晶组合物、D型结晶或D型结晶的结晶组合物，式(I)化合物的三氟乙酸盐、甲基磺酸盐、对甲苯磺酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、富马酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐和硫酸盐，式(II)化合物例如式(II-1)化合物或式(II-2)化合物在下文中总称为“本发明活性物质”。

本发明活性物质可以通过任何适合待治疗疾病的给药途径进行给药，包括通过口服、局部(如口腔、舌下等)、非胃肠(如皮下、肌肉、静脉内、脊髓、皮内、鞘内等)、直肠、阴道等途径给药。

虽然本发明活性物质能够以纯物质的形式给药，但通常以药物组合物的形式给药。本发明活性物质的药物组合物还包含一种或多种药用辅料，视需要，还可包含其它治疗活性成分。也可以与化学治疗、放射治疗、外科手术这些疗法联合给药。

适合口服的药物组合物的剂型包括片剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、滴丸、糊剂、散剂、酊剂、糖浆剂等，优选片剂和胶囊剂。其中片剂可以是普通片剂、分散片、泡腾片、缓释片、控释片或肠溶片，胶囊剂可以是普通胶囊、缓释胶囊、控释胶囊或肠溶胶囊。

用于口服的片剂和胶囊剂的单位制剂中的本发明活性物质的量可根据患者的治疗情况和具体给药途径改变。

本发明提供了上述式(I)化合物的盐，所述盐可选自三氟乙酸盐、甲基磺酸盐、对甲苯磺酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、富马酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐和硫酸盐。本领域技术人员可以理解的是，在上述盐中，式(I)化合物和酸可以以化学上合理的任意比例存在。

本发明还提供了通过下述式(II)化合物表示的式(I)化合物的盐，

其中，HA选自三氟乙酸、甲基磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、马来酸、富马酸、盐酸、氢溴酸、磷酸和硫酸。

本领域技术人员可以理解的是，在上述式(II)化合物中，式(I)化合物和酸可以以化学上合理的任意比例存在，例如式(I)化合物与酸的计量比为1:1或者1:0.5。

本发明还提供上述式(I)化合物的盐(即式(II)化合物)的制备方法，

其包含如下步骤：

其中，HA选自三氟乙酸、甲基磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、马来酸、富马酸、盐酸、氢溴酸、磷酸和硫酸。

本发明还提供式(II-1)所示化合物：

本发明还提供式(II-2)所示化合物：

本发明还提供了包含上述结晶形式的式(I)化合物、结晶组合物的药物组合物。

本发明还提供了包含如下的药物组合物：式(I)化合物的三氟乙酸盐、甲基磺酸盐、对甲苯磺酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、富马酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐或硫酸盐，或者式(II)化合物例如式(II-1)化合物或式(II-2)化合物。

本发明还提供了用于治疗HSP90蛋白介导的疾病的上述结晶形式的式(I)化合物、或者结晶组合物、或者式(I)化合物的盐(可选自式(I)化合物的三氟乙酸盐、甲基磺酸盐、对甲苯磺酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、富马酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐或硫酸盐，或者式(II)化合物例如式(II-1)化合物或式(II-2)化合物)、或者它们的药物组合物。

本发明还提供了上述结晶形式的式(I)化合物、或者结晶组合物、或者它们的药物组合物在制备用于治疗HSP90蛋白介导的疾病的药物中的应用。

本发明还提供了上述式(I)化合物的三氟乙酸盐、甲基磺酸盐、对甲苯磺酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、富马酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐或硫酸盐，或者式(II)化合物例如式(II-1)化合物或式(II-2)化合物，或者它们的药物组合物在制备用于治疗HSP90蛋白介导的疾病的药物中的应用。

本发明还提供了一种治疗HSP90蛋白介导的疾病的方法，其中，该方法包括向有需要的受试者给予上述结晶形式的式(I)化合物、或者结晶组合物、或者药物组合物。

本发明还提供了一种治疗HSP90蛋白介导的疾病的方法，其中，该方法包括向有需要的受试者给予上述式(I)化合物的三氟乙酸盐、甲基磺酸盐、对甲苯磺酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、富马酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐或硫酸盐，或者式(II)化合物例如式(II-1)化合物或式(II-2)化合物，或者它们的药物组合物。

本发明所述的HSP90蛋白介导的疾病选自癌症和神经变性障碍。其中，所述的癌症包括但不限于：膀胱癌、乳腺癌、结肠癌、肾癌、肝癌、包括小细胞肺癌在内的肺癌、食道癌、胆囊癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、宫颈癌、甲状腺癌、前列腺癌和包括鳞状细胞癌在内的皮肤癌；淋巴系的造血系统癌(hematopoietic tumor)，包括白血病、急性淋巴细胞性白血病、急性淋巴母细胞白血病、B-细胞淋巴瘤、T-细胞淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、毛细胞淋巴瘤和伯基特氏淋巴瘤；髓系的造血系统癌，包括急性和慢性髓性白血病、骨髓增生异常综合症和前髓细胞性白血病；包括纤维肉瘤和横纹肌肉瘤的间充质来源的癌；中枢和外周神经系统癌症，包括星形细胞瘤、神经细胞瘤、神经胶质瘤和神经鞘瘤；其它癌，包括黑色素瘤、精原细胞瘤、畸胎癌、骨肉瘤、着色性干皮病、角化棘皮瘤(keratoxanthoma)、甲状腺毛囊癌和卡波西肉瘤。其中，所述神经变性障碍包括但不限于：阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿病、多发性硬化和脊髓延髓肌肉萎缩症。

定义和说明

除非另有说明，本文所用的下列术语和短语旨在具有下列含义。一个特定的短语或术语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的，而应该按照普通的含义去理解。当本文出现商品名时，旨在指代其对应的商品或其活性成分。

本发明的中间体化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式、这些实施方式与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。

本发明具体实施方式的化学反应是在合适的溶剂中完成的，所述的溶剂须适合于本发明的化学变化及 其所需的试剂和物料。为了获得本发明的化合物，有时需要本领域技术人员在已有实施方式的基础上对合成步骤或者反应流程进行修改或选择。

本领域任何合成路线规划中的一个重要考量因素是为反应性官能团(如本发明中的氨基)选择合适的保护基。对于经过训练的从业者来说，Greene and Wuts的Protective Groups In Organic Synthesis,Wiley and Sons,1991是这方面的权威。本发明引用的所有参考文献整体上并入本发明。

下面会通过实施例具体描述本发明，这些实施例并不意味着对本发明的任何限制。

本发明所使用的所有溶剂是市售的，无需进一步纯化即可使用。反应一般是在非活性氮气下、无水溶剂中进行的。质子核磁共振数据记录在Bruker Avance III 400((400MHz)分光仪上，化学位移以四甲基硅烷低场处的ppm表示。质谱是在安捷伦1200系列加6110(&1956A)上测定。LC/MS或Shimadzu MS包含一个DAD检测器：SPD-M20A(LC)和Shimadzu Micromass 2020检测器。质谱仪配备有一个正或负模式下操作的电喷雾离子源(ESI)。

本发明采用下述缩略词：DCM代表二氯甲烷；PE代表石油醚；EA代表乙酸乙酯；DMF代表N,N-二甲基甲酰胺；EtOAc代表乙酸乙酯；tol代表甲苯；THF代表四氢呋喃；EtOH代表乙醇；MeOH代表甲醇；OTf代表三氟乙酰氧基；MTBE代表甲基叔丁基醚；Bn代表苄基；Boc代表叔丁基氧羰基，是一种胺保护基团；Boc₂O代表二-叔丁基二碳酸酯；HCl(g)代表氯化氢气体；H₂SO₄代表硫酸；HOAc代表乙酸；TFA代表三氟乙酸；TsOH代表对甲基苯磺酸；m-CPBA代表间氯过氧苯甲酸；CAN代表硝酸铈铵；BCl₃代表三氯化硼；BBr₃代表三溴化硼；TiCl₄代表四氯化钛；SOCl₂代表氯化亚砜；(COCl)₂代表草酰氯；DIPEA代表二异丙基乙基胺；DIEA代表二异丙基乙基胺；NMM代表N-甲基吗啡啉；DBU代表1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯；Et₃N代表三乙胺；TEA代表三乙胺；t-BuOK代表叔丁醇钾；KOAc代表乙酸钾；OAc代表乙酰氧基；NaClO代表次氯酸钠；NaClO₂代表亚氯酸钠；KMnO₄代表高锰酸钾；MnO₂代表二氧化锰；HATU代表O-(7-氮杂苯并三氮唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐；HOBt代表1-羟基苯并三氮唑；EDCI代表1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺；BOP-Cl代表双(2-氧基-3-唑烷基)磷酰氯；CDI代表羰基二咪唑；T₃P代表三正丙基磷酸酐；NH₄Cl代表氯化铵；PPh₃代表三苯基膦；NCS代表N-氯代丁二酰亚胺；NBS代表N-溴代丁二酰亚胺；NIS代表N-碘代丁二酰亚胺；ICl代表氯化碘；I₂代表碘单质；TEMPO代表2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物；Pd代表钯；Pd/C代表钯碳；Pt代表铂；Rh代表铑；PtO₂代表二氧化铂；Pd(OH)₂代表氢氧化钯；Pd₂(dba)₃代表三(二亚苄基丙酮)二钯；Pd(PPh₃)₄代表四三苯基膦钯；Pd(dppf)Cl₂代表1,1'-双(二苯基磷)二茂铁氯化钯；Pd(PPh₃)₂Cl₂代表二氯双(三苯基膦)钯(II)；Pd(OAc)₂代表醋酸钯；PdCl₂代表氯化钯；CuI代表碘化亚铜；CuBr代表溴化亚铜；CuCl代表氯化亚铜；Cu代表铜粉；Cu₂O代表氧化亚铜；NMO代表N-甲基氧化吗啉；Luminespib代表5-[2,4-二羟基-5-异丙基苯基]-N-乙基-4-[4-(4-吗啉基甲基)苯基]-3-异恶唑甲酰胺；Ganetespib代表3-(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)-4-(1-甲基吲哚-5-基)-5-羟基-4H-1,2,4-三唑；Cremophor代表聚氧乙烯蓖麻油。

化合物经人工或者软件命名，市售化合物采用供应商目录名称。

本发明给出的合成式(I)化合物及其中间体的工艺，有益效果为：起始原料价格便宜易得，克服所用试剂毒害大、反应条件苛刻，路线收率低、分离纯化困难以及不易工业化等缺点。

具体地：

1)本发明制备式(I)化合物的方法所用的原料为常规或常见试剂，在市场上容易获得且价格低廉；

2)本发明制备式(I)化合物通过成盐可以有效的提高其水溶性；

3)本发明所提供的式(I)化合物的A型结晶、B型结晶、C型结晶和D型结晶性质稳定、溶解度好、引湿性好，具有良好的成药前景。其中，分别在RT/92.5％RH(放置5天)、RT/92.5％RH(放置10天)、60℃(放置5天)、60℃(放置10天)、研磨(考察时间：10min/20min/30min)的条件下，式(I)化合物的A型结晶均未发生转晶。此外，式(I)化合物的A型结晶在25±1℃和80±2％RH下的引湿增重ΔW％约为0.45％，具体见图9。

本发明提供的上述式(I)化合物的三氟乙酸盐、甲基磺酸盐、对甲苯磺酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、富马酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐和硫酸盐的性质稳定、引湿性好。其中，在25±1℃和80±2％RH下，式(I)化合物的甲基磺酸盐的引湿增重ΔW％约为1.742％，具体见图10；式(I)化合物的马来酸盐的引湿增重ΔW％约为0.379％，具体见图11；式(I)化合物的硫酸盐的引湿增重ΔW％约为0.081％，具体见图12。

本发明的粉末X-射线衍射(X-ray powder diffractometer,XRPD)方法

仪器型号：布鲁克D8advance X-射线衍射仪

测试条件：详细的XRPD参数如下：

X-ray发生器：Cu,kα,

管电压：40kV，管电流：40mA.

发散狭缝：0.60mm

探测器狭缝：10.50mm

防散射狭缝：7.10mm

扫描范围：4-40deg

步径：0.02deg

步长：0.12秒

样品盘转速：15rpm

需要说明的是，在XRD中，由结晶化合物得到的衍射谱图对于特定的结晶往往是特征性的，其中谱带(尤其是在低角度)的相对强度可能会因为结晶条件、粒径和其它测定条件的差异而产生的优势取向效果而变化。因此，衍射峰的相对强度对所针对的结晶而言并非是特征性的，判断是否与已知的结晶相同时，更应该注意的是峰的相对位置而不是它们的相对强度。在XRD图谱中通常用2θ角或晶面距d表示峰位置，由于2θ角与入射X射线的波长有关，因此用晶面距d表示更具有代表性。两者之间具有简单的换算关系：d＝λ/2sinθ，其中d代表晶面距，λ代表入射X射线的波长，θ为衍射角。还应指出的是，在混合物的鉴定中，由于含量下降等因素会造成部分衍射线的缺失，此时，无需依赖高纯试样中观察到的全部谱带，甚至几条谱带也可能对给定的结晶是特征性的。

本发明的差热分析(Differential Scanning Calorimeter,DSC)方法

仪器型号：TA Q2000差示扫描量热仪

测试方法：取样品(～1mg)置于DSC铝锅内进行测试，在50mL/min N₂条件下，以10℃/min的升温速率，加热样品从25℃到350℃。

DSC测定当结晶由于其晶体结构发生变化或晶体熔融而吸收或释放热时的转变温度。对于同种化合物的同种结晶，在连续的分析中，热转变温度和熔点误差典型地在约5℃之内、通常在约3℃之内，当我们说一个化合物具有一个给定的DSC峰或熔点时，这是指该DSC峰或熔点±3℃。DSC提供了一种辨别不同结晶的辅助方法。不同的结晶形态可根据其不同的转变温度特征而加以识别。需要指出的是对于混合物而言，其DSC峰或熔点可能会在更大的范围内变动。此外，由于在物质熔化的过程中伴有分解，因此熔化温度与升温速率密切相关。

图1为式(I)化合物的A型结晶的Cu-Kα辐射的XRPD谱图。

图2为式(I)化合物的A型结晶的DSC谱图。

图3为式(I)化合物的B型结晶的Cu-Kα辐射的XRPD谱图。

图4为式(I)化合物的B型结晶的DSC谱图。

图5为式(I)化合物的C型结晶的Cu-Kα辐射的XRPD谱图。

图6为式(I)化合物的C型结晶的DSC谱图。

图7为式(I)化合物的D型结晶的Cu-Kα辐射的XRPD谱图。

图8为式(I)化合物的D型结晶的DSC谱图。

图9为式(I)化合物的A型结晶的动态水吸附(DVS)图。

图10为式(I)化合物的甲基磺酸盐的动态水吸附(DVS)图。

图11为式(I)化合物的马来酸盐的动态水吸附(DVS)图。

图12为式(I)化合物的硫酸盐的动态水吸附(DVS)图。

为了更好的理解本发明的内容，下面结合具体实施例来做进一步的说明，但具体的实施方式并不是对本发明的内容所做的限制。

实施例1：式(I)化合物的制备

化合物10的制备：

步骤1：

在室温下，向1-(2,4-二羟基苯基)乙酮(3.50千克，23.00摩尔，2.97升，1.00当量)的乙腈(24升)溶液中加入苄溴(8.66千克，50.61摩尔，6.01升，2.20当量)、碘化钾(190.93克，1.15摩尔，0.05当量)和碳酸钾(9.54千克，69.01摩尔，3.00当量)，然后升温到85℃搅拌16小时。反应结束后，反应液通过布什漏斗过滤浓缩得到粗品油状物。石油醚(12.8升)加入到粗品中，然后在45℃下搅拌1小时，在1小时左右缓慢冷却到室温，过滤得到乳白色固体产物1-(2,4-二苄氧苯基)乙酮(7千克，87.4％yield，95.4％purity)。m/z 333[M+H]⁺。

步骤2：

在氮气保护下控制内温在0-40℃之间，向1-(2,4-二苄氧苯基)乙酮(7.00千克，19.88摩尔，1.00当量)的四氢呋喃(24升)溶液中缓慢滴加甲基溴化镁(3.0摩尔，8.61升，1.30当量)，然后在0-40℃温度范围内继续搅拌0.5小时。反应结束后，控制温度在25-40℃之间将饱和氯化铵水溶液(30升)和氨水(90毫升)滴加到反应液中，加入乙酸乙酯(10升)稀释，然后有机相和水相分液，水相再用乙酸乙酯(10升)萃取一次。两次有机相合并，用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得到油状粗产品。油状物静置16小时，有固体产生，加入二氯甲烷(50升)，然后用饱和碳酸氢钠水溶液(30升)、水(30升)和饱和氯化钠水溶液(30升)进行洗涤。有机相用无水硫酸钠进行干燥，然后过滤浓缩得到白色固体2-(2,4-二苄氧基苯基)丙烷-2-醇(7.00千克，17.62摩尔，88.63％yield，87.7％purity)，直接用于下一步。m/z 331[M+H-18]⁺。

步骤3:

在-70℃氮气保护下，向2-(2,4-二苄氧基苯基)丙烷-2-醇(500.00克，1.44摩尔，1.00当量)的二氯甲烷(3.5升)溶液中缓慢滴加三氟乙酸(328.38克，2.88摩尔，213.23毫升，2.00当量)控制温度在-65℃至-68℃，然后搅拌0.5小时，控制温度在-65℃至-68℃缓慢滴加三乙基硅氢(217.68克，1.87摩尔，298.19毫升，1.30当量)，滴加结束后在-65℃至-70℃下搅拌4小时。反应结束后，在1小时左右向反应液中滴加饱和碳酸氢钠(2.4升)，滴加结束后继续搅拌1小时，用二氯甲烷(2升)萃取一次，并用水(2升)洗涤一次。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得到黄色油状粗品2,4-苄氧基-1-异丙基-苯(500克，粗品，86.8％purity)，直接用于下一步。m/z 333[M+H]⁺。

步骤4：

在5℃左右，将2.53千克POCl₃(2.53千克，16.48摩尔，1.63当量)滴加到12升的N,N-二甲基甲酰胺中，控制温度在15℃以内，一个小时左右加完。搅拌30分钟后，将2,4-苄氧基-1-异丙基-苯(3.36千克，10.11摩尔，1.00当量)底物加入反应液。反应液呈暗红色，反应釜加热到80℃并继续搅拌2小时。反应 结束后，向反应混合物滴加到醋酸钠水溶液(10千克醋酸钠/36升水)中，析出亮黄色固体。固体过滤，用水(10升)和乙醇(10升)分别洗两次。取出滤饼减压浓缩得到白色固体2,4-苄氧基-5-异丙基-苯甲醛(3.40千克，8.95摩尔，88.53％yield，94.9％purity)。m/z 361[M+H]⁺，383[M+Na]⁺。

步骤5：

在室温下，向2,4-苄氧基-5-异丙基-苯甲醛(4.00千克，11.10摩尔，1.00当量)的乙醇(30升)的溶液中加入盐酸羟胺(1.54千克，22.20摩尔，2.00当量)和DIEA(2.15千克，16.65摩尔，2.91升，1.50当量)，然后升温至80℃并搅拌3小时。反应结束后，反应液冷却到室温，水(30升)加入到反应液中，混合液搅拌3小时，然后过滤，并用水(30升)分两次洗涤滤饼得到粗品白色固体(1E)-2,4-苄氧基-5-异丙基-苯甲醛肟(5.8千克，粗品,95％purity)。直接用于下一步。m/z 376[M+H]⁺。

步骤6：

在25℃下，向(1E)-2,4-苄氧基-5-异丙基-苯甲醛肟(4千克，10.65摩尔，1.00当量)的四氢呋喃(20升)溶液中加入丙炔醇(1.49千克，26.63摩尔，1.57升，2.50当量)，并缓慢滴加次氯酸钠溶液(20升)，反应液在25℃下搅拌12小时。反应结束后，向反应液中加入乙酸乙酯(10升)萃取，水相用乙酸乙酯(20升)萃取一次，有机相合并，用无水硫酸钠干燥过滤浓缩，得到黑色油状物。向油状物加入二氯甲烷(5升)和石油醚(15升)进行分散，然后减压浓缩得到粗品黄色固体[3-(2,4-二苄氧基-5-异丙基-苯基)异恶唑-5-基]甲醇(4.56千克，9.36摩尔，87.90％yield，88.17％purity)，直接用于下一步。m/z 430[M+H]⁺。

步骤7：

在15℃的条件下，向[3-(2,4-二苄氧基-5-异丙基-苯基)异恶唑-5-基]甲醇(4.00千克，8.38摩尔，1.00当量)的乙腈(36升)溶液中加入NIS(2.83千克，12.57摩尔，1.50当量)和浓硫酸(167.77克，1.68摩尔，91.18毫升，98％purity，0.20当量)，反应液在15℃搅拌4小时。反应结束后，反应液倒入亚硫酸钠(1.06千克)的水(20升)溶液中，搅拌1小时。用乙酸乙酯(10升)萃取反应液，再用乙酸乙酯(10升)萃取一次，合并有机相，并每次用饱和食盐水(15升)洗涤三次。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得到粗品黄色固体[3-(2,4-二苄氧基-5-异丙基-苯基)-4-碘-异恶唑-5-基]甲醇(5.00千克，粗品，71％purity)。直接用于下一步。m/z 556[M+H]⁺。

步骤8：

在9℃的条件下，向[3-(2,4-二苄氧基-5-异丙基-苯基)-4-碘-异恶唑-5-基]甲醇(5.00千克，6.45摩尔，1.00当量)的乙腈(24升)溶液中，加入TEMPO(70.95克，451.21毫摩尔，0.07当量)、磷酸氢二钠(0.4M，4.67升，0.29当量)和磷酸二氢钠(0.4M，6.12升，0.38当量)。然后在2小时内温度不超过40℃下分四次加入次氯酸钠(1.71千克，16.11摩尔，85％purity，2.50当量)的水(5.6升)溶液，同时加入次氯酸钠(287.90克，193.37毫摩尔，237.93毫升，5％purity，0.03当量)的水(1.1升)溶液。反应液在30-35℃搅拌3小时。反应结束后，反应液倒入亚硫酸钠(1.95千克)的水(12升)溶液中，并搅拌12小时，用乙酸乙酯(20升)萃取。有机相用饱和食盐水(15升*2次)洗涤，最后用无水硫酸钠干燥，过滤减压浓缩得到黄色胶状产物3-(2,4-二苄氧基-5-异丙基苯基)-4-碘-异恶唑-5-甲酸(3.95千克，粗品，74.3％purity)，直接用于下一步。m/z 570[M+H]⁺。

步骤9方法一：(酰化剂)

在0℃下，向3-(2,4-二苄氧基-5-异丙基苯基)-4-碘-异恶唑-5-甲酸(3.90千克，6.85摩尔，1.00当量)的二氯甲烷(30升)溶液中加入草酰氯(2.17千克，17.13摩尔，1.50升，2.50当量)和N,N-二甲基甲酰胺(50.06克，685.00毫摩尔，52.69毫升，0.10当量)。该混合物在0℃搅拌1小时后，随后将反应液真空浓缩得到中间体。该中间体溶于二氯甲烷(30升)溶液中，在0℃下，并向溶液中加入乙胺(1.54千克，34.25摩尔，2.24升，5.00当量)。该混合物在0℃搅拌1小时后，倾入饱和碳酸氢钠水溶液(30升)中。然后有机相用饱和碳酸氢钠水溶液(30升*3)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩得到粗品。将乙酸乙酯(10升)加入到粗品中，然后浓缩到快干，停止浓缩，加入乙酸乙酯(5升)并继续浓缩得到粗品(6.5千克)，加入乙醇(3.5升)并搅拌12小时，过滤，滤饼用乙醇(1升*2次)洗涤得到白色固体产物3-(2,4-二苄氧基-5-异丙基苯基)-N-乙基-4-碘-异恶唑-5-甲酰胺(1.30千克，2.05摩尔，29.91％yield，94％purity)。m/z 597[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ＝7.37(m,10H),7.17(s,1H),6.62(m,2H), 3.52(td,2H),3.34(m,1H),1.29(t,3H),1.23(d,6H)。

步骤9方法二：(缩合剂)

在0℃下，向3-(2,4-二苄氧基-5-异丙基苯基)-4-碘-异恶唑-5-甲酸(200.00毫克，351.25微摩尔，1.00当量)的N,N-二甲基甲酰胺(5.00毫升)溶液中加入二异丙基乙胺(90.79毫克，702.51微摩尔，122.69微升，2.00当量)和双(2-氧基-3-唑烷基)磷酰氯(107.30毫克，421.50微摩尔，1.20当量)。该混合物在0℃搅拌1小时，随后在0℃下，向反应混合液中加入乙胺(47.50毫克，1.05毫摩尔，68.85微升，3.00当量)。该混合物升温至80℃，并在80℃下搅拌11小时。反应液浓缩得到黄色油状产物3-(2,4-二苄氧基-5-异丙基苯基)-N-乙基-4-碘-异恶唑-5-甲酰胺(400毫克，粗品，30％purity)。m/z 597[M+H]⁺。

化合物7的制备：

步骤1：

将(1E)-2.4-二苄氧基-5-异丙基-苯甲醛肟(8.50克，22.64毫摩尔，1.00当量)加入到二氯甲烷(160毫升)中，在0℃下缓慢滴加NCS(4.53克，33.96毫摩尔，1.50当量)，在此温度下继续搅拌2小时。然后缓慢升温至20℃并继续搅拌10小时。反应液减压浓缩得到黄色油状粗品(1Z)-2,4-二苄氧基-N-羟基-5-异丙基-亚胺苄氯(9.30克，粗品)。直接用于下一步反应。m/z 410[M+H]⁺。

步骤2：

在20℃下，将(1Z)-2,4-二苄氧基-N-羟基-5-异丙基-亚胺苄氯(9.30克，22.69毫摩尔，1.00当量)和丙炔醇(1.91克，34.03毫摩尔，1.50当量)加入到甲苯(100毫升)中，然后缓慢加入三乙胺(2.53克，24.96毫摩尔，1.10当量)。反应液在20℃下搅拌12小时。反应结束后，将水(50毫升)加入到反应液中，用乙酸乙酯(25毫升*3)萃取。萃取有机相合并，并用饱和食盐水(25毫升*2)洗涤有机相，然后用无水硫酸钠干燥，过滤减压浓缩得到粗品。粗品通过硅胶柱分离纯化(100-200目，PE/EA＝20/1-4/1)得到黄色油状[3-(2,4-二苄氧基-5-异丙基-苯基)异恶唑-5-基]甲醇(3.80克，8.85毫摩尔，38.99％yield)。m/z 430[M+H]⁺。

式(I)化合物的制备：

步骤1：

将融化了的25升冰醋酸和2.5升水加入50升反应釜，将6-溴异喹啉(2.5千克，12.02摩尔，1.00当量)加入反应釜，调整反应温度至10℃，在10-15℃下，分批加入1.43千克的硼氢化钠，经过7小时加料完毕，继续搅拌2小时。反应结束后，在5-15℃下，将反应液缓慢滴加到氢氧化钠(17.5千克)的水(87.5升)溶液中。滴加结束后，室温下搅拌10小时。过滤得到白色固体6-溴-1,2,3,4-四氢异喹啉(8千克，含 水粗品，95％purity)。直接用于下一步。m/z 212,214(1:1)[M+H]⁺。

步骤2：

在20℃下，向6-溴-1,2,3,4-四氢异喹啉(2.55千克，12.02摩尔，1.00当量)的乙酸乙酯(12.5升)和水(12.5升)的溶液中加入碳酸氢钠(1.21千克)和Boc2O(2.62千克)，反应液在20℃下搅拌12小时。反应结束后，静置分层，水相再用乙酸乙酯(10升*2)萃取。合并有机相用水(10升)洗涤一次，用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得到黄色油状物N-叔丁氧羰基-6-溴-1,2,3,4-四氢异喹啉(3.5千克，11.21摩尔，91.4％yield，98％purity)。m/z 256,258(1:1)[M+H-56]⁺；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ＝7.29(m,2H),6.98(d,1H),4.51(s,2H),3.63(t,2H),2.81(t,2H),1.49(s,9H)。

步骤3：

在25℃氮气保护下，向N-叔丁氧羰基-6-溴-1,2,3,4-四氢异喹啉(1千克)的二氧六环(10升)溶液中加入双联频哪醇硼酸酯(975克)和KOAc(940克)，随后加入催化剂Pd(dppf)Cl₂(13克)。混合物在25℃下搅拌10分钟，然后加热至80℃并搅拌12小时。反应结束后，用布什漏斗垫硅藻土过滤，用乙酸乙酯(2.5升*2)淋洗，滤液浓缩得到粗品黑色油状物N-叔丁氧羰基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉(2.04千克，粗品，85％purity)。直接用于下一步。m/z 304[M+H-56]⁺。

步骤4：

在25℃氮气保护下，向粗品N-叔丁氧羰基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉(1.15千克，3.2摩尔，1.00当量)和3-(2,4-二苄氧基-5-异丙基苯基)-N-乙基-4-碘-异恶唑-5-甲酰胺(2千克，3.2摩尔，1.00当量)的DMF(20升)和水(4升)的溶液中加入碳酸钾(1.31千克)和Pd(PPh₃)₂Cl₂(69.6克)。将混合物在25℃下搅拌10分钟，然后加热至60℃并搅拌12小时。反应结束后，混合物冷却至25℃，将混合物加入至盐酸水溶液(0.4摩尔，30升)中，有固体析出，用离心机甩干，并用水(15升*2)洗涤，然后甩干得到粗品黑色固体叔丁基6-(3-(2,4-二苄氧基-5-异丙基-苯基)-5-(乙基氨基甲酰基)异恶唑-4-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-2-甲酸酯(2.32千克，粗品，75％purity)，直接用于下一步。m/z 702[M+H]⁺。

步骤5：

在室温下，向叔丁基6-(3-(2,4-二苄氧基-5-异丙基-苯基)-5-(乙基氨基甲酰基)异恶唑-4-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-2-甲酸酯(2.21千克，3.15摩尔，1.00当量)的甲基叔丁基醚(5升)的溶液中缓慢滴加氯化氢的乙酸乙酯溶液(4摩尔，5升)，温度不超过25℃，混合物在室温下搅拌12小时。反应结束后，混合液通过布什漏斗过滤得到产物的盐酸盐，滤饼用EA/MTBE＝1/1(2.5升*2)洗涤。粗品溶解到DCM/MeOH＝10/1(17.6升)的溶液中，碳酸钠(800克)的水(16升)溶液加入到有机相中，并搅拌1小时。分液，有机相用盐酸水溶液(0.3摩尔/升，17.6升)，盐酸水溶液(0.1摩尔/升，17.6升)，碳酸钠(800克)的水(17.6升)溶液和氯化钠(4千克)的水(16升)溶液依次进行洗涤。最后用无水硫酸钠进行干燥，过滤浓缩得到棕色油状物3-(2,4-二苄氧基-5-异丙基苯基)-N-乙基-4-(1,2,3,4-四氢异喹啉-6-基)异恶唑-5-甲酰胺(1.44千克，粗品，90％purity)。直接用于下一步。m/z 602[M+H]⁺。

步骤6：

在-10℃氮气保护下，向3-(2,4-二苄氧基-5-异丙基苯基)-N-乙基-4-(1,2,3,4-四氢异喹啉-6-基)异恶唑-5-甲酰胺(1.44千克，2.39摩尔，1.00当量)的二氯甲烷溶液(63升)中缓慢加入三氯化硼的二氯甲烷溶液(18.5升，1摩尔的DCM溶液)。将反应混合物在0℃再搅拌1小时后，升温至室温搅拌两小时。反应液降温至-10℃，然后加入甲醇(18升)淬灭反应。反应混合液真空浓缩得到粗品。粗品用二氯甲烷/丙酮＝1/1(14升)进行打浆，用布什漏斗进行过滤，用二氯甲烷/丙酮＝1/1(1升*2)洗涤滤饼得到盐酸盐。得到3-(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)-N-乙基-4-(1,2,3,4-四氢异喹啉-6-基)异恶唑-5-甲酰胺盐酸盐(747克)，为黄色固体。将3-(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)-N-乙基-4-(1,2,3,4-四氢异喹啉-6-基)异恶唑-5-甲酰胺盐酸盐(560克)加入到二氯甲烷/甲醇＝6/1(36升)溶液中，然后加入到碳酸氢钠(500克)的水(5升)溶液中，室温下搅拌1小时。然后分液，水相用二氯甲烷/甲醇＝7/1(10升*2)萃取。有机相合并，用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得到粗品(480克)，在80℃下，粗品固体在四氢呋喃(9升)中完全溶解，常压蒸馏出四氢呋喃(5升)，然后缓慢降温到室温并搅拌12小时，冷却到0℃搅拌2小时。过滤，并用冰的四氢呋喃(500毫升*2)洗涤滤饼。得到3-(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)-N-乙基-4-(1,2,3,4-四氢异喹啉-6-基)异恶唑-5-甲酰胺(432克， 42％yield，98.8％purity)，为白色固体。m/z 422[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ＝9.51(d,2H),8.85(t,1H),6.94(m,3H),6.84(m,1H),6.33(s,1H),3.76(s,2H),3.22(m,2H),3.04(m,1H),2.86(m,2H),2.54(m,2H),1.08(t,3H),1.04(d,6H)。

实施例2：式(I)化合物的各型结晶的制备

A型结晶的制备：

方法1：

取20g的式(I)化合物，加入400mL的四氢呋喃，在80℃条件下搅拌至完全溶解，约1小时。随后再降温至40℃，并在40℃条件下，常压蒸馏至100mL。该反应混合液在搅拌下自然降温至15℃-30℃，并在15℃-30℃下搅拌，共12小时。过滤收集固体，固体用20mL的四氢呋喃淋洗两次，40℃-45℃下真空干燥，得到白色固体13g。经XRPD鉴定，该固体型结晶为A型结晶。

方法2：

取54g的式(I)化合物，加入1100mL的四氢呋喃，在70℃条件下搅拌至完全溶解。随后再降温至40℃，并在40℃条件下，常压蒸馏至300mL。该反应混合液在搅拌下自然降温至15℃-30℃，并在15℃-30℃下搅拌，共12小时。过滤收集固体，固体用50mL的四氢呋喃淋洗两次，真空干燥(40-45℃)，得到产物(45g)。向该产物中加450mL的水，在60℃-80℃条件下搅拌6小时。该反应混合液在搅拌下自然降温至15℃-30℃，并在15℃-30℃下搅拌，共12小时。过滤收集固体，固体用90mL水淋洗两次，40℃-45℃下真空干燥，得到白色固体38g。经XRPD鉴定，该固体型结晶为A型结晶。

方法3：

取35g的式(I)化合物，加入700mL的乙醇，在80℃条件下搅拌至完全溶解。随后在80℃条件下，向溶液中滴加35mL的水。该反应混合液在搅拌下自然降温至15-30℃，并在15-30℃下搅拌，共12小时。过滤收集固体，固体用70mL的乙醇淋洗两次，40-45℃下真空干燥，得到白色固体10g。经XRPD鉴定，该固体型结晶为A型结晶。

方法4：

取5g的式(I)化合物，加入50mL的丙酮，在15-30℃下搅拌12小时。过滤收集固体，固体用10mL的丙酮淋洗两次，真空干燥(40-45℃)，得到白色固体4g。经XRPD鉴定，该固体型结晶为A型结晶。方法5：

取50mg的式(I)化合物，加入0.35mL的甲醇，40℃条件下搅拌2天后离心。过滤收集固体，于真空干燥箱中(30℃)干燥过夜，得到白色固体。经XRPD鉴定，该固体型结晶为A型结晶。

方法6：

取50mg的式(I)化合物，加入0.35mL的乙醇，40℃条件下搅拌2天后离心。过滤收集固体，于真空干燥箱中(30℃)干燥过夜，得到白色固体。经XRPD鉴定，该固体型结晶为A型结晶。

方法7：

取50mg的式(I)化合物，加入0.35mL的异丙醇，40℃条件下搅拌2天后离心。过滤收集固体，于真空干燥箱中(30℃)干燥过夜，得到白色固体。经XRPD鉴定，该固体型结晶为A型结晶。

方法8：

取50mg的式(I)化合物，加入0.35mL的丙酮，40℃条件下搅拌2天后离心。过滤收集固体，于真空干燥箱中(30℃)干燥过夜，得到白色固体。经XRPD鉴定，该固体型结晶为A型结晶。

方法9：

取50mg的式(I)化合物，加入0.35mL的四氢呋喃，40℃条件下搅拌2天后离心。过滤收集固体，于真空干燥箱中(30℃)干燥过夜，得到白色固体。经XRPD鉴定，该固体型结晶为A型结晶。

方法10：

取50mg的式(I)化合物，加入0.35mL的1,4-二氧六环，40℃条件下搅拌2天后离心。过滤收集固 体，于真空干燥箱中(30℃)干燥过夜，得到白色固体。经XRPD鉴定，该固体型结晶为A型结晶。

方法11：

取50mg的式(I)化合物，加入0.35mL的(甲醇:水＝3:1)，40℃条件下搅拌2天后离心。过滤收集固体，于真空干燥箱中(30℃)干燥过夜，得到白色固体。经XRPD鉴定，该固体型结晶为A型结晶。

方法12：

取50mg的式(I)化合物，加入0.35mL的(乙醇:水＝3:1)，40℃条件下搅拌2天后离心。过滤收集固体，于真空干燥箱中(30℃)干燥过夜，得到白色固体。经XRPD鉴定，该固体型结晶为A型结晶。

方法13：

取50mg的式(I)化合物，加入0.35mL的(乙腈:水＝3:1)，40℃条件下搅拌2天后离心。过滤收集固体，于真空干燥箱中(30℃)干燥过夜，得到白色固体。经XRPD鉴定，该固体型结晶为A型结晶。

方法14：

取50mg的式(I)化合物，加入0.35mL的(异丙醇:水＝3:1)，40℃条件下搅拌2天后离心。过滤收集固体，于真空干燥箱中(30℃)干燥过夜，得到白色固体。经XRPD鉴定，该固体型结晶为A型结晶。

B型结晶的制备：

取约35mg的式(I)化合物，加入1.5mL四氢呋喃，超声助溶，搅拌下加入6mL反溶剂水。析出的固体样品置于真空干燥箱中(40℃)干燥过夜，得到白色固体。经XRPD鉴定，该固体型结晶为B型结晶。C型结晶的制备：

取约35mg的式(I)化合物，加入1.5mL四氢呋喃，超声助溶，搅拌下加入7mL反溶剂甲基叔丁基醚。析出的固体样品置于真空干燥箱中(40℃)干燥过夜，得到白色固体。经XRPD鉴定，该固体型结晶为C型结晶。

D型结晶的制备：

取约35mg的式(I)化合物，加入5mL甲基乙基酮，超声助溶，搅拌下加入5mL反溶剂正庚烷。析出的固体样品置于真空干燥箱中(40℃)干燥过夜，得到白色固体。经XRPD鉴定，该固体型结晶为D型结晶。

表1式(I)化合物的A型结晶的XRPD解析数据

表2式(I)化合物的B型结晶的XRPD解析数据

表3式(I)化合物的C型结晶的XRPD解析数据

表4式(I)化合物的D型结晶的XRPD解析数据

实施例3：式(I)化合物成盐研究

称量大约84mg式(I)化合物，加入到8mL小瓶中，加入3mL的THF，加热到50℃使其溶解，然后缓慢加入17.5μL的盐酸(用THF稀释10倍，取对应体积缓慢加入)，并观察现象。25℃搅拌过夜。将有沉淀产生的样品快速离心得到成盐产物。

称量大约84mg式(I)化合物，加入到8mL小瓶中，加入3mL的THF，加热到50℃使其溶解，然后缓慢加入11.4μL的硫酸(用THF稀释10倍，取对应体积缓慢加入)，并观察现象。25℃搅拌过夜。将有沉淀产生的样品快速离心得到成盐产物。

称量大约84mg式(I)化合物，加入到8mL小瓶中，加入3mL的THF，加热到50℃使其溶解，然后缓慢加入13.6μL的甲磺酸(用THF稀释10倍，取对应体积缓慢加入)，并观察现象。25℃搅拌过夜。将有沉淀产生的样品快速离心得到成盐产物。

称量大约84mg式(I)化合物，加入到8mL小瓶中，加入3mL的THF，加热到50℃使其溶解，然后缓慢加入40.12mg的对甲苯磺酸(称取2倍的重量，用1mL THF溶解，取500μL溶液缓慢加入)，并观察现象。25℃搅拌过夜。将有沉淀产生的样品快速离心得到成盐产物。

称量大约84mg式(I)化合物，加入到8mL小瓶中，加入3mL的THF，加热到50℃使其溶解，然后缓慢加入24.52mg的顺丁烯二酸(称取2倍的重量，用1mL THF溶解，取500μL溶液缓慢加入)，并观察现象。25℃搅拌过夜。将有沉淀产生的样品快速离心得到成盐产物。

称量大约84mg式(I)化合物，加入到8mL小瓶中，加入3mL的THF，加热到50℃使其溶解，然后缓慢加入40.07mg的柠檬酸(称取2倍的重量，用1mL THF溶解，取500μL溶液缓慢加入)，并观察现象。 25℃搅拌过夜。无沉淀析出，加入正庚烷至有沉淀产生，将样品快速离心得到成盐产物。

称量大约84mg式(I)化合物，加入到8mL小瓶中，加入3mL的THF，加热到50℃使其溶解，然后缓慢加入31.45mg的L(+)-酒石酸(称取2倍的重量，用1mL THF溶解，取500μL溶液缓慢加入)，并观察现象。25℃搅拌过夜。无沉淀析出，加入正庚烷至有沉淀产生，将样品快速离心得到成盐产物。

称量大约84mg式(I)化合物，加入到8mL小瓶中，加入3mL的THF，加热到50℃使其溶解，然后缓慢加入84mg的API(称取2倍的重量，用1mL THF溶解，取500μL溶液缓慢加入)，并观察现象。25℃搅拌过夜，无沉淀析出。加入正庚烷至有沉淀产生，将样品快速离心得到成盐产物。

实施例4：式(I)化合物的溶解度测试

试验目的：

测定式(I)化合物的A型结晶和各种盐化合物在不同条件下的溶解度，开发出化合物溶解度最好的结晶、盐及溶解体系。

试验材料：

盐酸，乙酸，乙酸钠，氯化钠，5％葡萄糖溶液，水(buffer为乙酸/乙酸钠缓冲溶液)。

试验方法：

称取样品2mg，加入溶剂(10μL)，在室温条件下溶解。观察原料是否溶解：若原料完全溶解，计算溶解度(2mg/溶剂体积)；若原料没有完全溶解，则分批加入溶剂，每次加入溶剂(10μL)，至原料完全溶解，计算溶解度，最多加入溶剂总量2mL。若加入溶剂总量达到2mL，原料没有完全溶解，则原料在该溶剂中的溶解度定为小于1mg/mL。

试验结果：

式(I)化合物的大致溶解度试验结果见表5。

结论：

式(I)化合物在PH 3.5-4.5的buffer中具有较高的溶解度，化合物的盐酸盐、甲基磺酸盐比化合物的A型结晶具有明显较高的溶解度。

表5式(I)化合物的大致溶解度试验结果

实施例5：式(I)化合物的组织分布研究

1.摘要

以SD大鼠为受试动物，应用LC/MS/MS法测定了大鼠尾部静脉注射给予式(I)化合物后不同时刻的血浆、肺部和乳腺组织中的药物浓度。研究本发明的化合物在大鼠体内的组织分布情况，评价其药代动力学特征。

2.试验方案

2.1实验药品：

Luminespib，Ganetespib和式(I)化合物。

2.2试验动物：

健康成年雄性SD大鼠100-200g，总共9只。购自上海斯莱克实验动物有限公司。

2.3药物配制：

称取适量样品，将Luminespib、Ganetespib和本发明式(I)化合物分别配制成浓度均为2.5mg/mL的澄清溶液用于静脉注射，其中溶媒由体积比为10％DMSO、14％聚氧乙烯氢化蓖麻油40和76％的5％葡萄糖水溶液配比组成。

2.4给药：

SD雄性大鼠9只，分为三组，每组三只。正常喂食后尾端静脉注射给药，剂量为1mg/kg。

3.操作

三组大鼠分别于给药后0.5、6、24小时采血液样品和肺部、乳腺组织样品。将血液样品于收集后半小时内在4℃、3000转/min的条件下离心15min分离得到血浆样品。得到的血浆样品用聚丙烯管存放并保存在-80℃下用于LC/MS/MS分析。血液样品收集后将动物采用CO₂处死，然后收集组织样品。每份组织样品用冷的去离子水洗涤2次，并粘附于滤纸上。然后每份组织样品分别在MeOH/15mM PBS(1:2)(5mL MeOH/15mM PBS(1:2)每克组织，稀释系数为6)中多次匀浆，以确保形成均相。整个过程在冰点温度下进行。匀浆后的样品使用干冰快速冷冻并储存在-80℃下用于生物分析。

用LC/MS/MS法测定注射给药后的大鼠血浆、肺部和乳腺组织中的待测化合物含量。

4.药代动力学参数结果

见表6。

表6式(I)化合物的组织分布结果

备注：ND代表超出仪器的检测限，未检测到相关数据。

5.结论

式(I)化合物注射给药剂量为1mg/kg时，与Luminespib和Ganetespib同等剂量下相比，在大鼠肺部和乳腺组织中同等时间下的血药浓度明显更高，组织暴露量也明显更大，表明式(I)化合物在肺癌和乳腺癌等癌症中具有较好的应用前景。

实施例6：式(I)化合物在乳腺癌动物体内的药效评价

BT-474肿瘤细胞按5×10⁶/只分别皮下接种于裸小鼠右侧腋窝，形成移植瘤，体积达到100-200mm³时， 将动物按瘤体积随机分组，阴性对照组6只，阳性对照组每组6只，实验组每组6只。实验组每周3次分别静脉注射不同浓度的阳性药Ganetespib(20mg/kg)和式(I)化合物(10mg/kg和20mg/kg)，阴性对照组同时给予等量的溶剂。每周两次用游标卡尺测量肿瘤长(A)、宽(B)，并由此计算肿瘤体积V＝A×B²/2。相对肿瘤体积(RTV)的计算遵循：RTV＝V_t/V₀，V_t为给药结束时的肿瘤体积，V₀为分笼给药前测量所得肿瘤体积。抗肿瘤活性的药效学评价指标为相对肿瘤增殖率T/C(％)，计算公式为：T/C(％)＝T_RTV/C_RTV×100％。其中T_RTV：治疗组RTV；C_RTV：阴性对照组RTV。疗效评价标准：T/C％>60％为无效；T/C％≤60％，并经统计学处理P<0.05为有效。肿瘤生长抑制率(TGI)计算公式如下：

TGI(％)＝{[(CV_t-CV₀)-(TV_t-TV₀)]/(CV_t-CV₀)}×100％

CV_t为对照组给药结束时的肿瘤体积，CV₀为对照组分笼给药前的肿瘤体积，TV_t为给药组给药结束时的肿瘤体积，TV₀为给药组分笼给药前的肿瘤体积。给药组及对照组的肿瘤体积的差异经t-检验。同时，每周两次称量各组裸鼠体重，以初步评价药物的毒副作用。各化合物在该模型中的药效结果如下表7中所示。

结论：

与已知HSP90抑制剂Ganetespib的20mpk相比，式(I)化合物在10mpk下，在小鼠移植BT-474乳腺癌细胞模型中具有明显更优的抗肿瘤疗效。

表7式(I)化合物的体内药效试验结果