КОМПЛЕКСЫ ПЕПТИДОГЛИКАН - МОНОМЕРА (PGM) С ТРЕХВАЛЕНТНЫМИ МЕТАЛЛАМИ, СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ

Настоящее изобретение относится к новым комплексам пептидогликанмономера (PGM) с трехвалентными металлами, способу их получения и их применению в качестве иммуномодуляторов в фармацевтических препаратах.

Известно, что после глубинного культивирования бактерий Brevibacterium divarucatum (NRRL 2311) и Micrococcus glutamicus (ATCC 13287) в присутствии ингибитора биосинтеза клеточной стенки экскрецируются фрагменты пептидогликана, из которых после инкубирования с лизоцимом и фракционирования на молекулярных ситах выделяется пептидогликан-мономер (PGM), N- ацетил-глюкозаминил-N-ацетил-мурамоил-L-аланил-D-изоглютаминил- (L) - мезо-диаминопимелил- (D) -амид) (L) -D-аланил-аланин (патент Югославии 40,472, заявка на патент Австрии 362,740; Carbohydr.Res. 110 (1982), 320-325) формулы I (см. в конце описания),
который демонстрирует иммуностимулирующую и антиметастатическую активность [Z. lmmun.-Forsch. 155 (1979), 312-318; Eur.J.Cancer 0ncol.l9 (1983), 681-686] Наши более ранние исследования показали, что при точно определенных условиях PGM образует комплексы с двухвалентными металлами (заявка на патент Югославии Р-1982/86) чрезвычайно сложной структуры, идентифицированной в соответствии с аналитическими и спектральными данными как, в основном, хелатная структура, которая также характерна для некоторых аминокислот или пептидов [Acta Pharm. Jug. 38 (1988), 310; J. Serb. Chem.Soc.55, (5) (1990), 265-269] Исследования, проведенные M.Tonkovic et al. [Inorganic Chim. Acta 161 (1989), 81-85] показали, что PGM образует в водном растворе при избытке ионов Fe(III) и без коррекции рН раствора комплекс с Fe(III)-ионами совершенно другой структуры. В продолжение нашей работы по указанной проблеме были проведены другие исследования по образованию комплексов PGM с другими трехвалентными металлами при различных условиях.

Неожиданно было обнаружено, что некоторые трехвалентные металлы приводят к получению новых образований с PGM в растворе и при специфическом значении рН. Так, после проведения потенциометрического титрования такие результаты очевидны в отношении алюминия /Al (III)/, родия/ (III)/, лантана /La (III)/ и ванадия /V (III)/, тогда как никаких подобных результатов не обнаружено в отношении железа /Fe (III)/ и висмута /Bi (III)/. (Фиг. 1-4).

На прилагаемых фиг. 1-4 "А" обозначает 0,01М PGM (25 мл), "С" обозначает "А + В", где "В" на фиг. 1 обозначает 0,005М Al³⁺, на фиг. 2 0,005М Rh³⁺, на фиг. 3 0,005М La³⁺ и на фиг. 4 0,005М V³⁺.

Данными потенциометрического титрования установлено, что образованные комплексы обладают различными константами устойчивости, значительно повышенными для алюминиевого комплекса /PGM-Al (III)-K/, а также для ванадиевого комплекса /PGM-V (III)-К/ по сравнению с этими же величинами для двухвалентных металлов (Таблица 2). Это означает возможность существования лучших фармакокинетических характеристик комплексов ионов трехвалентных металлов. Также очевидно, что трехвалентные металлы при различных значениях рН образуют в растворе два разных комплекса (Таблица 1). Предметом настоящего изобретения являются только комплексы с высокими значениями рН.

Также можно отметить существенное различие в получении предлагаемых комплексов трехвалентных металлов по сравнению с исследованиями M.Tonkovic et al. А именно, в условиях, описанных в настоящем изобретении, ионы Fe (III), а также ионы Bi (III) не образуют комплексов с PGM.

Расчет:




Из известного уровня техники не известно описания комплексов PGM с трехвалентными металлами, за исключением железа (III), для соединений пептидогликановой структуры.

Предлагаемое изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Получение комплекса пептидогликан-мономера с алюминием. Пептидогликан-мономер (504,50 мг, 0,50 ммоль) растворяют в 25 мл воды и после добавления Al(NO₃)₃ х 9Н₂О (93,75 мг, 0,25 ммоля) перемешивают в течение 1 часа. рН раствора затем доводят до 4,2 путем добавления 0,1Н NaOH и перемешивание продолжают еще один час. Смесь концентрируют упариванием при пониженном давлении до объема около 2 мл и в течение примерно 1/2 часа прибавляют по каплям 50 мл ацетона через делительную воронку. Получают преципитат белого цвета, который разделяют фильтрацией, тщательно аспирируют, промывают этанолом и сушат при пониженном давлении до получения постоянной массы. Выход 460 мг. ИК^KBR (см^-1): 3400-3260, 3070, 2970, 2920, 1650, 1535, 1380, 1350, 1040, 595. Температура плавления 200^oС (разложение). УФ_макс (Н₂О) (нм) 192, А^1% 608,42 Анализ металла при помощи атомной абсорбционной спектрофотометрии.

Пример 2. Получение комплекса пептидогликан-мономера с родием. В соответствии со способом, описанным в примере 1, за тем исключением, что тригидрат треххлористого родия (RhCl₃ х 3Н₂О, 65,83 мг, 0,25 ммоля) загружают вместо нитрата алюминия, а затем водную гидроокись натрия добавляют до рН 8,0 и раствор перемешивают в течение 2 часов. Выход 490 мг. ИК^KBR (см^-1): 3370-3270, 3070, 2980, 2915, 1650, 1535, 1450, 1370, 1315, 1230, 1160, 1105, 1065, 1040, 535. Температура плавления 200^oС (разложение). УФ_макс (Н₂О) (нм): 192,440 (плечо); А^1% (192 нм) 608,42.

Пример 3. Получение комплекса пептидогликан-мономера с лантаном. В соответствии со способом, описанным в примере 1, за тем исключением, что LaCl₃ х 7Н₂О (92,85 мг, 0,25 ммоля) загружают вместо нитрата алюминия, а затем водную гидроокись натрия добавляют до рН 7,5. Выход 479 мг. ИК^KBR (см^-1): 3400-3240, 3060, 2980, 2915, 1650, 1550, 1425, 1410, 1370, 1315, 1245, 1160, 1110, 1070-1040, 600. Температура плавления 200^o С (разложение). УФ_макс (Н₂О) (нм): 190; А^1% (190 нм) 576,47.

Пример 4. Получение комплекса пептидогликан-мономера с ванадием. В соответствии со способом, описанным в примере 1, за тем исключением, что VCl₃ (39,33 мг, 0,25 ммоль) загружают вместо нитрата алюминия, а затем водную гидроокись натрия добавляют до рН 5,0. Выход: 455 мг. ИК^KBR (см^-1): 3400-3260, 2940, 1670-1650, 1550, 1460, 1380, 1320, 1260-1235, 1120, 1062, 1050, 625. УФ_макс (H₂O) (нм): 194; A^1% (194 нм) 294,54. ЫЫЫ2