ПЯТИЧЛЕННЫЕ ГЕТЕРОЦИКЛИЧЕСКИЕ АМИДИНЫ, ОБЛАДАЮЩИЕ СВОЙСТВАМИ ИНГИБИТОРОВ ТРОМБИНА, СОЕДИНЕНИЯ, СОДЕРЖАЩИЕ ПРОИЗВОДНЫЕ ПЯТИЧЛЕННОГО ГЕТЕРОЦИКЛИЧЕСКОГО АМИДИНА, В КАЧЕСТВЕ СОСТАВНОЙ ЧАСТИ ИНГИБИТОРОВ СЕРИНПРОТЕАЗЫ И ПРОМЕЖУТОЧНЫЕ СОЕДИНЕНИЯ
Изобретение относится к новым ингибиторам тромбина, в частности к
пятичленным гетероциклическим амидинам, соединениям,
содержащим производные пятичленного гетероциклического амидина, в качестве составной части ингибиторов серинпротеазы и промежуточным
соединением. Тромбин относится к группе серинпротеаз
и играет главную роль в качестве концевого фермента в системе свертывания крови. Как внутренняя, так и внешняя система свертывания
крови через несколько стадий усиления приводит к образованию тромбина
из протромбина. Катализируемое тромбином расщепление фибриногена до фибрина затем вызывает свертывание крови и агрегацию
тромбоцитов, которые со своей стороны за счет связывания тромбоцитного фактора
3 и фактора свертывания XIII, а также целого ряда высокоактивных медиаторов усиливают образование тромбина. Образование и действие тромбина представляют собой главные факторы при
возникновении как белых артериальных, так и красных венозных тромбов и поэтому являются потенциально эффективными
точками воздействия для лечения. Ингибиторы тромбина в противоположность гепарину
независимо от кофакторов способны полностью подавлять одновременно действия свободного тромбина, так и также
связанного с тромбоцитами тромбина. При обострении заболевания они могут предотвращать
тромбоэмболию после чрезкожной внутрипросветной коронарной ангиопластики и лизис и служить в качестве
антикоагулянтов при экстра-корпоральном кровообращении (аппарат "сердце - легкие", гемодиализ).
Они также вообще могут служить для профилактики тромбоза, например, после хирургических
вмешательств. Известно, что синтетические производные аргинина оказывают влияние на
ферментативную активность тромбина тем, что они вступают во взаимодействие с активным сериновым
остатком тромбинпротеазы. Особенно пригодными оказываются пептиды на основе Phe-Pro-Arg, в которых
аминокислота с концевой аминогруппой находится в D-форме. D-Phe-Pro-Arg-изопропиловый сложный эфир
описывается как конкурентно действующий ингибитор тромбина (C. Mattson и др., Fo-lia Haematol, Ю9, 43
- 51, 1983). Превращение карбоксильного конца аргинина в альдегид приводит к
усилению ингибирующего действия. Так, описано много аргиналей, которые способны связывать гидроксильную
группу "активного" серина с образованием полуацеталя (европейские заявки 185390, 479489,526877,
542525; международные заявки WO 93/15756, 93/18060). Ингибирующая тромбин эффективность
пептидных кетонов, фторированных алкилкетонов, а также сложных кетоэфиров, производных борной
кислоты, эфиров фосфорной кислоты и амидов - кетокарбоновых кислот также объясняется с точки зрения этого
взаимодействия с серином (европейские заявки 118280,195212, 362002,364344,410411,471651, 589741,293881,
503203, 504064, 530167, международные заявки WO 92/07869, 94 08941). В случае
описанных J. Oleksyszyn и др., J. Med. Chem., 37. 226 - 231 (1994) пептидных сложных
4-амидинофенил-глицинфосфонат- дифениловых эфиров речь идет о необратимых ингибиторах тромбина с недостаточной
селективностью по отношению к другим серинпротеазам. В патенте ФРГ 3108810,
международной заявке WO 93/11152 и европейской заявке 601459 описываются агматин и тем самым производные
аргинина, которые не способны взаимодействовать с активным серином серинпротеаз.
К усовершенствованной разработке относятся международная заявка WO 94/29336, европейская заявка 0 601
459 и международная заявка WO 95/23609, при этом агматиновый остаток заменен ариламидиновым
остатком. Кининогеназы являются серинпротеазами, освобождающими из кининогенов вазоактивные
пептиды, так называемые кинины (брадикинин, каллидин и Met-Lys-брадикинин). Кининогены
представляют собой мультифункциональные протеины, которые встречаются при каскадных реакциях свертывания и
воспаления. В качестве ингибиторов они защищают клетки от разрушения цистеинпротеазами
(Muller Esterl, 1985. FEBS Lett. 182. 310-314). Важными кининогеназами являются калликреин плазмы, калликреин
ткани и трипсин тучных клеток. Кинины такие, как брадикинин и каллидин
являются вазоактивными пептидами, влияющими на множество биологических процессов. Они при воспалительных
процессах играют существенную роль. Вследствие повышения сосудистой проницаемости они приводят
к гипотензии и отекам. Кроме того, они являются очень могущественными вызывающими боль антацоидами и
имеют в качестве клеточных медиаторов в патофизиологии астмы, аллергического ринита и артрита
большое значение (K. D. Bhoola, C.D. Figueroa, K. Worthy, Pharmakological Reviews 1992,44 (1), 1-80). Независимо от механизмов, которые лежат в основе воспалительных процессов, из
кровеносных сосудов вытекает жидкость, содержащая все протеиновые системы циркулирующей крови. Это означает,
что выход плазменной жидкости из сосудов играет роль при заболеваниях таких, как астма,
ринит и при вызываемых воспалительными процессами внутренних болезнях. При этом освобождается в особенности при
аллергических процессах трипсин тучных клеток (Salomonsson и др., Am. Rev. Respir. Dis.,
1992, 146, 1535-1542). Хлорометилкетоны аргинина H-(D)-Pro-Phe-Arg-CH2Cl и
H-(D)- Phe-Phe-Arg-CH2Cl Kettner и Shaw описывают как ингибитор калликреина (Biochem.
1978, 17. 4778-4784 и Meth. Enzym. 1981, 8Q, 826-842). Разные синтетические
производные бензамидинов и бензиламинов оказались ингибиторами калликреина плазмы, при этом бензамидины
обладали существенно более сильным тормозящим действием (F. Markward, S. Drawert, P. Walsmann,
Biochemical Pharmacology 1974, 23, 2247-2256). Эффективным ингибитором для этих
кининогеназ является также PKSI-527, т. е. гидрохлорид M-(транс-4-аминометилциклогексилкарбонил)
-1-фенилаланин-4-карбоксиметил-анилида (Wanaka, Ohamoto и др., Thromb. Res. 1990, 57 (6), 889-895). Задачей изобретения является разработка новых ингибиторов тромбина.
Поставленная задача решается предлагаемыми пятичленными гетероциклическими амидинами общей формулы
(I)
Представленные В производные аминокислоты являются предпочтительно (D)-конфигурированными, в то время
как 3,4- дегидропролин и 4,5-дегидропипеколиновая (L)-конфигурированы.
Предпочтительными являются соединения формулы (I), где группы A - E имеют следующие значения: Особенно предпочтительными являются
соединения формулы (I), в которых A, В, D и E имеют следующие значения. A - HOOC-CH2, HOOC-CH2-CH2, HOOC-CH(CH3), HOOC-CH(C2
H5) D: Следующие соединения являются особенно предпочтительными: Соединения формулы (I) могут иметься в свободном виде или в виде солей с физиологически переносимыми кислотами. Примерами таких кислот являются следующие: соляная кислота, лимонная кислота,
винная кислота, молочная кислота, фосфорная кислота, метансульфокислота, уксусная кислота, муравьиная кислота, малеиновая кислота, фумаровая кислота, янтарная кислота, гидрокси-янтарная кислота,
серная кислота, глутаровая кислота, аспарагиновая кислота, пировиноградная кислота, бензойная кислота, глюкуроновая кислота, щавелевая кислота, аскорбиновая кислота и ацетилглицин.
Новые соединения формулы (I) можно использовать при следующих показаниях: Новые соединения можно использовать в особенности для лечения и профилактики тромбинозависимых
тромбоэмболических заболеваний, как, например, глубокий венозный тромбоз, эмболия легочной артерии, инфаркт миокарда или инсульт и нестабильная стенокардия, далее для лечения диссеминированного
внутрисосудистого коагулирования (ДВС-синдром). Далее они пригодны для комбинированного лечения вместе с тромболитическими средствами, такими, как стрептокиназа, урокиназа, проурокиназа, t-Pa,
активатор антитромбоцитарной иммунной сыворотки и другие плазминогенные активаторы, в целях сокращения времени ре-перфузии и удлинения реокклюзии. Дальнейшими предпочтительными
областями применения являются предотвращение тромбинозависимой ранней реокклюзии и позднего рестеноза после чрезкожной внутрипросветной коронарной ангиопластики, предотвращение индуцируемой тромбином
пролиферации гладномышечных клеток, предотвращение аккумуляции активного тромбина в центральной нервной системе (например, в случае болезни Альцгеймера), лечение опухолевых заболеваний и нарушение
механизмов, приводящих к адгезии и метастазированию опухолевых клеток. Новые соединения можно также использовать для покрытия искусственных поверхностей, таких, как мембраны
гемодиализа и необходимые для этого системы мягких трубок и проводящие линии, а также оксигенаторов внесосудистой циркуляции, расширяющих элементов и сердечных клапанов. Новые
соединения можно применять далее в случае аболеваний, патомеханизм которых непосредственно или косвенно основывается на протеолитическом действии кининогеназ, в особенности калликреина, например, в
случае воспалительных заболеваний, таких, как астма, панкреатит, ринит, артрит, крапивная лихорадка и другие воспалительные заболевания. Предлагаемые согласно изобретению соединения
можно вводить обычным образом перорально или парентерально (подкожно, внутривенно, внутримышечно, интраперитонеально, ректально). Их также можно вводить с помощью паров или спреев через
носоглотку. Дозировка зависит от возраста, состояния и массы пациента, а также от способа введения. Как правило, суточная доза активного вещества в расчете на одного субъекта
составляет от 10 до 2000
мг при введении парентерально. Эту дозу можно вводить в виде двух-четырех разовых доз или один раз в день в виде лекарственной формы продленного действия.
Новые соединения можно
использовать в обычных галеновых, твердых или жидких лекарственных формах, например, как таблетки, таблетки в целлофановой упаковке, капсулы, порошки, грануляты, драже,
суппозитории, растворы, мази,
кремы или спреи. Их можно получать обычным образом. Активные вещества при этом можно перерабатывать вместе с обычными галеновыми вспомогательными средствами, такими, как
связующие таблеток,
наполнители, консерванты, порофоры для таблеток, агенты регулирования текучести, мягчители, смачиватели, диспергаторы, эмульгаторы, растворители, средства для придания
лекарственной форме
пролонгированного действия, антиоксиданты и/или пропелленты (см. Н. Sucker и др. Фармацевтическая технология, изд. Thieme, Штуттгарт, 1978). Таким образом полученные лекарственные
формы обычно
содержат активное вещество в количестве от 0,1 до 99 мас. %. Экспериментальная часть Структурные
элементы A, B, E и D предпочтительно строятся отдельно, а затем их вводят в пригодном защищенном виде (см. схемы I - III в конце описания). Схема I описывает
линейное строение молекулы
(I) путем сочетания амина H-D-CN с M-защищенной аминокислотой P-E-OH с получением P-E-D-CN, отщепления N-концевой защитной группы с получением H-E-D-CN, сочетания с
N-защищенной аминокислотой P-В-ОH с
получением P-B-E- D-CN, отщепления защитной группы P с получением H-B-E-D-CN, последующего алкилирования с также защищенным структурным элементом (P)-A-U (U ==
уделяемая группа) или восстановительного
алкилирования с (P)-A'-U (U = альдегид, кетон) или присоединения по Михаэлу к пригодному производному (P)-A''-C= C с получением (P)-A-B-E-D-CN. Превращение
нитрильной функции в амидиногруппу
осуществляется либо путем классического синтеза Пиннера (R. Boder, D.G. Neilson, Chem. Rev., 1962, 61. 179) либо путем модифицированного синтеза Пиннера, который
протекает через образование соли
сложного иминотиоэфира в качестве промежуточной стадии (Н. Vie-weg и др., Pharmazie, 1984, 39. 226) или прямо по методу A. Eschenmoser, Helv. Chimica Acta, 69. (1986),
1224. После этого в молекуле еще
имеющиеся защитные группы отщепляют предпочтительно путем гидролиза в кислой среде. В случае если структурный элемент D вводится в виде H-D-CONHg в
синтез, то в одной из защищенных
промежуточных стадий осуществляется дегидратация амидной функции до нитрильной функции или превращение до тиоамидных функций. Структурный элемент D можно
альтернативно вводить в виде H-D-CSNH2 в синтез. Схема II описывает линейное строение молекулы 1 путем алкилирования, восстановительного аминирования или присоединения по
Михаэлу H-P-В к соответственно пригодным
незащищенным или защищенным структурным элементам A с получением (P)-A-В-Р, отщепления C-концевой защитной группы с получением (P)-A-В-ОH, сочетания с H-Е-Р с
получением (P)-A-В-Е-Р, отщепления
C-концевой защитной группы с получением (P)-A-В-Е-ОН, сочетания с H-D-CN с получением (P)-A-E-C-D-CN и превращения этого промежуточного продукта до конечного
продукта аналогично схеме 1. В случае если при соединениях (P)-A-В-P имеется еще свободная NH-функция у В, то последней еще до отщепления C-концевой защитной группы следует придавать
пригодную защитную группу.
Используемые в данном случае защитные группы должны быть ортогональными по отношению друг другу. Вместо структурного элемента H-D-CN можно альтернативно
использовать также H-D-CONH2, H-D-CSNH2, H-D-C(NH) NH2, H-D-C(NP)NH2, H-D-C(NP)NHP, причем в первом случае сочтенный промежуточный продукт
(P-A-B-E-D-CONH2 подвергается
дегидратации до (P)-A-B-E-D-CN или же превращается прямо до (P)-A-B-E-D-CSNH2. Схема III описывает очень эффективный способ
получения соединений 1 путем конвергентного
синтеза. Соответственно защищенные структурные элементы (P)-A-В-ОН и H-E-D-CN сочетаются друг с другом, а образуемый промежуточный продукт (P)-A-B-E-D-CN
превращается аналогично схеме I до конечного
продукта. Вместо H-E-D-CN можно альтернативно использовать также H-E-D-CONH2 или H-E-D-CSNH2, причем в первом случае
сочтенный промежуточный продукт
(P)-A-B-E-D-CONH2 подвергается дегидратации до (P)-A-B-E-D-CN или же превращается до (P)-A-B-E-D-CSNH2. В качестве N-концевых
защитных групп используют
трет.- бутоксикарбонил, бензилоксикарбонил или 9-флуоренил- метоксикарбонил, предпочтительно трет. -бутоксикарбонил. C-концевыми защитными группами являются метил,
трет.-бутил и бензил. В случае, если
в молекуле имеются несколько защитных групп, то они должны быть ортогональными по отношению друг другу. Если промежуточные продукты содержат структурный элемент E,
то бензилоксикарбонильные и
бензиловые защитные группы являются непригодными. Необходимые реакции сочетания, а также обычные реакции введения и удаления защитных групп осуществляют в
стандартных условиях химии
пептидов (см. М. Bodanszky, A. Bodanszky "The Practice of Peptide Synthesis", второе издание, изд. Springer, Гейдельберг, 1994 г.). Трет.
-бутоксикарбонильные защитные группы отщепляют
с помощью раствора хлороводорода в диоксане или трифторуксусной кислоты в дихлорметане, бензилоксикарбонильные защитные группы отщепляют путем
гидрогенолиза или с помощью фтороводорода. Омыление
сложноэфирных функций осуществляют с помощью гидроксида лития в спиртовом растворителе или в смеси диоксана с водой. Сложный трет.-бутиловый эфир
отщепляют с помощью трифторуксусной кислоты или с
помощью смеси диоксана с соляной кислотой. За протеканием реакций следят с помощью тонкослойной хроматографии, причем обычно
используют следующие растворители: Б. Смесь дихлорметана с метанолом в соотношении 9:1. В. Смесь
дихлорметана с метанолом в соотношении 8:2.
Г. Смесь дихлорметана с метанолом и 50%-ной уксусной кислотой в соотношении 40:10:5. Д. Смесь дихлорметана с метанолом и
50%-ной уксусной кислотой в соотношении 35:15:5.
Когда упоминают разделения с помощью колоночной хроматографии, эти разделения осуществляют на силикагеле при использовании
вышеуказанных растворителей. Разделения с помощью
высокоэффективной жидкостной хроматографии с обращенной фазой проводят при использовании смеси ацетонитрила с водой и уксуснокислого
буфера. Исходные соединения можно получать
следующими способами: Структурные элементы B: Часто используемыми эдуктами являются этиловый
эфир бензофенониминоуксусной кислоты, диэтиловый эфир
ацетамидомалоновой кислоты и этиловый эфир изонитрилуксусной кислоты. Различные производные глицина и аланина получают, например,
исходя из этилового эфира изонитрилуксусной кислоты и
соответствующего кетона или альдегида (см. H. - J. Pratorius, J. Ftossdorf, M.- R. Kula, Chem Ber., 108. 3079 (1975)). Синтезы
циклооктилглицина, 2-норборнилглицина, адамантилаланина,
γ--метил-циклогексилаланина, 4- изопропилциклогекс-1-ил-аланина, 4-метилциклогекс-1-ил-аланин и 4- метилциклогекс-1-илглицин
осуществляют через соответствующие этиловые эфиры
2-формиламиноакриловой кислоты (U. Schollkopf и R. Meyer, Liebigs Ann. Chem., 1174 (1977)), исходя из этилового эфира изоцианоуксусной кислоты с
соответствующими карбонильными соединениями, как
циклооктанон, 2-норборнанон, 1-формиладамантан, 1-формил-1-метилциклогексан и 4-метилциклогексанон, по следующим общим методикам: Общая методика синтеза гидрохлоридов аминокислот из
этиловых эфиров 2-формиламиноакриловых
кислот Исходя из 18,9 г (150 ммоль) циклооктанона получают 25,0 г циклооктилглицин-гидрохлорида.
Исходя из 16,5 г (150 ммоль)
2-норборнанона получают 26,6 г 2-норборнилглицин-гидрохлорида. Исходя из 19,7 г (120 ммоль) 1-формиладамантана получают 26,0 г адамантилаланин-гидрохлорида. Исходя из 12,
6 г (100 ммоль)
1- формил-1-метилциклогексана получают 16,6 г γ-метилциклогексил- аланин-гидрохлорида. Исходя из 16,8 г (150 ммоль) 4- метилциклогексанона получают 25,9 г
метилциклогексилглицин- гидрохлорида.
Исходя из 15 г транс-1-формил-4-метилциклогексана получают 18 г транс-4-метилциклогекс-1-илаланин-гидрохлорида. Исходя из 9 г 3,3-диметил-1-формилциклогексана
получают 10 г 3,
3- диметилциклогекс-1-илаланин-гидрохлорида. Требуемый для синтеза альдегид, 1-формил-3,3- диметилциклогексан получают по методу Moskal и Lensen (Rec. Trav. Chim.
Pays-Bas, 137-141,
106. (1987)). Раствор н. -бутиллития в н.-гексане (72 мл, 115 ммоль) прикапывают при температуре -60oC к перемешанному раствору
диэтилизоцианометилфосфоната (17 мл, 105
ммоль) в 280 мл безводного диэтилэфира в течение 10 мин. Образовавшуюся суспензию при -60oC дополнительно перемешивают в течение 15 мин, затем к
смеси прибавляют раствор 3,
3-диметилциклогексанона (13 г, 105 ммоль) в 100 мл безводного диэтилового эфира в течение 10 мин, при этом температуру держат ниже -45oC. Реакционную смесь
доводят до температуры 0oC, перемешивают при той же температуре в течение 90 мин и осторожно добавляют к смеси 150 - 200 мл 38%-ной водной соляной кислоты. Для осуществления полного
гидролиза сильно перемешивают при
комнатной температуре в течение 15 ч. Реакционную фазу отделяют, промывают водой, насыщенным раствором гидрокарбоната натрия и насыщенным раствором хлористого натрия,
взятыми в количестве по 200 мл.
Затем сушат над сульфатом магния, отфильтровывают и сгущают на ротационном испарителе с целью удаления растворителей. Получаемый остаток используют без дальнейшей
очистки в качестве исходного
материала для синтеза аминокислоты. Трет.-бутилоксикарбонил-(D)- α -метилциклогексилаланин 1H-ЯМР-спектр (дейтерированный диметилсульфоксид, δ в м.д.): 12 (очень
широкий сигнал, COOH): 1,7 - 0,8 (25 H (с, Вос),
1,30 (с, метил). Boc-(3-Ph)-Pro-OH синтезируют согласно J.Y.L Chung и др. (J.Y.L Chung и др., J. Org. Chem. 55, 270 (1990)). Получение Вос-1-тетралинилглицина Получение Boc-1-(D,L)Tic-OH Получение Boc-(D.L)Dch-OH Получение циклогептилглицина, циклопентилглицина,
4- изопропилциклогексилглицина и 3,3-диметилциклогексилглицина Получение H-D,L-Chea-OH
Получение D-(1,4-циклогексадиен-1-ил)ala-OH осуществляют согласно
G. Zivi-lichovsky, V. Gurvich, J. Chem. Soc. , Perkin Trans, 19. 2509-15 (1995)). Получение H-(D,L)- ββ
-Me2Cha-OH осуществляют согласно U. Schollkopf, R.
Meyer, L Ann. Chem., 1977. 1174-82. Указанные аминокислоты по обычным способам с помощью ди- трет.бутил-дикарбоната в
смесь воды и диоксана переводят в данном случае в Вос-защищенную
форму и затем перекристаллизовывают из смеси этилацетата и гексана или очищают путем колоночной хроматографии на силикагеле с
применением в качестве растворителя смеси этилацетата и петролейного
эфира. Вос-защищенные аминокислоты используют в качестве структурных элементов В соответственно схеме I в конце
описания. Указанные аминокислоты частично переводят в
качестве структурных элементов В также в соответствующие сложные бензиловые эфиры и сочетают их с соответствующими защищенными
структурными элементами A. В случае, если соединения имеют еще свободную
N-Н-функцию, то последнюю затем защищают трет. -бутоксикарбонильной группой, группу сложного бензилового эфира удаляют
гидрированием и структурный элемент A-В-OH очищают путем кристаллизации,
осаждения соли или колоночной хроматографии. Этот способ в нижеследующем описывается примерно для tBuOOC-CH2
-(Boc)(D)Cha-OH. Синтез сложного бензилового эфира
D-циклогексилаланина Сложный
бензиловый эфир
N-(трет.-бутилоксикарбонилметилен)-D-циклогексилаланина Сложный бензиловый эфир N-Вос-N-(трет.-бутилоксикарбонилметилен) -D-циклогексилаланина N-Boc-N-(трет. -бутилоксикарбонилметилен)-D-циклогексилаланин- циклогексиламмониевая соль N-Вос-N-(трет.
-бутилоксикарбонилметилен)-D-циклогексилглицин-циклогексиламмониевую соль получают аналогичным образом из циклогексилглицина в качестве эдукта.
N-Bос-N-(трет.-бутилоксикарбонилэтилен)-D-циклогексилаланин- циклогексиламмониевая соль б) Сложный
бензиловый эфир N-(трет.-бутилоксикарбонилэтилен) -D-циклогексилаланина в) Сложный бензиловый эфир N-Boc-N-(трет.-бутилоксикарбонилэтилен)-D-циклогексилаланина г) N-Boc-N-(трет.
-бутилоксикарбонилэтилен)-D- циклогексилаланин-циклогексиламмониевая соль N-Вос-N-(трет.
-бутилоксикарбонилметилен)-(D)-циклогексилаланил- 3.4-дегидропролин
б) N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-OH (8 г, 20,75 ммоль) растворяют в дихлорметане (78 мл), при температуре -10oC добавляют этилдиизопропиламин (15,5 мл, 89,24 ммоль).
Перемешивают при той же температуре в течение 5 мин, а затем прикапывают раствор H-Pyr-OMe гидрохлорида (3,4 г, 20,75 ммоль) в дихлорметане (25 мл). После этого прикапывают 50%-ный раствор ангидрида
пропанфосфоновой кислоты в этилацетате (20 мл, 26,96 ммоль) и перемешивают при от -10 до 0oC в течение 2 ч. Исходную смесь разбавляют дихлорметаном и промывают два раза насыщенным
раствором
гидрокарбоната натрия, взятым в количестве по 80 мл, два раза 5%-ным раствором лимонной кислоты, взятым в количестве по 15 мл, и раз насыщенном раствором хлористого натрия (20 мл).
Органическую фазу
сушат над сульфатом натрия и растворитель отгоняют на ротационном испарителе. Сырой продукт очищают путем хроматографии на колонне, содержащей силикагель с применением в качестве
элюента смеси
дихлорметана и метанола в соотношении 95:5. Выход: 6,2 г (60%). в) N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-Pyr-OMe (5,5 г, 11,12 ммоль) растворяют в диоксане
(78 мл), затем
прибавляют натровый щелок (1N, 22, 2 мл 22,24 ммоль) и перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч. Диоксан отгоняют на ротационном испарителе, водную фазу промывают
этилацетатом и подкисляют
с помощью 20%-ного раствора гидросульфата натрия до значения pH 1-2. Водную фазу экстрагируют дихлорметаном и объединенные органические фазы сушат над сульфатом натрия.
Выход: 5 г (94%) бесцветной
пены. Путем перекристаллизации из насыщенного водой н-гексана получают бесцветные кристаллы (точка плавления: 158 - 160oC). N-Вос-N-(трет.
-бутилоксикарбонилметилен)-(D)- циклогексилглицин-3,4-дигидропролин Используемый в качестве структурного элемента E (L) 3,4- дегидропролин можно приобретать в торговле, a (D,L)-4,5- дегидропипеколиновую кислоту
можно получать согласно A. Burgstahler, C.E. Aiman, J. Org. Chem., 25., 489 (1960) или C. Herdeis, W. Engel, Arch. Pharm. 326,297 (1993), а затем с помощью (Boc)2O переводить в Boc-(D,
L)-Dep-OH. Синтез структурных элементов D осуществляют согласно следующим методам: 4-аминометил-2-цианотиофен б) 2-циано-4-формилтиофен в) 2-циано-3-гидрометилтиофен Органическую фазу сушат над сульфатом натрия и сгущают в вакууме. Получают 11,7 г почти чистого продукта с выходом 91,5%. г)
3-бромметил-2-цианотиофен
д) 4-N,N-бис(трет.-бутоксикарбонил)-аминометил-2-цианотиофен е)4-аминометил-2-цианотиофен-гидрохлорид 2-аминометил-4-цианотиофен б)
4-цианотиофен-2-карбальдегид-оксим в) 2-аминометил-4-цианотиофен-гидрохлорид Гидрохлорид амида 5-аминометил-3,4-диметил-тиофен-2- карбоновой кислоты Амид 5-аминометил-изоксазол-3-карбоновой кислоты
б) 5-хлорметил-изоксазол-3-карбоновая кислота в) Хлорид
5-хлорметил-изоксазол-3-карбоновой кислоты г) Амид
5-хлорметил-изоксазол-3-карбоновой кислоты д) Гидрохлорид амид 5-аминометил-изоксазол-3-карбоновой кислоты 2-аминометил-тиаэол-4-тиокарбоксамид получают согласно G. Videnov, D. Kaier, C.
Kompter и G. Jung, Angew. Chemie, (1996) 108, 1604,
при этом описанному там же защищенному N-Boc соединению лишают защиту с помощью эфирной соляной кислоты в хлористом метилене.
4-аминометил-тиазол-2-тиокарбоксамид 5-аминометил-2-цианофуран 1H-ЯМР (270 мГц, d6-ДМСО): δ = 7,7 (д, 1H), 7,8 (д, 1H), 9,75 (с, 1H). б) 5-гидроксиметил-2-цианофуран 1H-ЯМР (250 мГц, d6-ДМСО): δ = 4,4 (м,2H), 5,6 (бс, 1H), 6,6
(д, 1H), 7,
5 (д, 1H). в) 5-бромметил-2-цианофуран 1H-ЯМР (250 мГц, d6-ДМСО): δ = 4,8 (м,
2H),
6,7 (д, 1H), 7,7 (д, 1H). г) 5-N,N-бис(трет.-бутоксикарбонил)аминометил-2-цианофуран 1H-ЯМР (250 мГц, d6-ДМСО): δ = 1,40, 1,45 (с, 18H), 4,75 (с, 2H), 6,55 (д, 1H), 7,55 (д, 1H). д) 5-аминометил-2-цианофурангидрохлорид 1H-ЯМР (250 мГц, d6-ДМСО): δ = 4,15 (бс, 2H), 6,85 (д, 1H), 6,65 (д, 1H), 8,8 - 9,0 (бс, 3H).
5-аминометил-3-цианофуран б) Сложный этиловый эфир 4,4-диэтоксипентановой кислоты в) Смесь 106,3 г (0,
489 моль) сложного
этилового эфира 4,4- диэтоксипентановой кислоты и 80 мл (73,6 г, 0,99 моль) этилформиата при интенсивном перемешивании и 10-15oC добавляют каплями к суспензии 12,7 г (0,
55 грамм-атом)
(тонкослоистого) натрия в 300 мл безводного бензола в течение 3 ч. Перемешивание продолжают в течение дальнейших 3 ч и реакционной смеси дают стоять в течение ночи. Добавляют 250 мл
воды при
интенсивном перемешивании, которое продолжают в течение дальнейших 15 мин. Водяной слой отделяют, а бензольный слой экстрагируют 70 мл воды. Объединенные водяные экстракты подкисляют до
значения pH 2,
затем их экстрагируют пять раз этилацетатом, взятым в количестве по 50 мл, органические экстракты сушат над хлоридом кальция. Раствор этилацетата перегоняют в вакууме, собирают фракцию
с точкой
кипения 102-110oC/ 1 мм рт. ст. Эта фракция представляет собой смесь сложного этилового эфира 2-формиллевулиновой кислоты и его диэтилкеталя. Соотношение компонентов смеси зависит
от
интенсивности перемешивания и времени разделения фаз при выделении продуктов формилирования. Бензольный слой сушат также над хлоридом кальция, растворитель удаляют и остаток
перегоняют при пониженном давлении. После этого полученную смесь сложного этилового эфира левулиновой кислоты и кеталя обрабатывают вместо чистого сложного эфира левулиновой кислоты таким же образом,
как описывается под б). Стадии (2) и (3а) повторяют, пока не будет получено требуемое количество сложного этилового эфира 2-формиллевулиновой кислоты. г) Сложный этиловый эфир
5-метилфуран-3-карбоновой кислоты д) 5-метилфуран-3-карбоновая кислота е) Хлорид
5-метилфуран-3-карбоновой
кислоты ж) Амид 5-метилфуран-3-карбоновой кислоты з) 5-метил-3-цианофуран и) 5-бромметил-3-фуранкарбонитрил Растворитель удаляют при пониженном давлении, остаток перегоняют в вакууме, при этом
получают 12,7 г (86 ммоль, 57%)
5- бромметил-3-фуранкарбонитрила с точки кипения 105oC/1 мм рт.ст. По спектру1H-ЯМР соединение содержит загрязнения, которые при δ 1,3 и
2,2 создают сигналы. После второй
перегонки содержание является более низким и удовлетворительным, однако в результате потеряют примерно 15% продукта. 5-бромметил-3-фуранкарбонитрил представляет
собой кристаллическое вещество белого
цвета. Точка кипения: 40 - 45oC,1H-ЯМР (CDCl3, млн.дол.): 4,41 (2H, CH2), 6,85 (1H, H4), 7,92 (1H, H2):13
C-ЯМР (CDCl3, млн.дол.): 20,
86 (CH2), 99,03 (CN или меньше, по вероятности C3), 109,97 (C4), 112,27 C3 (или CN)), 149,84 (C2), 152,32 (C5). Реакционный продукт
обладает сильной раздражающей
способностью, вследствие чего требуется чрезвычайно осторожное обращение с ним. Синтез 5-N,N-,бис(трет.-бутоксикарбонил)аминометил-3- цианофурана
осуществляют аналогично синтезу 5-N,
N-,бис(трет.- бутоксикарбонил)аминометил-2-цианофурана. Последующее отщепление трет.-бутоксикарбонильных групп проводят в насыщенном растворе хлористого водорода в
хлороформе.
Гидроацетат 2-амидино-5-(N-Вос-аминометил)-1-метилпиррола К 17,5 мл (124,38 ммоль)
диизопропиламина в атмосфере
азота в 100 мл тетрагидрофурана прикапывают при -78oC 75,9 мл (124,38 ммоль) 15%-ного раствора н. -бутиллития в гексане. После этого перемешивают при -20oC в течение 45 мин, а
затем охлаждают до -78oC. При той же температуре прикалывают раствор 12 г (113,07 ммоль) N-метилпиррол-2-карбонитрила в 50 мл тетрагидрофурана. После
перемешивания при -78oC в
течение 45 мин прикапывают 43,9 мл (546,46 ммоль) диметилформамида и перемешивают при той же температуре в течение дальнейших двух ч. После добавки 20,56 г
моногидрата лимонной кислоты нагревают до
комнатной температуры и к смеси прибавляют 112 мл воды. Тетрагидрофуран отгоняют на ротационном испарителе, водную фазу насыщают хлоридом натрия и три раза
экстрагируют диэтиловым эфиром, взятым в
количестве по 200 мл. Объединенные органические фазы промывают насыщенным раствором хлорида натрия и сушат над сульфатом натрия. Растворитель б) 5-гидроксиметил-1-метилпиррол-2-карбонитрил 1H-ЯМР (CDCl2) δ = 1,9 (т, 1H), 3,75 (с, 3H), 4,6 (д, 2H), 6,1
(д, 1H), 6,7 (д, 1H). в)
5-азидометил-1-метилпиррол-2-карбонитрил 1H-ЯМР (CDCl3) δ 3,75 (с,
3H), 4,35 (с, 2H), 6,2 (д, 1H), 6,7 (д,
1H). г) 5-аминометил-1-метилпиррол-2-карбонитрил 1H-ЯМР (CDCl3) δ = 3,75 (с, 3H), 3,85 (с, 2H), 6,05 (д, 1H), 6,7 (д, 1H). д)
5-(N-Вос-аминометил)-1-метилпиррол-2-карбонитрил 1H-ЯМР (CDCl3) δ = 1,45 и 1,55 (в кажд. случае с, вместе 9H), 3,7 (с, 3H), 4,3 (д, 2H), 4,7 (шир.с, 1H), 6,05 (д. 1H), 6,7 (д, 1H). е)
5-(N-Вос-аминометил)-1-метилпиррол-2-гидроксиамидин 1H-ЯМР (CDCl3) δ = 1,4 (с, 9H), 3,7 (с, 3H), 4,3 (д, 2H), 4,7 - 4,9 (м, 3H), 6,05 (д, 1H),
6,3 (д, 1H), 7,
3 (шир.с, 1H). ж) Гидроацетат 2-амидино-5-(N-Вос-аминометил)-1-метилпиррола Масс-спектр: бомбардировка быстрыми атомами (M+H+):253. Гидроацетат 2-амидино-4-(N-Вос-аминометил)-1-метилпиррола 1H-ЯМР (CDCl3) δ = 3,8 (с, 3H); 7,2 (с, 1H); 7,4 (с, 1H): 9,85 (с, 1H). б)
Исходя из 5-циано-1-метилпиррол-3-карбальдегида получают 4-аминометил-1-метилпиррол-2-карбонитрил аналогично синтезу 5- аминометил-1-метилпиррол-2-карбонитрила. Однако восстановление
4-азидометил-1-метилпиррол-2-карбонитрила осуществляют предпочтительно через реакцию Штаудингера (см., напр., S. Nagarajan и др., J. Org. Chem., 1987, 52, 5044-6). в) Исходя из
4-аминометил-1-метилпиррол-2-карбонитрила получают гидроацетат 2-амидино-4-(N-Вос-аминометил)-1- метилпиррола аналогично синтезу гидроацетата 2-амидино-5-(N-Вос-аминометил)-1-метилпиррола. Масс-спектр: бомбардировка быстрыми атомами (M+H+): 253. Гидроацетат 2-амидино-(N-Вос-аминометил)-1-метилпиррола 1H-ЯМР (CDCl3) δ = 4,0 (с, 3H); 7,2 (с, 1H); 7,3
(с, 1H); 9,6 (с, 1H). 13C-ЯМР (CDCl3) δ = 37,4; 94,1; 114,7; 125,8; 132,2; 135,8; 179,7. б) Исходя из
4-циано-1-метилпиррол-2-карбальдегида получают 5-амино-метил-1-метилпиррол-3-карбонитрил аналогично синтезу гидроацетата 2-амидино-5-(N-Вос-аминометил)-1-метилпиррола. 1
H-ЯМР (ДМСО-d6) δ = 3,6 (с, 3H): 3,8 (с, 2H); 4,2 (шир.с, 2H): 6,4 (с, 1H), 7,6 (с, 1H). в) Исходя из 5-аминометил-1-метилпиррол-3-карбонитрила получают гидроацетат
3-амидино-5-(N-Вос-аминометил)-1- метилпиррола аналогично синтезу гидроацетата 2-амидино-5-(N-Вос-аминометил)-1-метилпиррола. Масс-спектр: бомбардировка быстрыми атомами (M+H+):253. Гидрохлорид 5-аминометил-3-циано-1,2,4-оксадиазола б) Гидрохлорид 5-аминометил-3-циано-1,2,4-оксадиазола 1H-ЯМР (ДМСО-d6) δ = 4,6 (с, 2H); 9,2 (с, 3H). Амид
N-метил-5-аминометил-пиразол-3-карбоновой кислоты б) Сложный метиловый
эфир N-метил-5-циано-пиразол-3-карбоновой кислоты
Масс-спектр: электронная ионизация (M+):165. в) Амид N-метил-5-циано-пиразол-3-карбоновой кислоты 1H-ЯМР (ДМСО-d6) δ = 4,0 (с, 3H): 7,4 (с, 1H); 7,5 (с, 1H): 7,8 (с, 1H). г) Амид
N-метил-5-аминометил-пиразол-3-карбоновой
кислоты Масс-спектр: электронная ионизация (M+): 154. Пример 1: б) N-(трет.
-бутоксикарбонил-метилен)-(N-Вос)- (D)-циклогексилаланил-3,4-дегидропролил-5-(2-циано)-тиенилметиламид в) N-(трет.
-бутоксикарбонил-метилен)-(N-Boc)-(D)- циклогексилаланил-3,
4-дегидропролил-5-(2-амидотиокарбонил) -тиенилметиламид г) Гидройодид N-(трет.-бутоксикарбонил-метилен)-(N-Вос)-(D)- циклогексилаланил-3,
4-дегидропролил-5-(2-S-метилимидокарбонил)- тиенилметиламида д)
Гидроацетат N-(трет.-бутоксикарбонил-метилен)-(N-Вос)-(D)- циклогексилаланил-3,
4-дегидропролил-5-(2-амидино)-тиенилметиламида е) Гидроацетат
N-(гидроксикарбонил-метилен)- (D)-циклогексилаланил-3,4-дегидропролил-5-(2-амидино)-тиенилметиламида Масс-спектр; бомбардировка быстрыми
атомами (M+H+): 462
Пример 3:
Пример 4: Превращение
нитрильной функции до амидиновой группы и последующее
отщепление защитной группы осуществляют аналогично примеру 1. Пример 5: Пример 6: Пример 7а: Пример 8: Пример 9: Пример 10: Пример 11: Пример 12: Масс-спектр: бомбардировка быстрыми атомами (M+H+): 615. б) Полученный согласно а) продукт (559 мг, 0,845 ммоль) растворяют в 50 мл дихлорметана, и
раствор при
0-5oC насыщают хлороводородным газом. Затем перемешивают при 0oC в течение полтора часа. Растворитель отгоняют на ротационном испарителе, и сырой продукт
лиофилизируют. Выход:
450 мг (100%). Масс-спектр: бомбардировка быстрыми атомами (М+H+): 615. Пример 15: Масс-спектр: бомбардировка быстрыми
атомами (М+H+): 459. Пример 16: Масс-спектр: бомбардировка быстрыми атомами (М+H+): 459. Пример 17: 1H-ЯМР (ДМСО-d6) δ = 0,5 - 2,0 (м, 31H), 3,1 - 5,5 (м, 8H), 5,8 - 6,2 (м, 2H), 8,5 - 9,3
(м,
3H), 9,8 (шир.с, 1H). б) Гидроацетат N-трет.-бутоксикарбонил-метилен)-(N-Вос(D)- циклогексилаланил-3,4-дегидропролил-2-(4-амидино)-оксазолметиламида Масс-спектр: бомбардировка
быстрыми атомами (М+H2): 603. в) Гидроацетат N-(гидроксикарбонил-метилен)-(D)- циклогексилаланил-3,4-дегидропролил-2-(4-амидино)- оксазолметиламида 1H-ЯМР (ДМСО-d6)
δ = 168.6, 167.8, 166.2, 162.2, 156.4, 144.7, 129.6, 127.7, 125.5, 67.9, 55.0, 53.5, 45.3, 36.4, 35.7, 33.0, 32.5, 32.0, 25.7, 25.4, 25.2. Пример 18: Масс-спектр: бомбардировка быстрыми атомами (М+H+):
587. б) Гидроацетат N-(трет. -бутоксикарбонил-метилен)-(N-Вос)-(D)- циклогексилаланил-3,4-дегидропролил-5-(3-амидино)-1,2,4- оксадиазолметиламида Масс-спектр: бомбардировка быстрыми атомами (М+H+): 604. в) Гидрохлорид
N-(гидроксикарбонил-метилен)-(D)- циклогексилаланил-3,4-дегидропролил-5-(3-амидино)-1,2,4- оксадиазолметиламида Масс-спектр: бомбардировка быстрыми атомами (М+H+): 448.
Пример 19: Масс-спектр: бомбардировка быстрыми атомами (М+H+): 617. б) N-(трет. -бутоксикарбонил-метилен)-(N-Вос)-(D)- циклогексилаланил-3,
4-дегидропролил-5-(3-циано-N-метил)-1,2,4- пиразолметиламид в) Гидроацетат N-(трет. -бутоксикарбонил-метилен)-(N-Вос)-(D)- циклогексилаланил-3,
4-дегидропролил-5-(3-амидино-N-метил)- пиразолметиламида г) Гидрохлорид N-(гидроксикарбонил-метилен)-(D)- циклогексилаланил-3,4-дегидропролил-5-(3-амидино-N- метил)пиразолметиламида Масс-спектр: бомбардировка быстрыми атомами (М+H+): 460.
Пример 20: Гидроацетат
N-(трет.-бутоксикарбонилметилен)-(N-Вос)-(D)- циклогексилаланил-3,4-дегидропролил-5-(3-амидино-N-метил)- изоксазолметиламида Путем снятия защитной группы с очищенного продукта с помощью эфирной соляной кислоты получают целевое соединение. Масс-спектр: бомбардировка быстрыми атомами (М+H+): 448. Пример 21: Получение осуществляют аналогично примеру 1, при этом исходят из эдуктов 2-аминометил-тиазол-4-тиокарбоксамид и
N-Boc-N-трет.- бутилоксикарбонилметилен)-(D)-циклогексилаланил-3,4- дегидропролин. Пример 22: Пример 23:
Получение осуществляют аналогично примеру 1, при этом исходят из эдуктов 4-аминометил-тиазол-2-тиокарбоксамид и N-трет. - бутилоксикарбонил-метилен)-N-Вос-(D)-циклогексилаланил-3,4- дегидропролин. Пример 24: Получение осуществляют аналогично примеру 1, при этом исходят из эдуктов 4-аминометил-тиазол-2-тиокарбоксамид и N-трет.
- бутилоксикарбонил-метилен)-N-Вос-(D)-циклогексилглицил-3,4- дегидропролин. Пример 25: Получение осуществляют аналогично примеру 21. Пример 26: Получение осуществляют аналогично примеру 22. Пример 27: Получение осуществляют аналогично примеру 23. Пример 28: Получение осуществляют аналогично примеру 24. Пример 29: Масс-спектр: ионизация электронным ударом
(М+H+): 491. 13C-ЯМР (ДМСО; [млн. доли] ): 171.89, 169.02, 166.29, 166.19, 157.26, 141.44, 128.75, 127.93, 125.30, 68.04, 61.60, 55.18, 53.64, 45.29, 40.41,
36.21, 32.93,
32.53, 32.04, 25.69,25.40,25.21,13.85. Дигидрохлорид N-(изопропилоксикарбонил-метилен)-(D)- циклогексилглицил-3,
4-дегидропролил-[2-(4-амидино-3-хлор)- тиофен]метиламида Дигидрохлорид
N-(н-гексилоксикарбонил-метилен)-(D)- циклогексилаланил-3,
4-дегидропролил-[2-(4-амидино)- тиазол]метиламида Дигидрохлорид N-(2,
2-диметилпропилоксикарбонил- метилен)-(D)-циклогексилаланил-3,4-дегидропролил-[2-(4-амидино)- тиазол]метиламида Ингибирующие тромбин свойства соединений общей формулы (I) иллюстрируются результатами следующего опыта. Опыт Исследуемые соединения и результаты опыта сведены в таблице. Соединения согласно изобретению относятся
к категории малотоксичных веществ. Описываются
новые пятичленные гетероциклические амидины формулы (I), где А, В, D и Е имеют следующие значения: 1. Пятичленные гетероциклические амидины общей формулы (I) 2. Пятичленные гетероциклические
амидины общей формулы (I) по п.1, обладающие свойствами ингибиторов тромбина.
3. Соединения, содержащие структурный фрагмент формулы 4. Соединение формул (IIа) и (IIб)
где A, В, D и E имеют следующие значения:
A:
где
m - 0, 1 или 2,
n - 0, 1 или 2,
R1 - группы гидроксил, карбоксил, C1-6
-алкил-OOC,
R2 - водород, алкилил с 1-4 атомами углерода,
R3
- водород, алкил с 1-4 атомами углерода,
B:
где
R4 - водород,
алкил с 1-4 атомами углерода или R1-(CH2)m-, где R1
и m имеют вышеуказанные значения,
p - 0 или 1,
R5 - водород, алкил с 1-4
атомами углерода,
R6 - водород, алкил с 1-6 атомами углерода, циклоалкил с 3-8
атомами углерода,
R4 и R6 вместе могут означать этиленовую группу,
R7 - водород, алкил с 1-8 атомами углерода,
R8 - водород,
алкил с 1-4 атомами углерода,
E:
где
q - 0 или 1,
D:
где
R9 - водород, алкил с 1-3 атомами углерода,
R10 - водород,
алкил с 1-4 атомами углерода,
R11 - водород, алкил с 1-4 атомами углерода,
X - кислород, сера, NH12, где R12 означает водород, алкил с 1 - 6 атомами
углерода,
Y - азот = или -CR13=, где R13 означает водород,
алкил с 1 - 4 атомами углерода,
Z - азот = или -CR13=, где R13 имеет
вышеуказанное значение, а также их солями с физиологически переносимыми кислотами.
A:
HOOC-(CH2)t)-(t=1,2 или 3), HOOC-(CH2)2
-CH-, HOOC-CH(алкил с 1-4 атомами углерода)-, HOOC-C(алкил с 1-4 атомами углерода)2-,
B:
где
p - 0,1
R4 - водород, алкил с 1-4 атомами углерода,
R5 - водород, метил,
R6 - водород, алкил с 1-4 атомами
углерода, циклоалкил с 3-8 атомами углерода,
R7 - водород, алкил с 1-8 атомами углерода,
R8 - водород, алкил с 1-4 атомами углерода,
(структурный
элемент В является предпочтительно D-конфигурированным),
E:
где q - 0, 1,
D:
где
X = сера, кислород, NH, NCH3, NC2H5,
Y = CH, C-CH3, и
Z = CH, C-CH3
или X = сера, кислород, NH, N-CH3,
Y = азот Z=CH, C-CH3,
или X = сера, кислород, NH, N-CH3, Y = CH, C-CH3, Z=азот
или X = сера, кислород, NH, N-CH3, Y = азот, Z = азот
или
где
X = сера, кислород, NH, NCH3, NC2H5,
Y = CH, C-CH3, и
Z = CH, C-CH3,
или X = кислород, NH, NCH3, Y = азот Z=CH, C-CH3,
или X = кислород, сера, NH, NCH3, Y = CH, C-CH3, Z=азот
или X = кислород, сера,
NH, NCH3, Y = Z = азот,
или
где
X = сера, кислород, NH, NCH3, NC2H5,
Y = CH, C-CH3, и
Z = CH, C-CH3,
или X = кислород, NH, NCH3, Y=азот Z=CH, C-CH3,
или X = кислород, сера, NH, NCH3, Y=CH, C-CH3, Z=азот
или X = кислород, NH, NCH3, Y = Z = азот.
B:
где
p - 0, 1
R4 - водород, метил,
R5 - водород, метил,
R6 - алкил с 1-6 атомами углерода, циклоалкил с 5-8 атомами углерода,
R7 - водород, метил,
R8
- водород, метил,
E:
где
q - 0 или 1.
γ
где
R14 - водород, метил, предпочтительно водород,
R15 - водород, метил, этил,
предпочтительно метил,
R16 - водород, метил.
tBuOOC-CH2-(D)Chg-Pyr-NH-CH2
-5-(2-am)-thioph
HOOC-CH2-(D)Chg-Pyr-NH-CH2-5-(2-am)-thioph
tBuOOC-CH2-(D)Chg-Dep-NH-CH2-5-(2-am)-thioph
HOOC-CH2
-(D)Chg-Dep-NH-CH2-5-(2-am)-thioph
HOOC-CH2-(D,L)Cpg-Pyr-NH-CH2-5-(2-am)-thioph
HOOC-CH2-(D,L)Cheg-Pyr-NH-CH2
-5-(2-am)-thioph
HOOC-CH2-(D,L)Cog-Pyr-NH-CH2
-5-(2-am)-thioph
HOOC-CH2-(D,L)Nog-Pyr-NH-CH2-5-(2-am)-thioph
HOOC-CH2-(D,
L)Adaala-Pyr-NH-CH2-5-(2-am)-thioph
HOOC-CH2
-(D,L)4-MeCha-Pyr-NH-CH2-5-(2-am)-thioph
HOOC-CH2-(D,L)-MeCha-Pyr-NH-CH2
-5-(2-am)-thioph
HOOC-CH2-(D,L)4-MeChg-Pyr-NH-CH2
-5-(2-am)-thioph
HOOC-CH2-(D,L)3,3-Me2Chg-Pyr-NH-CH2-5- (2-am)-thioph
HOOC-CH2-(D,L)3,3-Me2Cha-Pvr-NH-CH2
-5- (2-am)-thioph
HOOC-CH2-(D,L)4-iPrChg-Pyr-NH-CH2-5-(2-am)-thioph
HOOC-CH2-(D,
1)3,4,5(MeO)3Phe-Pyr-NH-CH2
-5- (2-am)-thioph
HOOC-CH2-(D,L)Chea-Pyr-NH-CH2-5-(2-am)-thioph
HOOC-CH2-(D)Diphe-Pyr-NH-CH2-5-(2-am)-thioph
HOOC-CH2
-(D,L) ββ-Me2Cha-Pyr-NH-CH2- 5-(2-am)-thioph
HOOC-CH2-(D,L)Adagly-Pyr-NH-CH2
-5- (2-am)-thioph
HOOC-CH2-(D,
L)-1-Tic-Pyr-NH-CH2-5-(2-am)-thioph
HOOC-CH2-(D,L)Dch-Pyr-NH-CH2-5-(2-am)-thioph
HOOC-CH2
-(D,L)4-iPrCha-Pyr-NH-CH2
-5-(2-am)-thioph
HOOC-CH2-(D,L)α-MeCha-Pyr-NH-CH2-5-(2-am)-thioph
HOOC-CH2-(D,L)a-MeCha-Dep-NH-CH2-5-(2-am)-thioph
HOOC-CH2-(N-Me)(D)Cha-Pyr-NH-CH2-5-(2-am)-thioph
HOOC-CH2-(D)Cha-Pyr-NH-CH2-5-(2-am)-thioph
HOOC-CH2-(D)Cha-Dep-NH-CH2-5-(2-am)-thioph
HOOC-CH2-(D)Cha-Pyr-NH-CH2-4-(2-am)-thioph
HOOC-CH2-(D)Cha-Dep-NH-CH2
-4-(2-am)-thioph
HOOC-CH2
-(D)Cha-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph
HOOC-CH2-(D)Cha-Dep-NH-CH2-5-(3-am)-thioph
HOOC-CH2
-(D)Chg-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-thioph
HOOC-CH2-(D)Chg-Pyr-NH-CH2-4-(2-am)-thioph
HOOC-CH2-(D)Cha-Pyr-NH- CH2-5-(2-am)-fur
HOOC-CH2-(D)Cha-Dep-NH-CH2
-5-(2-am)-fur
HOOC-CH2- (D)Cha-Pyr-NH-CH2-4-(2-am)-fur
HOOC-CH2-(D)Cha-Dep-NH-CH2
-4-(2-am)-fur
HOOC-CH2
-(D)Cha-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-fur
HOOC-CH2-(D)Cha-Dep-NH-CH2-5-(3-am)-fur
HOOC-CH2
-(D)Chg-Pyr-NH-CH2-5-(2-am)-fur
HOOC-CH2-(D)Chg-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-fur
HOOC-CH2-(D)Cha-Pyr-NH-CH2-5-(1-Me-2-am)-pyrr
HOOC-CH2-(D)Chg-Pyr-NH- CH2
-5-(1-Me-2-am)-pyrr
HOOC-CH2-(D)Cha-Dep-NH-CH2-5-(1-Me-2-am)- pyrr
HOOC-CH2-(D)Cha-Pyr-NH-CH2-4-(1-Me-2-am)-pyrr
HOOC-CH2- (D)Cha-Dep-NH-CH2-4-(1-Me-2-am)-pyrr
HOOC-CH2-(D)Cha-Pyr-NH-CH2-5-(1-Me-3-am)-pyrr
HOOC-CH2-(D)Cha-Dep-NH-CH2
-5-(1-Me-3-am)-pyrr
HOOC-CH2-(D)Cha-Pyr-NH-CH2-5-(2-am-3,4- Me2)-thioph
HOOC-CH2
-(D)Cha-Pyr-NH-CH2-5-(2-am-3-Me)-thioph
HOOC-CH2-(D)Cha-Pyr-NH-CH2-5-(2-am-4-Me)- thioph
HOOC-CH2-(D)Cha-Pyr-NH-CH2
-5-(2-am-3-Me)-fur
HOOC-CH2
-(D)Cha-Pyr-NH-CH2-5-(2-am-4-Me)-fur
HOOC-CH2-(D)Cha-Pyr-NH-CH2-5-(3-am-2-Me)-fur
HOOC-CH2
-(D)Cha-Pyr-NH-CH2-2-(5-am)-thiaz
HOOC-CH2-(D)Cha-Pyr-NH-CH2-2-(4-am)-thiaz
HOOC-CH2-(D)Cha-Pyr-NH-CH2-4-(2-am)-thiaz
HOOC-CH2-(D)Cha-Pyr-NH-CH2
-5-(2-am)-thiaz
HOOC-CH2-(D)Chg-Pyr-NH-CH2-2-(5-am)-thiaz
HOOC-CH2-(D)Chg-Pyr-NH-CH2
-2-(4-am)-thiaz
HOOC-CH2
-(D)Chg-Pyr-NH-CH2-4-(2-am)-thiaz
HOOC-CH2-(D)Chg-Pyr-NH-CH2-5-(2-am)-thiaz
HOOC-CH2
-(D)Cha-Dep-NH-CH2-2-(5-am)-thiaz
HOOC-CH2-(D)Cha-Pyr-NH-CH2-2-(4-am)-oxaz
HOOC-CH2-(D)Chg-Pyr-NH-CH2-2-(4-am)-oxaz
HOOC-CH2-(D)Cha-Pyr-NH-CH2
-5-(3-am-1-Me)-pyraz
HOOC-CH2-(D)Cha-Pyr-NH-CH2-3-(5-am)-1,2,4-oxadiaz
HOOC-CH2-(D)Cha-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-1,2,4-oxadiaz
HOOC-CH2-(D)Chg-Pyr-NH-CH2-5-(3-am)-1,2,4-oxadiaz
HOOC-CH2-(D)Cha-Pyr-NH-CH2-5-(3-am-1-Me)-1,2,4-triiaz
HOOC-CH2-CH2
-(D)Cha-Pyr-NH-CH2-5-(2-am)-thioph
HOOC-CH2-CH2-(D)Cha-Pyr-NH-CH2-5-(2-am)-fur
HOOC-CH2
-CH2-(D)Cha-Pyr-NH-CH2-5-(1-Me-2-am)-pyrr
(HOOC-CH2)2-(D)Cha-Pyr-NH-CH2-5-(2- am)-thioph
(HOOC-CH2)2
CH-(D)Cha-Pyr-NH-CH2
-5-(2-am)-thioph
HOOC-CH2-(D)Chg-Pyr-NH-CH2-5-(2-am)-1,3,4-thiadaz
HOOC-CH2-(D)Cha-Pyr-NH-CH2-5-(2-am)-1,3,
4-thiadaz
HOOC-CH2-(D)Chg-Pyr-NH-CH2-5-(2-am)-1,3,4-oxadiaz
HOOC-CH2-(D)Cha-Pyr-NH-CH2-5-(2-am)-1,3,4-oxadiaz
Перечень условных
сокращений, используемых в
данной заявке:
Adaala адамантилаланин
Adagly адамантилглицин
AIBN/АИБН азобисизобутиронитрил
Ac ацетил
Ala аланин
am
амидино
Asp
аспарагиновая кислота
Aze азетидинкарбоновая кислота
Bn бензил
Boc трет.-бутоксикарбонил
Bu бутил
Cbz бензилоксикарбонил
Cha
циклогексилаланин
Chea циклогептилаланин
Cheng циклогептилглицин
Chg циклогексилглицин
Cog циклооктилглицин
Cpa циклопентилаланин
Cpg
циклопентилглицин
DC/TCX тонкослойная хроматография
DCC/ДЦГК дициклогексилкарбодиимид
Dch дициклогексилаланин
Dcha дициклогексиламин
DCM дихлорметан
Dep 4,
5-дегидропипеколиновая кислота
DMF/ДМФА диметилформамид
DIPEA диизопропилэтиламин
Dpa дифенилаланин
Diphe 2,5-дигидрофенилаланин
Et этил
Eq/экв
эквивалент
Gly глицин
fur фуран
ham гидроксиамидо
HOSucc гидроксисукцинимид
HPLC/ВЭЖХ высокоэффективная жидкостная хроматография
Hyp
гидроксипролин
imi имидазол
2-lnd дигидроиндолкарбоновая кислота
i-Pr изопропил
Leu лейцин
Lsg раствор
Me метил
α -MeCha α
-метилциклогексилаланин
ββ -Me2Cha 2-амино-3-циклогексил-3-метил-масляная кислота или- ββ-диметилциклогексилаланин
4-MeCha
(4-метилциклогекс-1-ил)аланин
γ -MeCha (1-метилциклогекс-1-ил)аланин
3,3-Me2Cha (3.3-диметилциклогекс-1-ил)аланин
4-MeChg
(4-метилциклогексил-1-ил)глицин
3,3-Me2Chg (3,3-диметилциклогекс-1-ил)глицин
MPLC/СЭЖХ среднеэффективная жидкостная хроматография
MTBE простой
метил-трет.бутиловый эфир
NBS/БСИ N-бромсукцинимид
Nog норборнилглицин
Oxadias 1,2,4 оксадиазол
Oxas оксазол
Ph фенил
Phe фенилаланин
2Phi 2-пергидроиндолкарбоновая кислота
Pic пипеколиновая кислота
pico пиколил
pim пиперидинилметил
PPA ангидрид пропилфосфоновой кислоты
Pro пролин
Py пиридин
Pyr 3,4-дегидропролин
pyraz пиразол
pyrr пиррол
RT/KT комнатная температура
RP-18 обратная фаза C-18
t/tret./tret. третичный
tBu трет.-бутил
ТВАВ/ТБАБ тетрабутиламмонийбромид
TEA триэтиламин
TFA/ФУК трифторуксусная кислота
TFFA ангидрид трифторуксусной кислоты
thiaz
тиазол
thioph тиофен
THP тетрагидропиранил
1Tic 1-тетрагидроизохинолинкарбоновая кислота
3Tic 3-тетрагидроизохинолинкарбоновая кислота
TOTU
O-(циан-этоксикарбонилметилен)-амино-1-N, N, N'N',- тетраметилуронийтетрафтороборат
triaz 1,2,3-триазол
Z бензилоксикарбонил
Дальнейшими объектами изобретения являются
соединения, содержащие структурный элемент
где E и D имеют вышеуказанное значение, а у атома
азота структурного элемента E находятся атом водорода, защитная группа, или незамещенный алкильный остаток, в качестве составной части ингибиторов серинпротеазы и в особенности ингибиторов тромбина и
калликреина, а также промежуточные соединения формул (IIа) и (IIб)
A-B-E-D-CN (IIа)
A-B-E-D-CSNH2 (IIб)
где A, B, E и D имеют вышеуказанное значение.
- заболевания, патомеханизм которых непосредственно или косвенно основывается на протеолитическом действии тромбина,
- заболевания, патомеханизм которых основывается на тромбинозависимой активации рецепторов и сигнальных
трансдукций,
- заболевания, которые сопутствуются стимуляцией [например,
PA1-1, тромбоцитарным фактором роста (PDGF), P-селектином, 1 CAM-1, фактором ткани] или ингибированием (например, синтезом моноокиси азота в гладкомышечных клетках) экспрессии генов в соматических
клетках,
- заболевания, вызываемые митогенным действием тромбина,
- заболевания, вызываемые тромбинозависимым изменением сократимости и проницаемости эпителиальных клеток (например,
клеток эндотелий сосудов),
- тромбинозависимые тромбоэмболические заболевания, такие, как, например, глубокий венозный тромбоз, эмболия легочной артерии, инфаркт миокарда или инсульт,
мерцание предсердий, обмурация байпаса,
- диссеминированное внутрисосудистое коагулирование (ДВС-синдром),
- для реокклюзии и в целях сокращения времени реперфузии для
комбинированного лечения вместе с тромболитическими средствами, такими, как стрептокиназа, урокиназа, проурокиназа, t-Pa, активатор антитромбоцитарной иммунной сыворотки, плазминогенные активаторы из
слюнных желез животных, а также рекомбинантные и мутированные формы всех этих веществ,
- появление ранней реокклюзии и позднего рестеноза после чрезкожной внутрипросветной коронарной
ангиопластики,
- тромбинозависимая пролиферация гладкомышечных клеток,
- аккумуляция активного тромбина в центральной нервной системе (например, в случае болезни Альцгеймера),
- опухолевые заболевания и адгезия и метастазирование опухолевых клеток.
Соединения формулы (I) можно получать согласно схемам I - III.
А. Смесь
дихлорметана с метанолом в соотношении 95:5.
В качестве структурных элементов A используют для алкилирования, например, сложный трет.-бутиловый эфир
α - бромуксуной кислоты, сложный трет.-бутиловый эфир
β - бромпропионовой кислоты, сложный трет.-бутиловый эфир α - бромпропионовой кислоты, сложный трет.-бутиловый эфир γ
-броммасляной кислоты, сложный трет. -бутиловый эфир α
- броммасляной кислоты, защищенный ТНР бромметанол, защищенный ТНР γ -бромпропанол, α -бром- γ -бутиролактон, для
восстановительного
аминирования, например,
дигидроксиацетон, сложный ди-трет.-бутиловый эфир ацетондикарбоновой кислоты, а для присоединения по Михаэлу, например, сложный трет.-бутиловый
эфир акриловой кислоты, сложный трет.-бутиловый эфир
метакриловой кислоты, сложный ди-трет. -бутиловый эфир фумаровой кислоты. Указанные сложные трет.-бутиловые эфиры, если их нельзя приобретать в
торговле, получают аналогично G. Uray, W. Lindner,
Tetrahedron 1988, 44 4357-4362.
Для общего и специального синтеза аминокислот в литературе
описываются разнообразные возможности (см. к этому, в
частности, обзор в книге Губен-Вейл, том E 16 d, часть 1, стр. 406 и последующие).
Общая
методика синтеза этилового эфира 2-формиламиноакриловой
кислоты
К 100 ммоль трет.-бутилата калия в 150 мл тетрагидрофурана при температуре от 0 до -10oC прикапывают раствор 100
ммоль этилового эфира изоциаоноуксусной кислоты в 50 мл
тетрагидрофурана. Спустя 15 мин при той же температуре добавляют 100 ммоль соответствующего карбонильного соединения в 50 мл тетрагидрофурана,
реакционную смесь медленно доводят до комнатной
температуры и растворитель удаляют на ротационном испарителе. Остаток смешивают с 50 мл воды, 100 мл уксусной кислоты и 100 мл дихлорметана и продукт
экстрагируют дихлорметаном. Дихлорметановую фазу
сушат над сульфатом натрия и растворитель снимают на ротационном испарителе. Образующиеся почти в чистом состоянии продукты в случае необходимости
можно очищать далее с помощью колоночной
хроматографии на силикагеле (растворитель: смесь диэтилового эфира с петролейным эфиром).
100 ммоль этилового эфира 2-формиламиноакриловой кислоты в присутствии 10%-ного палладия-на-угле в 200 мл ледяной уксусной кислоты гидрируют с
помощью водорода вплоть до полного
превращения. Затем катализатор отфильтровывают, уксусную кислоту насколько возможно удаляют в ротационном испарителе и остаток в 200 мл полуконцентрированной
соляной кислоты кипятят с обратным
холодильником в течение 5 ч. Соляную кислоту удаляют на ротационном испарителе, продукт высушивают при 50oC в вакууме и дополнительно промывают его
многократно диэтиловым эфиром.
Гидрохлориды получают в виде слабоокрашенных кристаллов.
3,4 г (12,2 ммоль) Вос-(D)- α
-метил-Phe-ОH в 100 мл метанола при
температуре 50oC в присутствии 250 г 5%-ного родия на оксиде алюминия гидрируют с помощью водорода в течение 20 ч при давлении 10 бар. После
отфильтровывания и удаления растворителя
получают 2,8 г Вос-(D)- α -метил-Cha-OH.
Вос-1-тетралинилглицин получают из 1,2-дигидронафталина. 1,2- дигидронафталин сначала с помощью бромоводорода в 1- тетралилбромид (аналогично J.
Med. Chem. 37, 1586 (1996)). Затем бромид вводят во
взаимодействие с диэтиловым эфиром ацетамидомалоновой кислоты, проводят гидролитическое расщепление и полученную α -аминокислоту в
стандартных условиях переводят в Вос-защищенную форму. Другая
возможность получения описывается E. Reimann и D. Voss, Arch. Pharm. 310, 102 (1977).
Boc-1-(D,L)Tic-OH получают по методике R.T. Shuman и др., J.
Med. Chem., 36, 314 (1993).
Boc-(D, L)Dpa-OH (1 ммоль) в 12 мл метанола вместе с
каталитическими количествами 5%-ного родия на оксиде алюминия
гидрируют при давлении 5 бар. После отфильтровывания и удаления растворителя в вакууме получают с количественным выходом продукт.
Получение этих аминокислот осуществляют путем взаимодействия
циклогептанона, циклопентанона, 4-изопропилциклогексанона или 3,
3-диметилциклогексанона с этиловым эфиром изонитрилуксусной кислоты согласно методике H.-J. Pratorius, J. Flossdorf, М. Kula, Chem.
Ber., 108. 3079 (1985)).
4,0 г (19,39 ммоль) циклогептилметилметансульфоната, полученного из циклогептилметанола и хлорангидрида метансульфоновой
кислоты, вместе с 4,9 г (18,47 ммоль) этилового эфира
бензофенониминоглицина, 8,9 г (64,65 ммоль) высушенного тонкоизмельченного карбоната калия и 1 г (3 ммоль) тетрабутиламмонийбромида в 50 мл
безводного ацетонитрила в атмосфере инертного газа кипятят с
обратным холодильником в течение 10 ч. Затем карбонат калия отфильтровывают, фильтрат выпаривают досуха и сырой продукт непосредственно
гидролизуют с помощью 10 мл 2 н. соляной кислоты в 40 мл этанола
в течение полутора ч при перемешивании и при комнатной температуре. После разбавления реакционного раствора бензофенон экстрагируют
этилацетатом в кислой области pH, затем экстрагируют H-D, L-Chea-OEt
с помощью дихлорметана в щелочной области (pH составляет 9), раствор сушат над сульфатом магния и выпаривают в ротационном
испарителе. Выход: 3,7 г 95% теории. Получение Boc-(D,L)-(3,4,5-(MeO)3)Phe-OH осуществляют путем
алкилирования этилового эфира бензофенониминоглицина с помощью
триметоксибензилхлорида, последующего введения трет.- бутоксикарбонильной защитной группы и омыления сложного эфира.
Суспензию 100 г (481 ммоль) гидрохлорида D-циклогексилаланина, 104 г (962 ммоль) бензилового спирта и
109,7 г (577 ммоль) моногидрата n-толуолсульфокислоты в 2200 мл
толуола на водоотделителе медленно нагревают с обратным холодильником. При температуре 80 - 90oC следят за образованием
хлороводорода, а также за растворением суспензии до прозрачного
раствора. После прекращения выделения воды (спустя 4 ч) отгоняют 500 мл толуола, дают охлаждаться реакционную смесь в течение ночи,
отфильтровывают образовавшийся остаток и промывают два раза гексаном,
взятым в количестве по 1000 мл. Полученный остаток (195 г) затем взмучивают в 2000 мл дихлорметана, после этого добавляют 1000 мл
воды и при перемешивании подщелачивают до значения pH 9 - 9,5 путем
последовательной добавки 50%-ного раствора едкого натрия. Органическую фазу отделяют, промывают ее два раза водой, взятой в
количестве по 500 мл, сушат над сульфатом натрия, отфильтровывают от
осушителя и сгущают фильтрат, после чего получают 115 г (94%) целевого продукта в качестве светлого масла.
115 г (440 ммоль) сложного бензилового эфира D- циклогексилаланина растворяют в 2000 мл ацетонитрила, затем добавляют
при комнатной
температуре 607,5 г (4,40 моль) сложного трет.-бутилового эфира бромуксусной кислоты и при той же температуре перемешивают в течение 3 сут. Отфильтровывают от карбоната, дополнительно
промывают
ацетонитрилом, сгущают маточный раствор при температуре 30oC и при давлении 20 мбар, затем остаток прибавляют к 1000 мл простого метил-трет. -бутилового эфира и органическую фазу
экстрагируют с помощью 5%-ной лимонной кислоты и насыщенного раствора гидрокарбоната натрия. Органическую фазу сушат над сульфатом натрия, отфильтровывают от осушителя и сгущают. Получаемое масло
(168
г) вводят непосредственно в последующую реакцию.
Полученное при предыдущем синтезе
масло
(168 г, 447 ммоль) растворяют в 1400 мл ацетонитрила, затем прибавляют 618 г (4,47 моль) карбоната калия в виде порошка и 107,3 г (492 ммоль) ди- трет.-бутилдикарбоната и перемешивают при
комнатной
температуре в течение 6 сут. Карбонат калия отсасывают, дополнительно промывают с помощью ацетонитрила в количестве приблизительно 1000 мл и сгущают фильтрат. Получают 230 г желаемого
продукта.
115 г сложного бензилового эфира
N-Вос-N-(трет.- бутилоксикарбонилметилен)-D-циклогексилаланина растворяют в 1000 мл чистого этанола и при температуре 25-30oC в присутствии 9 г 10%-ного палладия на активном угле гидрируют
с помощью водорода при нормальном давлении в течение 2 ч. После отфильтровывания и удаления растворителя на ротационном испарителе получают 100 г (260 ммоль) желтого масла, которое добавляют к 1600
мл
ацетона и нагревают с обратным холодильником. После удаления нагревательной ванны быстро прибавляют через капельную воронку раствор 27 г (273 ммоль) циклогексиламина в ацетоне. При охлаждении
реакционной смеси до комнатной температуры выкристаллизовывается желаемая соль. Отфильтровывают твердое вещество, дополнительно промывают с помощью 200 мл ацетона и для окончательной очистки
перекристаллизовывают еще раз из ацетона. После сушки остатка в вакуумном сушильном шкафу при 30oC получают 70,2 г желаемой соли в виде белого порошка.
а) Сложный трет.-бутиловый эфир 3-бромпропионовой кислоты
16,64 г (109 ммоль) бромпропионовой
кислоты, 150 мл конденсированного 2-метилпропена и 2 мл концентрированной серной кислоты при -30oC в противотоке азота подают в пригодный для автоклава стеклянный сосуд, который плотно
закрывают, и перемешивают при комнатной температуре в течение 72 ч. Для переработки реакционный сосуд снова охлаждают до -30oC и реакционный раствор осторожно подливают в 200 мл имеющего
температуру льдя насыщенного раствора гидрокарбоната натрия. При перемешивании дают упариваться избыточный 2-метилпропен, остаток экстрагируют три раза дихлорметаном, взятым в количестве по 50 мл,
объединенные органические фазы сушат над сульфатом натрия, отфильтровывают от осушителя и сгущают под вакуумом, получаемым с помощью водоструйного насоса. Маслянистый остаток очищают путем колоночной
хроматографии с применением в качестве растворителя н-гексана, позднее смеси н-гексана и диэтилового эфира в соотношении 9 : 1. Получают 18,86 г целевого соединения.
49,4 г (189 ммоль) сложного бензилового эфира D- циклогексилаланина растворяют в 250 мл ацетонитрила, при комнатной
температуре добавляют 31,6 г (151 ммоль) трет.-бутилового эфира бромпропионовой кислоты и смесь кипятят с обратным холодильником в течение 5 сут. Отфильтровывают от образовавшегося осадка,
дополнительно промывают несколько раз ацетонитрилом, фильтрат сгущают под вакуумом, создаваемым с помощью водоструйного насоса, остаток прибавляют к 350 мл дихлорметана и органическую фазу
экстрагируют 5%-ной лимонной кислотой и насыщенным раствором гидрокарбоната натрия. Органическую фазу сушат над сульфатом натрия, отфильтровывают от осушителя и сгущают. Маслянистый остаток очищают
путем колоночной хроматографии с применением в качестве растворителя дихлорметана, позднее смеси дихлорметана и метанола в соотношении 95:5. Получают слегка загрязненное масло, которое вводят
непосредственно в последующую реакцию.
Полученное в предыдущем синтезе масло (30 г,
макс. 70 ммоль) растворяют в 150 мл ацетонитрила, затем добавляют 28 мл (160 ммоль) ди-изопропилэтиламина и 19,2 г (88 ммоль) ди-трет.- бутилдикарбоната и перемешивают при комнатной температуре в
течение 3 сут. Реакционную смесь сгущают на ротационном испарителе под вакуумом, создаваемым с помощью водоструйного насоса, остаток прибавляют к н-гексану, промывают пять раз 5%-ным раствором
лимонной кислоты, взятым в количестве по 3 мл, затем объединенные органические фазы сушат над сульфатом натрия, отфильтровывают от осушителя и сгущают. Остаток подвергают разделению путем колоночной
хроматографии с применением в качестве растворителя смеси гексана и этилацетата в соотношении 95:5. Получают 32,66 г (64 ммоль) желаемого продукта.
32,66 г (64 ммоль) сложного бензилового эфира N-Вос-N-(трет.- бутилоксикарбонилэтилен)-D-циклогексилаланина
растворяют в 325 мл чистого этанола и при температуре 25-30oC в присутствии 3 г 10 %-ного палладия на активном угле гидрируют с помощью водорода при нормальном давлении в течение 14 ч.
После фильтрации раствора через Celite®, дополнительной промывки этанолом и удаления растворителя на ротационном испарителе получают 26,7 г желтого масла, которое прибавляют к
ацетону и нагревают с обратным холодильником. После удаления нагревательной бани быстро добавляют через капельную воронку раствор 7 г (70 ммоль) циклогексиламина в ацетоне. При охлаждении реакционной
смеси до комнатной температуры выкристаллизовывается желаемая соль. Отфильтровывают твердое вещество, дополнительно промывают 25 мл ацетона и для окончательной очистки еще раз перекристаллизовывают
из
ацетона. После сушки остатка в вакуумном сушильном шкафу при 30oC получают 26,6 г (54 ммоль) желаемой соли в качестве белого порошка.
а) N-Boc-Pyr-OH (5 г, 23,45 ммоль) растворяют в метаноле (50 мл), после этого добавляют хлороводород в диоксане (4N, 30
мл). Затем нагревают с обратным холодильником в течение 12 ч. Растворитель удаляют на ротационном испарителе, получают в качестве продукта H-Pyr-OMe гидрохлорид. Выход: 3,84 г (100%).
Это соединение получают аналогичным образом из N-Вос-N- (трет.-бутилоксикарбонилметилен)-(D)-циклогексилглицина и сложного
метилового эфира 3,4-дигидропролина.
5-аминометил-2-цианотиофен
Получение этого структурного элемента осуществляют
согласно международной заявке 93/23609.
а) 2-бром-4-формилтиофен
36 г (320 ммоль) 3-формилтиофена растворяют в 600 мл хлористого метилена
и
охлаждают до 5oC, затем по порциям прибавляют 100 г (750 ммоль) трихлорида алюминия, после этого реакционную смесь нагревают с обратным холодильником. Затем прикапывают раствор 59 г (19
мл,
360 ммоль) брома в 40 мл хлористого метилена в течение 45 мин и подвергают смесь
дополнительной реакции с обратным холодильником в течение 4 ч. После охлаждения реакционный раствор наливают на
600 г
ледяной воды и экстрагируют хлористым метиленом, органическую фазу промывают насыщенным раствором гидрокарбоната натрия, сушат над сульфатом магния и отгоняют в вакууме на ротационном
испарителе.
Получают 64,5 г сырого продукта, который очищают путем колоночной хроматографии на силикагеле с применением в качестве элюента смеси хлористого метилена и петролейного эфира. При этом
получают всего
56,5 г слегка загрязненного продукта.
К раствору 13,53 г (70,82 ммоль) 2-бром-4-формилтиофена в 25 мл диметилформамида прибавляют 7,6
г (85 ммоль)
цианида меди (I), реакционную смесь нагревают с обратным холодильником в течение 3,5 ч, причем суспензия, которая первоначально имеет светло-зеленый цвет, превращается в раствор черного
цвета. После
добавки воды реакционную смесь несколько раз экстрагируют, органические фазы объединяют, промывают насыщенным раствором поваренной соли, сушат над сульфатом натрия и в легком вакууме
перегоняют на
ротационном испарителе. К остатку (7 г) прибавляют простой эфир, в результате чего получают 1,6 г чистого продукта. Маточный раствор вместе с сырыми продуктами из других исходных смесей
очищают путем
хроматографии на силикагеле с применением в качестве элюента смеси хлористого метилена и петролейного эфира в соотношении 1: 1. Всего 56,6 г 2-бром-4-формилтиофена превращают до
2-циано-4- формилтиофена, при этом получают 12,6 г чистого продукта (Выход: 31%).
К суспензии 12,6 г (91,8 ммоль) 2-циано-4-формилтиофена в 200
мл этанола прибавляют по порциям 3,47 г (91,8 ммоль) боргидрида натрия и при комнатной температуре перемешивают в течение 2 ч, при этом реакционная смесь медленно превращается в прозрачный раствор.
После сгущения к остатку добавляют сложный этиловый эфир уксусной кислоты, затем промывают последовательно насыщенным раствором поваренной соли, 5%-ной лимонной кислотой и насыщенным раствором
поваренной соли.
11,7 г (84,07 ммоль) 2-циано-3-гидроксиметилтиофена вместе с 24,1 г (91,87 ммоль) трифенилфосфина в 100 мл тетрагидрофурана растворяют при комнатной температуре, по
порциям прибавляют при охлаждении ледяной баней 30,47 г (91,87 ммоль) тетрабромметана. Перемешивают при комнатной температуре в течение 3 ч, а затем сгущают в вакууме и очищают путем хроматографии на
силикагеле с применением в качестве элюента смеси хлористого метилена и петролейного эфира. Получают 18,8 г содержащего еще петролейный эфир кристаллического светло-желтого продукта.
18,81 г 3-бромметил-2-цианотиофена (сырой продукт, макс. 84,07 ммоль) растворяют в 160 мл тетрагидрофурана и охлаждают до 5oС, по порциям добавляют 3,07 г (102,4 ммоль) 80%-ной суспензии гидрида натрия. Затем при 5oC прикапывают 22,25 г (102,4 ммоль) ди-трет.-бутилиминодикарбоксилата, растворенного в 160
мл тетрагидрофурана, после чего смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Так как в результате тонкослойной хроматографии превращение является незаконченным, дают нагреваться до
30-35oC в течение 4,5 ч. После охлаждения до 0 - 5oC медленно прикапывают 33 мл насыщенного раствора хлористого аммония, тетрогидрофуран отгоняют в вакууме, остаток несколько
раз
экстрагируют этилацетатом, этилацетатные фазы промывают насыщенным раствором поваренной соли, сушат над сульфатом натрия и в вакууме перегоняют на ротационном испарителе. Красный вязкий остаток
(34,61
г) используют в качестве сырого продукта в последующей реакции.
34,61 г 4-N, N-бис(трет.
-бутоксикарбонил)-аминометил-2- цианотиофена
(сырой продукт, макс. 84,07 ммоль) растворяют в 600 мл этилацетата, нагревают до 0-5oC, насыщают хлористоводородным газом и нагревают до
комнатной температуры. По истечении 3 ч
образовавшуюся суспензию перегоняют на ротационном испарителе, осуществляют несколько раз совместную перегонку с хлористым метиленом, декантируют остаток с
диэтиловым эфиром и сушат остаток в вакууме.
Получают 13,85 г продукта в качестве светлого порошка. Выход через две стадии: 94,3%.
а)
4-цианотиофен-2-карбальдегид
49,3 г (258,05 ммоль)
4-бром-тиофен-2-карбальдегида и 27,8 г (310,41 ммоль) цианида меди (I) суспендируют в 130 мл абсолютного диметилформамида и нагревают с
обратным холодильником в течение 8 ч. Растворитель при 40oC отгоняют на ротационном испарителе в вакууме, остаток суспендируют в этилацетате и вводят в аппарат Сокслета. Остаток
экстрагируют в течение ночи, желтый раствор сушат над сульфатом натрия и
перегоняют на ротационном испарителе в вакууме. Получаемое твердое вещество желтого цвета перекристаллизуют из диэтилового
эфира. Получают 25,3 г продукта (80% теории).
11,6 г (84,6 ммоль) 4-цианотиофен-2-карбальдегида растворяют в 140 мл метанола, после
этого добавляют 12,3 г (116,1 ммоль) карбоната натрия. Затем при
охлаждении прибавляют по порциям при 15oC 6,5 г 93,5 ммоль) гидроксиламин-гидрохлорида и перемешивают при 10oC
еще в течение 2 ч. После добавки 80 мл воды реакционную смесь
экстрагируют, пять раз диэтиловым эфиром, взятым в количестве по 50 мл. Органическую фазу сушат над сульфатом натрия, растворитель
удаляют в вакууме. Получают 12,5 г желаемого продукта в качестве
желтого кристаллического порошка (96% теории).
11,22 г (171,64
ммоль) мелкой цинковой пыли по нескольким небольшим порциям прибавляют
осторожно к охлажденному до 0-5oC раствору 4,65 г (30,60 ммоль) 4-цианотиофен-2-карбальдегид-оксима в 50 мл
трифторуксусной кислоты так, что температура не превышает 15oC. После
трехчого перемешивания декантируют от избыточного цинка, трифторуксусную кислоту большей частью удаляют под вакуумом,
создаваемым с помощью масляного насоса, остаточное масло охлаждают до 0o
C, после чего к нему прибавляют по порциям предварительно охлажденную до 0oC смесь 150 мл 3N натрового
щелока и 2 л хлористого метилена. После фильтрации нерастворимых компонентов
органическую фазу отделяют, водную фазу восемь раз экстрагируют хлористым метиленом, взятым в количестве по 20 мл,
объединенные органические фазы сушат над сульфатом натрия и затем к ним добавляют при
охлаждении льдом 20 мл 6M метанольной соляной кислоты. Продукт осаждается в качестве гидрохлорида в виде белого
твердого вещества, при этом для усовершенствования кристаллизации суспензию охлаждают до
4oC в течение ночи. Получают 2,2 г продукта в качестве бесцветных иголок (50% теории).
19 г
(150,42 ммоль) амида 5-аминометил-3,4-диметил-тиофен-2- карбоновой кислоты суспендируют в 760 мл
метанола и 110 мл 2N раствора соляной кислоты, затем прибавляют 9,5 г палладия на угле (10%) и
гидрируют при комнатной температуре. После добавки 4,7 л водорода (4 ч) отгоняют метанол в вакууме,
водную фазу три раза экстрагируют этилацетатом, а затем водную фазу подвергают сублимационной сушке.
Получают 16,3 г желаемого продукта в качестве твердого вещества белого цвета (70,4% теории).
а) Сложный этиловый эфир
5-хлорметил-изоксазол-3-карбоновой кислоты
К охлажденной до 10-15oC смеси 30 г (198
ммоль) сложного этилового эфира 2-хлор-2-гидроксимино-уксусной кислоты и 150 мл пропаргилхлорида
прикапывают при перемешивании 21,2 г триэтиламина и дополнительно перемешивают при комнатной
температуре в течение часа, затем добавляют воду, экстрагируют диэтиловым эфиром, органическую фазу сушат
над сульфатом магния и перегоняют на ротационном испарителе в вакууме. Остаток подвергают
перегонке в вакууме при 0,5 Торр, при этом продукт перегоняется при 116 - 122oC.
К 47,3 г (250 ммоль) сложного
этилового эфира 5-хлорметил- изоксазол-3-карбоновой кислоты в 150 мл этанола добавляют 14 г (250 ммоль) гидроксида
калия, реакционную смесь перемешивают при 60-70oC в течение 6 ч. После
охлаждения сгущают в вакууме, остаток подают в воду и экстрагируют диэтиловым эфиром, водную фазу подкисляют с помощью
соляной кислоты, затем экстрагируют несколько раз диэтиловым эфиром, эфирную
фазу сушат над сульфатом натрия и сгущают в вакууме, создаваемом с помощью масляного насоса (50oC). Получают 31
г желаемого продукта (77% теории).
120 г (743 ммоль) 5-хлорметил-изоксазол-3-карбоновой кислоты вместе с 500 мл
тионилхлорида и 2 каплями пиридина нагревают с обратным холодильником
в течение 10 ч, после этого сгущают в вакууме, а затем подвергают перегонке при 20 Торр. Продукт перегоняется при 125 - 133oC. Получают 78 г (58% теории).
В раствор 10 г (55,56 ммоль) хлорида 5-хлорметил-изоксазол- 3-карбоновой кислоты в
100 мл метиленхлорида вводят при 10 - 15oC аммиак в
течение часа, а затем при комнатной температуре далее перемешивают в течение часа. После охлаждения раствора до 0oC осадок
отсасывают, промывают небольшим количеством холодного хлористого
метилена, а остаток для удаления солей аммониевого основания два раза декантируют водой. После сушки в вакууме получают 6,58 г чистого
продукта в качестве светлого порошка (74% теории).
К смеси 100 мл концентрированного аммиачного раствора и 72
мл метанола добавляют 2,44 г (15,2 ммоль) амида
5-хлорметил- иэоксазол-3-карбоновой кислоты, реакционный раствор нагревают до 40oC и при этом постоянно насыщают аммиачным газом. Спустя 6 ч
превращение эдукта завершается. Метанол удаляют
в вакууме, водную фазу два раза экстрагируют хлористым метиленом, а затем водную фазу осторожно в вакууме отгоняют на ротационном испарителе досуха.
Твердый остаток белого цвета вводят в качестве
сырого продукта в сочетание с Вос-дегидропролином.
Используемый в предварительной стадии сложный этиловый эфир 4-аминометил-тиаэол-2-карбоновой кислоты получают согласно патенту США 4 826 816. После
введения Вос-защитной группы на аминофункции
эфирную группу подвергают омылению, образовавшуюся кислотную функцию переводят через смешанный ангидрид (сложный изобутиловый эфир угольной кислоты) в амид
карбоновой кислоты, а затем с помощью
реактива Лавессона - в тиоамид. После отщепления защитной группы получают вышеупомянутое промежуточное соединение.
а) 5-цианофуран-2-карбальдегид
К охлажденному до -70oC раствору 26,7 г (264 ммоль) диизопропиламина в 600 мл тетрагидрофурана добавляют 165 мл (264 ммоль) 1,6 молярного
раствора н-бутиллития в н-гексане в течение
20 мин. Раствор доводят до -20oC, снова охлаждают до -75oC и при этой же температуре медленно прикапывают раствор 22,3 г (240 ммоль)
2-цианофурана в 100 мл тетрагидрофурана.
Дают дополнительно перемешиваться в течение 30 мин, прикапывают медленно 93 мл диметилформамида и снова дают перемешиваться в течение 30 мин. Для обработки
добавляют при температуре -70oC
раствор 40 г лимонной кислоты в 200 мл воды. Сгущают на ротационном испарителе, добавляют 600 мл насыщенного раствора хлористого натрия и экстрагируют три
раза диэтиловым эфиром, взятым в количестве
по 200 мл. Объединенные органические экстракты сушат над сульфатом магния. После отфильтровывания осушителя отгоняют растворитель в вакууме, создаваемом при
помощи водоструйного насоса, и остаток
очищают путем колоночной хроматографии (растворитель: дихлорметан). Элюат сгущают, а остаток подвергают перегонке с водяным паром (температура кипения азеотропа
с водой: 60-65oC при
давлении 0,1 мм рт. ст.). После экстрагирования дистиллята с помощью диэтилового эфира, сушки органической фазы и сгущения раствора получают 10,6 г (88 ммоль, 36%)
целевого соединения.
К
раствору 30 г (0,25 моль)
5-цианофуран-карбальдегида в 500 мл абсолютного метанола при -30oC добавляют по порциям 2,34 г (62 ммоль) боргидрида натрия. Перемешивают при -30oC в
течение 2 ч и доводят
охлажденный реакционный раствор с помощью 5%-ного раствора лимонной кислоты в воде до значения pH 7. Реакционную смесь сгущают в вакууме, создаваемом при помощи водоструйного
насоса, к остатку
добавляют насыщенный раствор хлористого натрия, затем экстрагируют несколько раз диэтиловым эфиром, взятым в количестве по 150 мл, объединенные органические фазы сушат над сульфатом
магния, осушитель
отфильтровывают, а растворитель отгоняют при комнатной температуре в вакууме, создаваемом при помощи водоструйного насоса. Таким образом получают 27 г (22 ммоль) целевого соединения
в качестве
темно-красного масла, которое без дальнейшей очистки вводят в последующие реакции.
К раствору 15 г (121 ммоль) 5-гидроксиметил-2-цианофурана в 250 мл тетрагидрофурана добавляют 38 г (145 ммоль)
трифенилфосфина.
Охлаждают до -10oC и прибавляют раствор 48 г (145 ммоль) тетробромметана в 100 мл тетрагидрофурана. Дают нагреваться до комнатной температуры и перемешивают при той же
температуре в
течение 3 ч. Реакционный раствор сгущают на ротационном испарителе в вакууме, создаваемом при помощи водоструйного насоса, и остаток очищают путем колоночной хроматографии (растворитель:
смесь
петролейного эфира и дихлорметана в соотношении 1:1, Rf = 0,5). Получают 11,5 г целевого соединения.
К охлажденному до 0oC раствору 22,9 г (123 ммоль)
5-бромметил-2-цианофурана
в 400 мл тетрагидрофурана прибавляют по порциям 4,0 г (135 ммоль) гидрида натрия (80%-ная суспензия в минеральном масле). После этого прикапывают раствор 29,4 г (135 ммоль)
ди-трет.-бутилиминодикарбоксилата в 200 мл тетрагидрофурана, при этом температура не превышает 5oC. Дают нагреваться до комнатной температуры и перемешивают в течение ночи. Так как по
данным тонкослойной хроматографии превращение является незаконченным, дополнительно прибавляют тремя порциями всего 1,2 г гидрида натрия в течение 9 ч. Для завершения превращения нагревают до 35oC в течение дальнейших 3 ч, затем дают охлаждаться до комнатной температуры и добавляют медленно 600 мл насыщенного раствора хлористого алюминия. Растворитель отгоняют в вакууме, создаваемом
при помощи водоструйного насоса, остаток несколько раз экстрагируют этилацетатом, объединенные органические фазы промывают насыщенным раствором хлористого натрия, сушат над сульфатом магния и сгущают
на ротационном испарителе. Получают 37,3 г маслянистого остатка, который содержит еще ди-трет. -бутил- иминодикарбоксилат и который вводят в качестве сырого продукта в последующую реакцию.
37,3 г 5-N,N-бис(трет.-бутоксикарбонил)аминометил-2- цианофурана (сырой продукт из д), макс. 123 ммоль) растворяют в 600 мл этилацетата и охлаждают до 0oC. Насыщают хлороводородным газом,
при этом спустя 30 мин осаждается белый осадок. Доводят до комнатной температуры и перемешивают в течение ночи, затем образовавшуюся суспензию сгущают на ротационном испарителе, остаток декантируют
диэтиловым эфиром и отфильтровывают от растворителя, твердый остаток сушат при комнатной температуре в вакууме. Получают 15,1 г (77% выхода через две стадии) целевого соединения в качестве порошка
светло-охрового цвета.
а) Сложный этиловый эфир 4-оксопентановой кислоты
100 г (0,86 моль) 4-оксопентановой кислоты, 150 г этанола и 1 мл серной кислоты в 200 мл бензола
нагревают
с обратным холодильником, пока не будет закончено водоотделение в ловушке Деан-Штарка. Охлажденную реакционную смесь промывают водой, раствором карбоната натрия и снова водой, а затем с
обратным
холодильником сушат при помощи ловушки Деан-Штарка. После завершения отделения водяной фазы растворитель отгоняют и остаток перегоняют при пониженном давлении. Точка кипения: 85 - 87oC/16
мм рт. ст. Выход: 105,5 г (85%).
Смесь 171,3 г (1,19 моль) сложного этилового эфира 4- оксопентановой
кислоты, 207 мл
(184,2 г, 1,24 моль) триэтилортоформиата, 26 мл абсолютного этанола и 1 г n- толуолсульфоновой кислоты при прочном перемешивании нагревают с обратным холодильником в течение 8 ч и
затем перегоняют в
вакууме. Получают 187,9 г (72,5%) сложного этилового эфира 4,4- ди-этоксипентановой кислоты. Точка кипения: 104 -106oC/14 мм рт. ст.
Указанную выше смесь сложного этилового эфира 2-формиллевулиновой кислоты и его диэтилкеталя растворяют в бензоле, затем прибавляют катализатор, и
получаемый
раствор оставляют с обратным холодильником в ловушке Деан-Штарка в течение 3-3 1/2 ч, пока не вода будет полностью удалена. После этого реакционную смесь перегоняют при пониженном давлении,
при этом
получают 15 г (97 ммоль) сложного этилового эфира 5-метилфуран-3-карбоновой кислоты с точкой кипения 97oC/15 мм рт.ст.
Смесь
31,7 г (206 ммоль) сложного этилового эфира 5-метилфуран-3-карбоновой кислоты, 40 мл 45%-ного гидроокиси калия и 100 мл воды при перемешивании нагревают с обратным холодильником в течение
4 ч, затем
ее охлаждают до 10oC и с помощью 15%-ной соляной кислоты подкисляют до значения pH 1. Образовавшуюся реакционную смесь дают стоять при той же температуре в течение 2 ч,
преципитат
отфильтровывают и при 45-50oC сушат до постоянства веса, при этом получают 23,7 г (188 ммоль, 91%) 5- метилфуран-3-карбоновой кислоты.
К суспензии 23,7 г (188 ммоль) 5-метилфуран-3-карбоновой кислоты в 100 мл бензола добавляют при перемешивании небольшими количествами 39,2 г (188 ммоль)
пентахлорида фосфора,
результатом чего являются значительное выделение тепла и образование хлористого водорода. Образовавшуюся смесь оставляют при перемешивании с обратным холодильником в течение 4 ч,
а затем ее перегоняют
в вакууме. Получают 24,7 г (171 ммоль, 91%) хлорангидрида кислоты. Точка кипения: 79oC/12 мм рт.ст.
24,7 г (171 ммоль)
хлорида 5-метилфуран-3-карбоновой кислоты при перемешивании добавляют при 25-40oC каплями к смеси 80 мл 25 %-ного раствора гидроокиси аммония и 80 мл бензола.
Образовавшуюся смесь
перемешивают в течение 3 ч и дают стоять в течение ночи. В последующий день отфильтровывают белые амидные кристаллы, которые промывают холодной водой и сушат при 40-45o
C до постоянства
веса. Выход: 19,7 г (158 ммоль, 92%), точка плавления: 158oC.
К суспензии 19,7 г (158 ммоль) амида
5-метилфуран-3- карбоновой кислоты в 100
мл бензола прибавляют при 30-40oC небольшими количествами 32,9 г пентахлорида фосфора. Образовавшуюся смесь перемешивают с обратным холодильником
до осветления (3 1/2-4 ч), а затем
перегоняют при пониженном давлении. Собирают фракцию с точкой кипения 79-140oC/15 мм рт.ст. В результате второй перегонки получают 12,7 г (119 ммоль,
75%) целевого соединения, точка
кипения: 79-80oC/15 мм рт.ст.
12,7 г (119 ммоль) 5-метил-3-цианофурана растворяют в 100 мл
тетрахлорметана, прибавляют 22 г (122
ммоль) N-бромсукцинимида и 12 г (73 ммоль) азобисизобутиронитрила. Когда начинается экзотермическая реакция, образовавшуюся смесь при интенсивном перемешивании
нагревают до 70oC. После
окончания выделения тепла реакционную смесь при 80oC перемешивают в течение 3 ч и затем охлаждают до комнатной температуры. Образовавшийся сукцинимид
отфильтровывают и два раза промывают на
фильтре тетрахлорметаном, взятым в количестве по 15 мл.
а) 5-циано-1-метилпиррол-2-карбальдегид
1-метилпиррол можно переводить в 2-циано-1-метилпиррол
путем взаимодействия с
хлорсульфонилизоцианатом и диметилформамидом в ацетонитриле (см., например, C.E. Loader и др., Can. J. Chem. (1981), 59, 2673-6).
отгоняют на ротационном испарителе, а сырой
продукт очищают путем хроматографии на силикагеле с применением в качестве элюента дихлорметана. Выход: 8,25 г (54%).1H-ЯМР (CDСl3)
δ = 4,1 (с, 3H), 6,8 (д, 1H), 6,9 (д,
1H), 9,7 (с, 1H).
Полученные согласно а) продукт (8,2 г, 61,1 ммоль) растворяют в
200 мл этанола, затем при -10oC к
нему добавляют 2,31 г (61,13 ммоль) боргидрида натрия. После перемешивания при 0-5oC в течение полтора часа растворитель отгоняют на
ротационном испарителе и к остатку прибавляют ледяную
воду и 20%-ный раствор гидросульфата натрия. Водную фазу экстрагируют этилацетатом. Объединенные органические фазы подвергают промывке насыщенным
раствором гидрокарбоната натрия и водой и сушат над
сульфатом натрия. Растворитель отгоняют на ротационном испарителе и сырой продукт очищают путем хроматографии на силикагеле с применением в
качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении
97,5: 2,5. Выход: 7,6 г (91%).
Полученный согласно б) продукт (7,5 г, 55,08 ммоль) растворяют в 220 мл диметилформамида, затем при 0oC прибавляют 43,34 г (165,25 ммоль)
трифенилфосфина. При той же температуре перемешивают в течение 5 мин, после чего добавляют 54,8 г (165,25 ммоль) тетрабромметана. Затем перемешивают при
0oC в течение 30 мин, и при
комнатной температуре в течение 90 мин. После охлаждения до 0oC добавляют 4,37 г (67,21 ммоль) азида натрия. После этого перемешивают при комнатной
температуре в течение четырех с половиной
часов. Прикапывают при 0oC насыщенный раствор хлорида натрия, затем исходную смесь разбавляют этилацетатом. Органическую фазу отделяют, а водную
фазу экстрагируют диэтиловым эфиром.
Объединенные органические фазы промывают водой и сушат над сульфатом натрия. Растворитель отгоняют на ротационном испарителе и сырой продукт очищают путем
хроматографии на силикагеле с применением в
качестве элюента смеси этилацетата и гексана в соотношении 1: 20. Выход: 5,6 г (63%).
Полученный согласно в) продукт (4,71 г, 29,75 ммоль) растворяют в 100 мл метанола,
к смеси добавляют 1 г палладия на угле
(10%). Затем гидрируют под давлением одной атмосферы с помощью водорода в течение 4 ч. Катализатор фильтруют на кизельгуре марки Celite®, , а
фильтрат перегоняют на ротационном
испарителе. Остаток декантируют смесью дихлорметана и диэтилового эфира в соотношении 1:1. Продукт отсасывают и сушат при 35oC в вакуумном сушильном
шкафу. Выход: 2,7 г (68%).
Полученный согласно г) продукт (2,7 г, 19,97 ммоль) растворяют в 50 мл дихлорметана, к смеси добавляют 2,8 мл (19,97 ммоль) триэтиламина.
После этого прикапывают раствор 4,36 г (19,97 ммоль)
ди-трет.-бутилдикарбоната в 30 мл дихлорметана. После перемешивания при комнатной температуре в течение 2 ч прибавляют воду, и водную фазу
экстрагируют ди-хлорметаном. Объединенные органические фазы
сушат над сульфатом натрия и перегоняют на ротационном испарителе. Сырой продукт без дальнейшей очистки вводят в последующую реакцию.
Выход: 4,4 г (94%).
Полученный согласно д) продукт (4,3 г, 18,27 ммоль) растворяют в 100 мл смеси метанола и дихлорметана в соотношении 1:1,
добавляют 3,17 г
(45,61 ммоль) гидроксиламингидрохлорида. Затем прикапывают при комнатной температуре 19,1 мл (109,65 ммоль) этилдиизопропиламина. Перемешивают при 40oC в течение 12 ч.
После этого
растворитель отгоняют на ротационном испарителе, к остатку прибавляют воду, затем его с помощью уксусной кислоты подкисляют до значения pH 5 и экстрагируют дихлорметаном и этилацетатом.
Объединенные
органические фазы сушат над сульфатом натрия и перегоняют на ротационном испарителе. Сырой продукт очищают путем хроматографии на силикагеле с применением в качестве элюента смеси
дихлорметана и
метанола в соотношении 95:5. Выход: 3,4 г (69%).
Полученный согласно е) продукт (3,4 г, 12,67 ммоль) растворяют в 150 мл метанола,
добавляют 1,45 г
(25,31 ммоль) уксусной кислоты и 421 мг никеля Ренея. Затем гидрируют при 50oC под давлением одной атмосферы с помощью водорода в течение 5 ч. После охлаждения до
комнатной температуры
катализатор фильтруют на кизельгуре марки Celite®, и фильтрат сгущают. Полученный таким образом продукт без дальнейшей очистки вводят в последующую реакцию.
Выход: 3,7 г (94%).
а)
5-циано-1-метилпиррол-3-карбальдегид
24,24 г (180,86 ммоль) трихлорида алюминия растворяют в 320 мл смеси нитрометана и дихлорметана в соотношении 1:1 и охлаждают до -20oC, к
смеси
добавляют 8 г (75,36 ммоль) 1-метилпиррол-2-карбонитрила. Затем прикапывают 10,4 г (90,43 ммоль) простого α,α -дихлордиметилэфира, растворенного в 42 мл дихлорметана. После
перемешивания
при 0oC в течение 4 ч исходную смесь наливают на лед (200 г). Водную фазу экстрагируют диэтиловым эфиром. Объединенные органические фазы подвергают нейтрализующей промывке с
применением
насыщенного раствора гидрокарбоната натрия, воды и насыщенного раствора хлорида натрия. После
сушки над сульфатом натрия растворитель отгоняют на ротационном испарителе. Сырой продукт
без дальнейшей
очистки вводят в последующую реакцию. Выход: 9,2 г (91%).
а)
5-циано-1-метилпиррол-2-карбальдегид
10 г (91,6 ммолль) 1-метилпиррол-2-карбальдегида растворяют в 100 мл ацетонитрила и охлаждают до -45oC. Прикапывают 38,9 г (274,9 ммоль)
хлорсульфонилизоцианата в 40 мл ацетонитрила в течение 40 мин. Затем перемешивают при комнатной температуре в течение 12 ч. После добавки каплями 35 мл диметилформамида нагревают до 50oC в
течение часа. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь подают на 200 мл льда и 286 мл 2N натрового щелока. Образовавшийся осадок отсасывают. Фильтрат экстрагируют диэтиловым
эфиром.
Объединенные эфирные фазы подвергают нейтрализующей промывке с применением разбавленного раствора гидрокарбоната натрия и воды и сушат над сульфатом натрия. Растворитель отгоняют в вакууме,
создаваемом при помощи водоструйного насоса, и остаток объединяют с заранее полученным осадком. В результате перекристаллизации из петролейного эфира получают 4,3 г
4-циано-1-метилпиррол-2- карбальдегида (см. , напр., C.E, Loader и др. Can. J. Chem. (1981), 59,2673-6).
а) N-Вос-5-аминометил-3-циано-1,2,4-оксадиазол
Сложный этиловый эфир N-Вос-5-аминометил-3-циано- 1,
2,
4-оксадиазол-2-карбоновой кислоты (S. Borg и др., J. Org. Chem. 1995, 60, 3112-20) растворяют в 50 мл метанола. В этот раствор при -10oC до комнатной температуры подают аммиак до
завершения
реакции. Растворитель отгоняют на ротационном испарителе. Полученный таким образом сырой продукт растворяют в 70 мл дихлорметана и к этому раствору при -5oC добавляют 2,9 мл (16,
55 ммоль)
диизопропилэтиламина. Затем прикапывают 1,06 мл (7,61 ммоль) ангидрида трифторуксусной кислоты, растворенного в 10 мл дихлорметана. После перемешивания при 0oC в течение полтора
часа
исходную смесь разбавляют дихлорметаном, экстрагируют 2 раза насыщенным раствором гидрокарбоната натрия, 2 раза 5%-ным раствором лимонной кислоты и раз насыщенным раствором хлористого натрия, а
затем
ее сушат над сульфатом натрия. Растворитель отгоняют на ротационном испарителе, а сырой продукт очищают путем хроматографии на силикагеле с применением смеси дихлорметана с метанолом в
соотношении 97,
5:2,5. Выход 1,2 г (80%).
Полученный согласно а) продукт (0,9 г, 4,0 ммоль) растворяют в 45 мл
дихлорметана, к раствору
при комнатной температуре добавляют 3,9 мл (15,61 ммоль) 4 М соляной кислоты в диоксане. Перемешивают при комнатной температуре в течение 16 ч, затем растворитель отгоняют на
ротационном испарителе.
Выход: 645 мг (100%).
а)
Сложный метиловый эфир N-метил-5-амидо-пиразол-3-карбоновой кислоты
Хлорид N-метил-3-метоксикарбонил-пиразол-5-карбоновой
кислоты (полученный из 3,7 г (20,09 ммоль)
N-метил-3-метоксикарбонил-3-карбоновой кислоты, см. J. Org. Chem. 1989, 54, 428) растворяют в толуоле и охлаждают до -10oC. Затем при -10oC до 0oC вводят аммиак до
завершения реакции. Растворитель отгоняют на ротационном испарителе. Остаток подают в этанол. Перемешивают в течение 15 мин, затем этанол отгоняют на
ротационном испарителе, остаток растворяют в
теплой воде и дают осаждаться путем охлаждения до 0oC. Осадок отсасывают, промывают ацетоном и сушат в вакууме при 45oC. Выход: 1,5
г (41%).
Полученный согласно а) продукт (1,5 г, 8,19 ммоль) подают в 20 мл дихлорметана. При -10oC прибавляют 3,85 мл (22,11 ммоль)
диизопропилэтиламина и при той же температуре прикапывают раствор 1,3 мл (9,94 ммоль) ангидрида трифторуксусной кислоты в 5 мл дихлорметана в течение 45 мин.
После этого перемешивают при 0o
C в течение дальнейшего часа. Исходную смесь разбавляют дихлорметаном и промывают два раза насыщенным раствором гидрокарбоната натрия, 2 раза 5%-ным
раствором лимонной кислоты и раз насыщенным
раствором хлористого натрия. После сушки над сульфатом натрия растворитель отгоняют на ротационном испарителе. Выход: 1,35 г (100%).
Полученный согласно б) продукт (1,35 г, 8,19 ммоль) подают в 50 мл метанола
и охлаждают до -10oC. Затем вводят
аммиак в течение 8 ч. После перемешивания при комнатной температуре в течение 12 ч эдукт прореагировал. Осажденный продукт отсасывают, промывают холодным
метанолом и сушат в вакууме. Выход: 1,22 г
(100%).
Полученный согласно в) продукт (0,4 г, 2,66 ммоль) растворяют в 30 мл уксусной кислоты, к раствору добавляют 78 мг 10%-ного палладия на
угле. Затем при комнатной температуре и
атмосферном давлении гидрируют, пока не будет полностью завершена реакция. Катализатор фильтруют на кизельгуре марки Celite®, и растворитель
отгоняют на ротационном испарителе.
Выход: 0,4 г (100%).
Гидроацетат
N-(гидроксикарбонил-метилен)-(D)- циклогексилаланил-3,
4-дегидропролил-5-(2-амидино)-тиенилметиламида
а)3,4-дегидропролил-5-(2-циано)-тиенилметиламид
5 г (23,4 ммоль) Вос-3,
4-дегидропролила и 4,5 г (25,8 ммоль) гидрохлорида
5-аминометил-2-цианотиофена растворяют в 25 мл дихлорметана. К раствору при 0oC добавляют 28 мл (163,8 ммоль) этилдиизопропиламина с
50%-ным раствором ангидрида пропанфосфоновой кислоты в
24 мл (117 ммоль) этилацетата. Перемешивают при 0oC в течение часа, затем нагревают до комнатной температуры и дополнительно
перемешивают при комнатной температуре в течение 12 ч.
Реакционную смесь разбавляют ди-хлорметаном и промывают 4 раза раствором гидросульфата натрия, 3 раза раствором гидрокарбоната натрия и раз
насыщенным раствором хлористого натрия. После сушки над
сульфатом натрия и отфильтровывания осушителя растворитель отгоняют в вакууме, создаваемом при помощи водоструйного насоса. Для отщепления
Вос-группы к остатку прибавляют 95 мл дихлорметана, затем
перемешивают при комнатной температуре, упаривают досуха, два раза подвергают совместной перегонке с дихлорметаном, снова сгущают и очищают
путем колоночной хроматографии. Получают 6,6 г желаемого
продукта, содержащего еще небольшое количество растворителя.
7,3 г (18,98 ммоль) t-BuO2C-Boc-(D)-Cha-OH и 5,12 г (18,98 ммоль)
H-Pyr-NH-CH2-5-(2-CN)-tioph-гидрохлорида растворяют в 100 мл дихлорметана. К раствору добавляют 12,26 г (94,9
ммоль) этилдиизопропиламина. Реакционную смесь охлаждают до 0oC,
затем прикапывают 20 мл 50%-ный раствор ангидрида пропанфосфоновой кислоты в этилацетате. Перемешивают при 0-10oC
в течение 3 ч, затем разбавляют 100 мл дихлорметана и промывают 3 раза
разбавленным раствором гидросульфата натрия, 2 раза насыщенным раствором гидрокарбоната натрия и раз водой. После сушки над
сульфатом натрия и отделения осушителя растворитель отгоняют в вакууме,
создаваемом при помощи водоструйного насоса. Получают 12,47 г коричневатого масла.
Полученный согласно б) продукт растворяют в 70 мл пиридина и 12 мл
триэтиламина. Реакционную смесь охлаждают до 0oC и
насыщают сероводородом (раствор принимает зеленый цвет). После этого при комнатной температуре дополнительно перемешивают в течение 48 ч.
Избыточный сероводород вытесняют с помощью азота, и
растворитель отгоняют в вакууме, создаваемом при помощи водоструйного насоса. Остаток растворяют в 200 мл диэтилового эфира, промывают 2 раза
насыщенным раствором гидросульфата натрия, 2 раза
насыщенным раствором гидрокарбоната натрия и раз водой. После сушки над сульфатом натрия растворитель отгоняют в вакууме, создаваемом при помощи
водоструйного насоса. Сырой продукт (12,6 г) очищают
путем хроматографии на силикагеле. Градиент: дихлорметан до смеси дихлорметана с метанолом в соотношении 40:1. Получают 12,1 г желаемого продукта,
содержащего еще небольшое количество
растворителя.
Полученный
согласно в) продукт растворяют в 120 мл дихлорметана, к раствору добавляют 16,24 г (114,38 ммоль) метилйодида.
Перемешивают при комнатной температуре в течение 12 ч, затем растворитель отгоняют в
вакууме, создаваемом при помощи водоструйного насоса. Получают 14,6 г желтоватого масла.
Полученный согласно г) сырой продукт растворяют в 90 мл
ацетонитрила, к раствору добавляют 2,94 г (38,12 ммоль) ацетата аммония. Перемешивают
при комнатной температуре в течение 2 ч и при 40oC в течение полтора часа, затем прибавляют 14,65 г (19,
05 ммоль) раствора ацетата аммония в метаноле. При 50oC перемешивают в
течение дальнейших четырех с половиной часов и отгоняют растворитель в вакууме, создаваемом при помощи водоструйного
насоса. К остатку добавляют дихлорметан, соли отсасывают и фильтрат сгущают.
Остаток через ионообменних (фирмы Флюка, зак. N 00402) переводят в ацетатную соль. Таким образом получают 11,15 г
желтоватого масла.
Полученный согласно д) продукт
растворяют в 175 мл дихлорметана, затем каплями прибавляют
38,3 мл раствора эфирной соляной кислоты. Перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч, после этого растворитель 2 раза отгоняют в
вакууме, создаваемом при помощи водоструйного насоса. Сырой
продукт очищают при помощи ионообменника (фирмы Флюка, зак. N 00402) путем последующей хроматографии на силикагеле. Градиент: смесь
дихлорметана с метанолом в соотношении 4:1, смесь дихлорметана,
метанола и 50%-ной уксусной кислоты в соотношении 40:10:2 до смеси дихлорметана, метанола и 50%-ной уксусной кислоты в соотношении
35:15:5. Полученный таким образом продукт растворяют в воде.
Отфильтровывают от нерастворимых составных частей, и фильтрат лиофилизируют. При этом получают 5,55 г аморфного твердого вещества белого
цвета.
Аналогично примеру 1 получают следующие соединения:
Пример 2:
Гидроацетат
N-(гидроксикарбонил-этилен)-(D)- циклогексилаланил-3,
4-дегидропролил-5-(2-амидино)- тиенилметиламида
Масс-спект: бомбардировка быстрыми атомами (M+H+): 476
Получение
осуществляют через несколько стадий аналогично примеру 1,
исходя из N-трет. -бутоксикарбонил-этилен)-(N-Вос)-(D)- циклогексилаланина и 3,4-дегидропролил-5-(2-циано)-тиенилметиламида.
Гидроацетат
N-(гидроксикарбонил-метилен)-(D)- циклогексилглицил-3,4-дегидропролил-5-(2-амидино)-тиенилметиламида
Масс-спектр; бомбардировка быстрыми атомами (M+H+
): 448
Получение
осуществляют через несколько стадий аналогично примеру 1, исходя из N-трет. -бутоксикарбонил-метилен)-(N-Вос)-(D)- циклогексилглицина и 3,
4-дегидропролил-5-(2-циано)-тиенилметиламида.
Гидроацетат N-(гидроксикарбонил-метилен)-(D)- циклогексилаланил-3,4-дегидропролил-5-(2-амидино-3,
4-диметил)- тиенилметиламида
Масс-спектр: бомбардировка быстрыми атомами
(M+H+): 490
Получение осуществляют аналогично примеру 1, исходя из амида 5-аминометил-3,
4-диметил-тиофен-2-карбоновой кислоты путем сочетания с Вос-3,4-дегидропролином до
получения Вос-3,4- дегидропролил-5-(2-карбамоил-3,4-диметил)-тиенилметиламида. После отщепления Вос-защитной группы
этот структурный элемент аналогично примеру 1 сочетают с
N-(трет.-бутоксикарбонил-метилен)-(N-Вос)- (D)-циклогексилаланина. Дегидратизацию амидной функции до нитрильной функции осуществляют по
следующему способу:
4,8 г (7,42 ммоль)
N-(трет.-бутоксикарбонил-метилен)-(N-Вос)- (D)-циклогексилаланил-3,4-дегидропролил-5-(2-карбамоил-3,4- диметил)-тиенилметиламида растворяют в 60 мл
хлористого метилена, к раствору добавляют 3,83 г
(29,64 ммоль) диизопропилэтиламина и охлаждают до 0oC. Затем медленно прикапывают 2,8 г ангидрида трифторуксусной кислоты в 3 мл хлористого
метилена и дополнительно перемешивают при
0-5oC в течение 2 ч. После этого разбавляют при помощи 60 мл хлористого метилена, и реакционную смесь последовательно промывают 3 раза 20%-ной
лимонной кислотой, взятой в количестве по 20
мл, два раза насыщенным раствором гидрокарбоната натрия, взятым в количестве по 20 мл, и два раза насыщенным раствором поваренной соли, фазу хлористого
метилена сушат над сульфатом натрия и
перегоняют на ротационном испарителе в вакууме. Получают 5,35 г содержащего еще небольшое количество растворителя N-(трет.
-бутоксикарбонил-метилен)-(N-Вос)-(D)- циклогексилаланил-3,
4-дегидропролил-5- (2-циано-3,4-диметил)-тиенилметиламида, который непосредственно вводят в последующую стадию.
Гидроацетат
N-(гидроксикарбонил-метилен)-(D)-циклогексилаланил- 3,
4-дегидропролил-5-(3-амидино)-тиенилметиламида
Масс-спектр; бомбардировка быстрыми атомами (M+H+): 462
Получение
осуществляют аналогично примеру 1, при этом вместо
гидрохлорида 5-аминометил-2-цианотиофена применяют гидрохлорид 5- аминометил-3-цианотиофена.
Гидроацетат
N-(гидроксикарбонил-метилен)-(D)- циклогексилаланил-3,
4-дегидро-пролил-4-(2-амидино)- тиенилметиламида
Масс-спектр: бомбардировка быстрыми атомами (M+H+): 462
Получение
осуществляют аналогично примеру 1, при этом вместо
гидрохлорида 5-аминометил-2-цианотиофена используют гидрохлорид 4- аминометил-2-цианотиофена.
Гидроацетат
N-(1-гидроксикарбонил-метилен)-(D)- циклогексилаланил-(D)-4,5-дегидропипецолил-5-(2-амидино)- тиенилметиламида
Масс-спектр: бомбардировка быстрыми атомами (М+H+: 476
Пример 7б:
Гидроацетат N-(гидроксикарбонил-метилен)-(D)- циклогексилаланил-4,5-дегидропипеколил-5-(2-амидино)- тиенилметиламида
Масс-спектр: бомбардировка быстрыми атомами (М+H+): 476
Получение осуществляют аналогично примеру 1, при этом вместо Вос-3,4-дегидропролина используют рацемическую Boc-(D, L)-4,5- дегидропипеколиновую кислоту. В стадии
N-(трет.-бутоксикарбонилметилен)-(N-Вос)-(D)-циклогексилаланил-(D, L)-4,5- дегидропипеколил-5-(2-циано)-тиенилметиламида можно разделять оба диастереомерных соединения путем хроматографии на
силикагеле с применением в качестве элюента смеси циклогексана со сложным этиловым эфиром уксусной кислоты в соотношении 7:3. Оба диастереомера затем переводят аналогично примеру 1 в целевые
продукты.
Гидроацетат N-(гидроксикарбонил-метилен)-(D)- циклогексилглицил-3,4-дегидропролил-5-(3-амидино)- тиенилметиламида
Масс-спектр: бомбардировка
быстрыми атомами (М+H+): 448
Получение осуществляют аналогично примеру 1, при этом исходят из эдуктов 5-аминометил-3-цианотиофен и
N-(трет.- бутоксикарбонилметилен)-N-Вос-(D)-циклогексилглицил-3,4- дегидропролин.
Гидроацетат N-(гидроксикарбонил-метилен)-(D)- циклогексилглицил-3,
4-дегидропролил-4-(2-амидино)- тиенилметиламида
Масс-спектр: бомбардировка быстрыми атомами (М+H+): 448
Получение осуществляют аналогично примеру 1, при этом исходят из
эдуктов 4-аминометил-2-цианотиофен и N-(трет.- бутоксикарбонилметилен)-N-Вос-(D)-циклогексилглицил-3,4- дегидропролин.
Гидроацетат
N-(гидроксикарбонил-метилен)-(D)- циклогексилаланил-3,4-дегидропролил-5-(2-амидино)-фуранилметиламида
Масс-спектр: бомбардировка быстрыми атомами (М+H+): 446
Получение
осуществляют аналогично примеру 1, при этом вместо гидрохлорида 5-аминометил-2-цианотиофена используют гидрохлорид 5- аминометил-2-цианофурана.
Гидроацетат
N-(гидроксикарбонил-этилен)-(D)-циклогексилаланил- 3,4-дегидропролил-5-(2-амидино)-фуранилметиламида
Масс-спектр: бомбардировка быстрыми атомами (М+H+): 460
Получение
осуществляют аналогично примеру 1, при этом вместо гидрохлорида 5-аминометил-2-цианотиофена используют гидрохлорид 5-аминометил-2-цианофурана.
Гидроацетат
N-(гидроксикарбонил-метилен)-(D)- циклогексилглицил-3,4-дегидропролил-5-(2-амидино)-фуранилметиламида
Масс-спектр: бомбардировка быстрыми атомами (m-H+): 432
Пример
13:
Гидроацетат N-(гидроксикарбонил-метилен)-(D)-циклогексилаланил- 3,4-дегидропролил-5-(3-амидино)-фуранилметиламида
Масс-спектр: бомбардировка быстрыми атомами (М+H+):
446
Пример 14:
Гидрохлорид N-(1-идроксикарбонил-метилен)-(D)- циклогексилаланил-3,4-дегидропролил-5-(2-амидино-1-метил)- пирролметиламида
а) 1,5 г (4,4 ммоль) гидроацетата
5-(N-Вос-аминометил)-1- метилпиррол-2-амидина растворяют в 70 мл изопропанола, после чего добавляют 4,5 мл (24,0 ммоль) 5,5 М изопропанолевой соляной кислоты и нагревают до 50oС в течение
2
ч. После охлаждения до комнатной температуры растворитель отгоняют на ротационном испарителе, остаток подают в раствор 50 мл t-BuO2C-CH-(Boc)-(D)-Cha-Pyr-OH в диметилформамиде. Раствор
охлаждают до 0oC, затем прибавляют 1,92 мл (17,44 ммоль) N-метилморфолина. После этого добавляют по порциям 1,18 г (3,58 ммоль) TOTU. Перемешивают при 0oC в течение 45 мин,
затем
растворитель отгоняют на ротационном испарителе и сырой продукт очищают путем среднепроизводительной жидкостной хроматографии на RP 18 (элюент: смесь ацетонитрила с водой). Выход: 980 мг
(45%).
Гидрохлорид
N-(гидроксикарбонил-метилен)-(D)- циклогексилаланил-3,4-дегидропролил-2-(4-амидино-1-метил)- пирролметиламида получают аналогично примеру 14.
Гидрохлорид N-(гидроксикарбонил-метилен)-(D)- циклогексилаланил-3,4-дегидропролил-4-(2-амидино-1-метил)- пирролметиламида получают
аналогично примеру 14.
Гидрохлорид
N-(трет.-бутоксикарбонил-метилен)-(N-Вос)-(D)- циклогексилаланил-3,4-дегидропролил-2-(4- амидотиокарбонил)оксазолметиламида
а) 2,36 г (4,92 ммоль) t-BuO2C-CH2
-(Boc)-(D)-Cha-Pyr-OH растворяют в 60 мл дихлорметана. Прикапывают при -10oC 4,3 мл (24,59 ммоль) диизопропилэтиламина. При той же температуре перемешивают в течение 5 мин, затем
прибавляют
гидрохлорид 2- аминометил-оксазол-4-тиокарбамида (1 г, 5,16 ммоль, см. G. Videnov и др., Angew. Chem. 1996, 108, 1604-9, Вос-группа описанного в этой литературе
N-Вос-2-аминометилоксазол-4-тиокарбамида расщепляют с помощью эфирной соляной кислоты, и соответствующий гидрохлорид получают путем сгущения, а затем прикапывают 5,06 мл (6,39 ммоль) 50%-ного
раствора
ангидрида пропанфосфоновой кислоты в сложном этиловом эфире уксусной кислоты, разбавленного 10 мл дихлорметана, в течение 20 мин. Перемешивают при 0oC в течение часа, затем
нагревают до
комнатной температуры в течение 3 ч. Исходную смесь разбавляют дихлорметаном, промывают 2 раза насыщенным раствором гидрокарбоната натрия, 2 раза 5%-ным раствором лимонной кислоты и раз
насыщенным
раствором хлористого натрия и сушат над сульфатом натрия. Растворитель отгоняют на ротационном испарителе и сырой продукт очищают путем хроматографии с применением в качестве элюента смеси
дихлорметана и метанола в соотношении 95:5. Выход: 2,5 г (82%).
Полученный согласно
а)
продукт растворяют в 50 мл ацетона, затем к раствору добавляют 1,97 мл (31,29 ммоль) метилйодида и нагревают с обратным холодильником в течение 2 ч. Растворитель и избыточный метилйодид отгоняют
на
ротационном испарителе. Полученный таким образом сырой продукт растворяют в 50 мл тетрагидрофурана, после чего добавляют 466 мг (6,05 ммоль) ацетата аммония. Нагревают до 60oC в течение
полтора часа. Растворитель отгоняют на ротационном испарителе, и сырой продукт при помощи ионообменника (ацетата на полимерном носителе, Флюка 00402) переводят в ацетат, который затем очищают путем
хроматографии на силикагеле с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и уксусной кислоты в соотношении 75:20:5. Выход: 2,0 г (75%).
Полученный
согласно б) продукт (1,95 г, 2,94 ммоль) растворяют в 50 мл дихлорметана, затем к раствору добавляют 3,7 мл (14,71 ммоль) 4 М соляной кислоты в диоксане. Перемешивают при комнатной температуре в
течение 20 ч, после чего растворитель отгоняют на ротационном испарителе, сырой продукт растворяют в воде и лиофилизируют. Выход: 1,5 г, (100%).
Гидрохлорид
N-(гидроксикарбонил-метилен)-(D)- циклогексилаланил-3,4-дегидропролил-5-(3-амидино)-1,2,4- оксадиазолметиламида
а) N-(трет. -бутоксикарбонил-метилен)-(N-Вос)-(D)- циклогексилаланил-3,
4-дегидропролил-5-(3-циано)-1,2,4- оксадиазолметиламид
1,93 г (4,0 ммоль) N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-Pyr-OH растворяют в 65 мл дихлорметана, затем к раствору при
-10oC добавляют 3,1 мл (17,67 ммоль) диизопропилэтиламина. После этого прибавляют 645 мг (4,0 ммоль) гидрохлорида 5-аминометил-3-циано-1,2,4-оксалиазола, растворенного в 30 мл
дихлорметана.
Перемешивают в течение 5 мин, затем прикапывают 3,9 мл (4,93 ммоль) разбавленного с помощью 15 мл дихлорметана 50%-ного раствора ангидрида пропанфосфоновой кислоты в сложном этиловом
эфире уксусной
кислоты в течение 30 мин. По истечении часа при температуре 0oC исходную смесь разбавляют дихлорметаном, промывают 2 раза насыщенным раствором гидрокарбоната натрия, 2 раза
5%-ным раствором
лимонной кислоты и раз насыщенным раствором хлористого натрия. После сушки над сульфатом натрия растворитель отгоняют на ротационном испарителе и сырой продукт очищают путем
хроматографии с
применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 95: 5. Выход: 1,55 г (71%).
Полученный согласно а)
продукт (1,5 г,
2,56 ммоль) растворяют в 5 мл метанола, затем добавляют 450 мг (2,76 ммоль) ацетилцистеина. После этого при 35oC вводят аммиак до полного завершения реакции. Растворитель
отгоняют на
ротационном испарителе, а сырой продукт с помощью ионообменника (ацетата на полимерном носителе Флюка 00402) переводят в ацетат. Полученный таким образом сырой продукт очищают путем
хроматографии
(RP-18, элюент: смесь ацетонитрила с водой). Выход: 300 мг (18%).
Полученный согласно б) продукт (300 мг, 0,45 ммоль) растворяют в 20 мл
дихлорметана, затем при комнатной температуре добавляют 0,6 мл (2,48 ммоль) 4 М раствора соляной кислоты в диоксане. Перемешивают при комнатной температуре в течение 20 ч, после чего растворитель
отгоняют на ротационном испарителе, продукт растворяют в воде и лиофилизируют. Выход 230 мг (98%).
Гидрохлорид N-(гидроксикарбонил-метилен)-(D)-циклогексилаланил- 3,4-дегидропролил-5-(3-амидино-N-метил)пиразолметиламида
а) N-(трет.
-бутоксикарбонил-метилен)-(N-Вос)-(D)- циклогексилаланил-3,4-дегидропролил-5-(3-амидо-N-метил)-1,2,4- пиразолметиламид
1,25 г (2,59 ммоль) N-(t-BuO2C-CH2
)-N-Boc-(D)-Cha-Pyr-OH подают в 30 мл дихлорметана. При -10oC прикапывают 1,95 мл (11,16 ммоль) диизопропилэтиламина. После этого прибавляют 0,4 г (2,59 ммоль) раствора амида
N-метил-5-аминометил-пиразол-3-карбоновой кислоты в 20 мл тетрагидрофурана. Перемешивают в течение 5 мин, затем прикапывают 2,36 мл (3,11 ммоль) 50%-ного раствора ангидрида пропанфосфоновой кислоты в
сложном этиловом эфире уксусной кислоты и 5 мл дихлорметана в течение 5 мин. Перемешивают при 0oC в течение 45 мин, после чего нагревают до комнатной температуры в течение 12 ч.
Растворитель отгоняют на ротационном испарителе, остаток подают в дихлорметан и промывают 2 раза насыщенным раствором гидрокарбоната натрия, 2 раза 5%-ным раствором лимонной кислоты и раз насыщенным
раствором хлористого натрия. После сушки над сульфатом натрия растворитель отгоняют на ротационном испарителе. Сырой продукт очищают путем хроматографии (RP-18, элюент: смесь ацетонитрила с водой).
Выход: 220 мг (14%).
Полученный согласно а) продукт (220 мг, 0,36 ммоль) растворяют в 15 мл дихлорметана, затем при -10oC добавляют 0,17 мл
(0,96 ммоль) диизопропилэтиламина. Перемешивают в течение 5 мин, после чего прикапывают 0,057 мл (0,41 ммоль) раствора ангидрида трифторуксусной кислоты в 1 мл дихлорметана. По истечение часа
разбавляют при 0oC дихлорметаном. Промывают 2 раза насыщенным раствором гидрокарбоната натрия, 2 раза 5%-ным раствором лимонной кислоты и раз насыщенным раствором хлористого натрия. После
сушки над сульфатом натрия растворитель отгоняют на ротационном испарителе. Выход: 180 мг (84%).
Полученный согласно б) продукт (180 мг, 0,3 ммоль) растворяют в 1 мл метанола, затем добавляют 52,8 мг (0,32 ммоль) ацетилцистеина.
После этого при 35oC вводят аммиак до полного завершения реакции. Растворитель отгоняют на ротационном испарителе, а сырой продукт при помощи ионообменника (ацетат на полимерном носителе
Флюка 00402) переводят в ацетат. Сырой продукт очищают путем хроматографии (RP- 18, элюент: смесь ацетонитрила с водой). Выход: 50 мг (16%). Масс-спектр: бомбардировка быстрыми атомами (М+H+
): 616.
Полученный согласно в) продукт
(50 мг, 0,
081 ммоль) растворяют в 5 мл дихлорметана, затем добавляют 0,147 мл 5 М соляной кислоты в диэтиловом эфире. Перемешивают при комнатной температуре в течение 12 ч, после этого растворитель
отгоняют на
ротационном испарителе, продукт подают в воду и лиофилизируют. Выход: 40 мг (92%).
Гидрохлорид N-(гидроксикарбонил-метилен)-(D)-циклогексилаланил- 3,4-дегидропролил-5-(3-амидино)-изоксазолметиламида
Получение осуществляют исходя из амида
5-аминометилизоксазол- 3-карбоновой кислоты и Вос-3,4-дегидропролина. После сочетания и отщепления Вос-защитной группы полученный структурный элемент сочетают с
N-(трет.-бутоксикарбонил-метилен)-(N-Вос)-(D)- циклогексилаланином до получения N-(трет.-бутоксикарбонил-метилен) -(N-Вос)-(D)-циклогексилаланил-3,
4-дегидропролил-5-(3- карбамоил)-изоксазолметиламида.
После дегидратизации первичного амида до нитрильной функции аналогично примеру 4 осуществляется получение амидина по описанному ниже способу.
1,75 г (3,0 ммоль)
N-(трет.-бутоксикарбонилметилен)-(N-Вос)- (D)-циклогексилаланил-3,4-дегидропролил-5-(3-циано)- изоксазолметиламида растворяют в 10 мл метанола, к раствору прибавляют 0,54 г (3,28 ммоль)
N-ацетилцистеина. При пропускании газообразного аммиака нагревают с обратным холодильником в течение 4 ч. Отщепление N-ацетилцистеина, очистка продукта и перевод в соль ацетата осуществляют путем
среднепроизводительной жидкостной
хроматографии (RP-18, элюент: смесь ацетонитрила с водой и 0,1 М уксусной кислотой). После сублимационной сушки получают 1,39 г белого порошка (70% теории).
Гидроацетат N-(гидроксикарбонил-метилен)-(D)- циклогексилаланил-3,4-дегидропролил-2-(4-амидино)-тиазолметиламида
Масс-спектр:
бомбардировка
быстрыми атомами (М+H+): 463.
Гидрохлорид N-(гидроксикарбонил-метилен)-(D)- циклогексилглицил-3,
4-дегидропролил-2-(4-амидино)-тиазолметиламида
Масс-спектр: бомбардировка быстрыми атомами (М+H+): 449.
Гидроацетат
N-(гидроксикарбонил-метилен)-(D)- циклогексилаланил-3,4-дегидро-пролил-4-(2-амидино)-тиазолметиламида
Масс-спектр: бомбардировка быстрыми атомами (М+H+): 463.
Гидроацетат N-(гидроксикарбонил-метилен)-(D)- циклогексилглицил-3,4-дегидропролил-4-(2-амидино)-тиазолметиламида
Масс-спектр: бомбардировка быстрыми атомами
(М+H+): 449.
Гидроацетат N-(гидроксикарбонил-метилен)-(D)- циклогексилаланил-3,
4-дегидропролил-2-(5-амидино)-тиазолметиламида
Масс-спектр: бомбардировка быстрыми атомами (М+H+): 463.
Гидроацетат N-(гидроксикарбонил-метилен)-(D)- циклогексилглицил-3,4-дегидро-пролил-2-(5-амидино)-тиазолметиламида
Масс-спектр: бомбардировка быстрыми атомами
(М+H+): 449.
Гидроацетат N-(гидроксикарбонил-метилен)-(D)- циклогексилаланил-3,
4-дегидропролил-5-(2-амидино)-тиазолметиламида
Масс-спектр: бомбардировка быстрыми атомами (М+H+): 463.
Гидроацетат N-(гидроксикарбонил-метилен)-(D)- циклогексил-3,4-дегидропролил-5-(2-амидино)-тиазолметиламида
Масс-спектр: бомбардировка быстрыми атомами (М+H+): 449.
Гидрохлорид N-(этилоксикарбонил-метилен)-(D)- циклогексилаланил-3,
4-дегидропропил-2-(4-амидино)тиазолметиламида
1,5 г (3,24 ммоль) HO2C-CH2-(D)-Cha-Pyr- NH-CH2-2-(4-am)-thiaz (соединение примера 21) растворяют в 50 мл
этанола, смешивают с 10 мл 5N соляной кислоты в диэтиловом эфире и реакционную смесь перемешивают при температуре 60oC в течение 4 ч. Согласно данным тонкослойной хроматографии с
применением в качестве элюента смеси хлористого метилена, метанола, уксусной кислоты и воды в соотношении 35:17:3,5:3,5 конверсия полная. После упаривания реакционной смеси в ротационном испарителе
многократно перегоняют смесью хлористого метилена и диметилового эфира с тем, чтобы удалить прилипшую соляную кислоту. Затем продукт растворяют в небольшом количестве хлористого метилена, осаждают
диэтиловым эфиром, остаток отсасывают и сушат в вакууме. Получают 1,8 г целевого продукта в виде белого, гигроскопического вещества.
Масс-спектр: ионизация электронным ударом (М+H+): 524.
Масс-спектр: бомбардировка быстрыми атомами (М+H+): 547.
Масс-спектр: ионизация электронным ударом
(М+H+): 533.
Кровь отобрали из
бедренной вены здоровых
добровольцев обоих полов, которые по крайней мере за одну неделю до начала опыта не принимали лекарств. Кровь перемешивали с 0,13 моль/л раствора цитрата натрия в объемном
соотношении 9:1. Полученную
кровь центрифугировали со скоростью 250 g в течение 10 мин при комнатной температуре с тем, чтобы получить богатую тромбоцитами плазму. Бедную же тромбоцитами плазму
получали путем центрифугирования
со скоростью 3600 g в течение 20 мин. Богатую и бедную тромбоцитами плазму подавали в герметичные полиэтиленовые трубки, которые хранили при комнатной температуре до
проведения опыта (но не больше 3
ч). Агрегацию тромбоцитов, вызываемую тромбином, определяли с помощью микрометода при температуре 37oC в четырехканальном агрегометре типа РАР 4
американской фирмы Биодата Корпорейшн. Перед
добавлением тромбина 215,6 мкл богатой тромбоцитами плазмы инкубировали вместе с 2,2 мкл исследуемого соединения или носителя при температуре 37oC в течение 3 мин без перемешивания и затем
при постоянном перемешивании со скоростью 1000 об/мин. Добавление 2,2 мкл раствора тромбина вызывает максимальную агрегацию, определенную при
температуре 37oC со скоростью перемешивания
1000 об/мин. Ингибирующее действие исследуемых соединений определяли путем сравнения максимальной степени агрегации при заданной концентрации с
кривой контрольной агрегации, вызываемой тромбином в
присутствии носителя. Определяли концентрацию исследуемого соединения в моль/л, обеспечивающую 50 %-ное ингибирование агрегации тромбоцитов,
вызываемой тромбином (обозначенную далее как KT50
).
А формулы (II), где m = n = 0,1 или 2; R1 - группы: гидроксил, карбоксил, С1-6-алкил-ООС; R2 = R3 - водород, алкил с 1-4 атомами углерода;
В
формулы (III), где R4 - водород, алкил с 1-4 атомами углерода или R1
- (СН)m - (при этом R1 и m имеют вышеуказанные значения); Р - 0 или 1;
R5 - водород или алкил с 1-4 атомами углерода; R6 - водород, алкил с 1-6
атомами углерода, циклоалкил с 3-8 атомами углерода; R4 и R6 вместе могут означать
этиленовую группу; R7 - водород, алкил с 1-8 атомами углерода; R8
- водород, алкил с 1-4 атомами углерода;
Е формулы (IV), где q - 0 или 1;
D формул (Va), (Vb),
(Cc), где R9 - водород, алкил с 1-3 атомами углерода; R10 =
R11 - водород, алкил с 1-4 атомами углерода;
Х - кислород, сера, NR12 (R12 =
водород, алкил с 1-6 атомами углерода),
Y - азот = или -CR13
= (R13 = водород, алкил с 1-4 атомами углерода);
Z - азот = или -CR13=, где R13
имеет вышеуказанное значение,а также их соли с физиологически переносимыми
кислотами. Вышеуказанные соединения обладают свойствами ингибиторов тромбина. Описываются также соединения, содержащие
производные пятичленного гетероциклического амидина, в качестве составной части
ингибиторов серинпротеазы и промежуточные соединения. 3 с. и 1 з. п.ф-лы, 1 табл.
где А, В, D и Е имеют следующие значения:
A:
где m - 0, 1 или 2, n
- 0, 1 или 2;
R1 - группы: гидроксил, карбоксил, C1-6-алкил-ООС, R2 - водород, алкил с 1 - 4
атомами углерода, R3 - водород, алкил с 1 - 4 атомами
углерода,
В:
где
R4 - водород, алкил с 1 - 4 атомами углерода или R1-(СН2)m, где R1 и m имеют вышеуказанные значения;
р - 0 или 1;
R5
- водород, алкил с 1-4 атомами углерода;
R6
- водород, алкил с 1 - 6 атомами углерода, циклоалкил с 3 - 8 атомами углерода;
R4 и R6 вместе могут
означать этиленовую группу;
R7 - водород, алкил
с 1 - 8 атомами углерода;
R8 - водород, алкил с 1-4 атомами углерода,
Е:
где q - 0 или 1,
D:
где
R9 - водород, алкил
с 1-3 атомами углерода;
R10 - водород, алкил с 1 -4 атомами углерода;
R11
- водород, алкил с 1 -4 атомами углерода;
Х - кислород, сера, NR12,
где R12 означает водород, алкил с 1 - 6 атомами углерода;
Y - -азот= или -CR13=,
где R13 означает водород, алкил с 1-4 атомами углерода,
Z - -азот=
или -CR13=, где R13 имеет вышеуказанное значение,
а также их соли с
физиологически переносимыми кислотами.
где Е и D имеют указанные в п.1
значения, а у атома азота структурного элемента Е находятся атом водорода, защитная группа или
незамещенный алкильный остаток, в качестве составной части ингибиторов серинпротеазы.
где остатки А, В, Е и D имеют указанное в п.1
значение.
