Способ коррекции тромбообразования резвератролом при ADMA-подобной модели преэклампсии

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии и может быть использовано для коррекции гемостаза у беременных.

Одним из тяжелых осложнений преэклампсии является синдром диссиминированного внутрисосудистого свертывания (ДВС). Развивается он в результате нарушений возникающих в системе гемостаза, а точнее смещение ее в протромбогенную сторону [Vucić N, Frleta M, Petrović D, Ostojić V. Thrombophilia, preeclampsia and other pregnancy complications. Acta Medica Croatica. 2009; 63: 4: 297—305]. Поэтому поиск новых способов коррекции нарушений тромбообразования при преэклампсии, является актуальной задачей современной медицины.

Одним из вариантов коррекции является способ коррекции тромбообразования у беременных животных с помощью производных ГАМК – соединений РГПУ-151, РГПУ-152 и фенибута [Карамышева В. И. Влияние производных ГАМК на кровоснабжение маточно-плацентарного комплекса в условиях нормы и экспериментального гестоза: автореф. дис. канд. мед. наук. Волгоград, 2014].

Недостатком указанного способа является то, что производные ГАМК не оказывают активирующего влияния на АТФ-зависимые (К⁺_АТФ) каналы. Активация этих каналов оказывает антиишемический эффект и уменьшает ишемические явления в плаценте. Согласно современным представлениям о патогенезе преэклампсии ишемия плаценты – одно из основных ее патогенетических звеньев [Ahmed A, Dunk C, Ahmad S, Khaliq A. Regulation of placental vascular endothelial growth factor (VEGF) and placenta growth factor (PIGF) and soluble Flt-1 by oxygen–a review. Placenta (2000) 21([Suppl A]):S16–S24].

В связи свыше изложенным, задачей изобретения является создание эффективного способа коррекции тромбообразования при ADMA-подобной модели преэклампсии, включающей использование резвератрола, являющегося активатором К⁺_АФТ каналов [Novaković R, Radunović N, Marković-Lipkovski J, Ćirović S, Beleslin-Čokić B, Ilić B, Ivković B, Heinle H, Živanović V, Gojković-Bukarica LJ (2015) Effects of the polyphenol resveratrol on contractility of human term pregnant myometrium. Mol Hum Reprod 21(6): 545–551. doi.org/10.1093/molehr/gav011].

Задача достигается тем, что на фоне моделирования преэклампсии в эксперименте внутрибрюшинным введением беременным самкам крыс линии Wistar в течение 7 суток (с 14 по 20 день беременности) ADMA-подобного блокатора эндотелиальной NO-синтазы - N-нитро-L-аргинин-метилового эфира (L-NAME) в дозе 25 мг/кг проводится пероральное введение резвератрола в дозировке 2 мг/кг/сут с 14 по 20 день беременности. Это приводит к выраженной коррекции тромбообразования при моделируемой патологии.

СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ СЛЕДУЮЩИМ ОБРАЗОМ

Эксперимент выполнен на белых крысах-самках линии Wistar массой 250-300 г. ADMA-подобный агент – неселективный блокатор NO-синтазы N-нитро-L-аргинин-метиловый эфир (L-NAME) вводили внутрибрюшинно в дозе 25 мг/кг/сут в течение семи дней (14-20-е сутки беременности). Введение резвератрола осуществляли перорально через зонд в дозировке 2 мг/кг 1р/сутки с 14 по 20 сутки беременности.

Тромбообразование вызывали на 21 день аппликацией 50% раствора хлорида железа (III), для чего участок выделенной сонной артерии изолировали от окружающих тканей, на него помещали ватный диск, смоченный 50% раствором хлорида железа (0,025 мл). Регистрацию кровотока осуществляли выше места аппликации с помощью датчика допплерографа (Минимакс – Допплер-К, Санкт-Петербург). Отмечалось время образования тромба от момента аппликации раствора хлорида железа (III) до полного прекращения кровотока в сонной артерии [Kurz, K.D. Rat model of arterial thrombosis induced by ferric chlo-ride/ K.D.Kurz, B.W.Main, G.E.Sandusky // Thromb. Res. – 1990. - V.15. - P. 269 - 280].

Результаты подвергаются статистической обработке путем расчета среднего арифметического (M) и стандартной ошибки среднего (±m). Оценка статистической значимости различий при межгрупповых сравнениях производится по двустороннему t-критерию Стьюдента для независимых групп. Различия считаются статистически значимыми при значениях p<0,05.

ПРИМЕР КОНКРЕТНОГО ВЫПОЛНЕНИЯ.

Моделирование ADMA-подобной преэклампсии приводило к статистически значимому (p<0,05) укорочению времени до прекращения кровотока в сонной артерии после наложения FeCl3 c 1189±18 сек до 841±42 сек (таблица 1). В группе животных с экспериментальной преэклампсией при введении резвератрола время свертывания увеличивалось до 1135±33сек, что статистически отличимо от группы L-NAME («нелеченных» животных).

Влияние резвератрола на время образования тромба в сонной артерии при ADMA-подобной преэклампсии приведено в таблице 1.

Таблица 1

Примечание: *- p<0,05 - в сравнении с L-NAME;^y - р<0,05 – в сравнении с интактными.

Таким образом, выявлена выраженная коррекция тромбообразования пероральным введением резвератрола в дозировке 2 мг/кг/сут с 14 по 20 сутки беременности проявляющяяся в увеличении времени тромбообразования по сравнению с группой контроля.