BIPHENYL COMPOUND SERVING AS EZH2 INHIBITOR
本发明涉及新的一类作为EZH2抑制剂的化合物，具体涉及式(Ⅲ)所示化合物或其药学上可接受的盐。 发明背景 在真核细胞中，DNA与组蛋白包装形成染色质。约150碱基对的DNA在组蛋白的八聚体(组蛋白2A、2B、3和4各两个)上缠绕两圈形成染色质的基本单位----核小体。染色质有序结构的变化能引起关联基因转录中的改变。该过程高度受控，因为基因表达模式的改变深度影响基础细胞过程，诸如分化、增殖和凋亡。通过共价修饰组蛋白，最显著是其N端尾部来介导对染色质结构(并因而对转录)变化的控制。这些修饰通常称为表观遗传学修饰，因为它们能造成基因表达中的可遗传改变，但不影响所述DNA本身的序列。氨基酸侧链的共价修饰(例如，甲基化、乙酰化、磷酸化和泛素化)是酶促介导的。 向组蛋白上的特定氨基酸位点选择性添加甲基基团受到被称为组蛋白甲基转移酶(HMT)的独特酶家族作用的控制。具体基因的表达水平受相关的组蛋白位点处一个或多个甲基基团的存在与否影响。具体组蛋白位点处甲基基团的特定作用持续直至所述甲基基团被组蛋白去甲基化酶移除，或持续直至所述修饰的组蛋白通过核小体转换被替代。 生化和基因研究提供证据显示果蝇(Drosophila)PcG蛋白在至少两个不同蛋白复合物中起作用，所述蛋白复合物为多梳抑制复合物1(PRC1)和ESC-E(Z)复合物(也称作多梳抑制复合物2(PRC2))，尽管所述复合物的组成可为动态。Otte等.(2003)CurrOpinGenetDev13:448-54.果蝇(Drosophila)中的研究和哺乳动物细胞中的研究证明，ESC-E(Z)/EED-EZH2(即PRC2)复合物具有固有的组蛋白甲基转移酶活性。尽管由不同组分离的复合物组成略有不同，其一般包括EED、EZH2、SUZ12和RbAp48或其果蝇(Drosophila)同源物。然而，仅包括EED、EZH2和SUZ12的重建复合物保留对组蛋白H3第27位赖氨酸的组蛋白甲基转移酶活性。 EZH2(enhancer of zeste homolog 2；人类EZH2基因：Cardoso等，European J of Human Genetics，8卷，174-180，2000)是多梳抑制复合物2(PRC2)的催化结构，其功能是通过对组蛋白H3的赖氨酸27三甲基化(H3K27me3)来沉默靶基因功能。 组蛋白H3是五个主要参与真核细胞染色质的主要组蛋白之一。组蛋白H3有一个主要的球状结构域和一个长的N-端尾部，组蛋白是参与核小体的结构，如同项链上的珍珠。组蛋白翻译后高度修饰而组蛋白H3是最广泛的五个组蛋白的修饰。组蛋白H3是表观遗传学的新兴领域的一个重要蛋白，其序列变异和多重修饰状态被认为在动态及长期的调控基因作用。 在人癌症中，越来越多的证据提示表观遗传酶活性失调导致癌症相关的细胞增殖失控及其它癌症相关表型，例如增强的细胞迁移和入侵。除了癌症外，有越来越多的证据显示表观遗传酶在众多其它人疾病中的作用，包括代谢疾病(例如糖尿病)、炎性疾病(例如克罗恩氏病)、神经退行性疾病(例如阿尔茨海默病)和心血管疾病。因此，选择性调节表观遗传酶的异常作用就一定范围疾病的治疗而言具有广泛前景。 近期，报道EZH2的体细胞突变与滤泡性淋巴瘤(FL)和弥散性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的生发中心
B细胞样(GCB)亚型相关。Morin等.(2010)NatGenet 42:181-5。在所有情况中，发现突变EZH2基因的出现是杂合的，并且通过转录组测序在所述突变样品中检测到野生型和突变等位基因的表达。目前，关于治疗大多数DLBCL的治疗标准是R-CHOP方法。然而，该方法的结果远不能令人满意。因此，医疗上急需鉴定新型且有效的治疗方法，其任选地视对象的遗传概况而定。 EZH2抑制剂有治疗癌症作用，已经PCT申请过的专利如：PCT/US2011/035336，PTC/US2011/035340，PCT/US2011/035344和美国专利US8410088。它是理想的肿瘤识别特征或亚群(如基因型)。 WO2000001666A1报道了化合物 发明内容 式(Ⅲ)所示化合物、其药学上可接受的盐及其互变异构体， 其中， R31选自H、卤素、CN、OH、氨基，或选自任选被1、2或3个R取代的：5～6元芳基、5～12元杂芳基、C1-6烷基、C1-6杂烷基、C3-9环烷基和3～9元杂环烷基； D3选自-[C(R)2]1-3-、-O、-S-、-N(R)-、-C(＝O)-、-C(＝O)O-、-S(＝O)-、-S(＝O)2-、-C(＝O)N(R)-、-N(R)C(＝O)N(R)-；T分别独立地选自N或CH； R选自H、OH、CN、NH2、COOH、卤素，或选自任选被1、2或3个R’取代的：5～6元芳基、5～12元杂芳基、C1-6烷基、C1-6杂烷基、C3-9环烷基和3～9元杂环烷基； R’选自F、Cl、Br、I、OH、CN、NH2、COOH、Me、Et、CH2F、CHF2、CF3、NH(CH3)、N(CH3)2；“杂”表示杂原子或杂原子团，选自-C(＝O)N(R)-、-N(R)-、-C(＝NR)-、-S(＝O)2N(R)-、-S(＝O)N(R)-、-O-、-S-、＝O、＝S、-O-N＝、-C(＝O)O-、-C(＝O)-、-C(＝S)-、-S(＝O)-、-S(＝O)2-和-N(R)C(＝O)N(R)-； 以上任何一种情况下，杂原子或杂原子团的数目分别独立地选自1、2或3。 本发明的一些方案中，上述R选自H、OH、CN、NH2、COOH、卤素，或选自任选被1、2或3个R’取代的：5～6元芳基、5～6元杂芳基、C1-3烷基、C1-3烷基-NH-、N,N-二(C1-3烷基)氨基、C1-3烷基-O-、C1-3烷基-S-、C3-6环烷基和3～6元杂环烷基。 本发明的一些方案中，上述R选自H、OH、CN、NH2、COOH、卤素，或选自任选被1、2或3个R’取代的：Me、Et、异丙基、环丙基、NH(CH3)、N(CH3)2、苯基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基、吡唑基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、恶唑基、异恶唑基、噻
唑基、异噻唑基、吡咯烷基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基、氮杂环丁烷基。 本发明的一些方案中，上述R选自：H、OH、CN、NH2、COOH、F、Cl、Br、I、Me、Et、CH2F、CHF2、CF3、NH(CH3)、N(CH3)2、环丙基、 本发明的一些方案中，上述R31选自H、F、Cl、Br、I、CN、OH、氨基，或选自任选被1、2或3个R取代的：5～6元芳基、5～6元杂芳基、C1-3烷基、C1-3烷基-NH-、N,N-二(C1-3烷基)氨基、C1-3烷基-O-、C1-3烷基-S-、C3-6环烷基和3～6元杂环烷基。 本发明的一些方案中，上述R31选自H、F、Cl、Br、I、CN、OH、氨基，或选自任选被1、2或3个R取代的：Me、Et、异丙基、NH(CH3)、N(CH3)2、苯基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基、吡唑基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、恶唑基、异恶唑基、噻唑基、异噻唑基、吡咯烷基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基、氮杂环丁烷基、环丙基。 本发明的一些方案中，上述R31选自H、F、Cl、Br、I、CN、OH、氨基，或选自任选被1、2或3个R取代的：Me、Et、异丙基、NH(CH3)、N(CH3)2、 本发明的一些方案中，上述R31选自：H、F、Cl、Br、I、CN、OH、氨基、Me、Et、异丙基、NH(CH3)、 本发明的一些方案中，上述D3选自：-CH2-、-CH(OH)-、-O、-S-、-NH-、-C(＝O)-、-C(＝O)O-、-S(＝O)-、-S(＝O)2-、-C(＝O)NH-、-NHC(＝O)NH-。 本发明的一些方案中，上述化合物、其药学上可接受的盐及其互变异构体，其选自： 其中， R31和D3如上述所定义。
本发明的一些方案中，上述R选自H、OH、CN、NH2、COOH、卤素，或选自任选被1、2或3个R’取代的：5～6元芳基、5～6元杂芳基、C1-3烷基、C1-3烷基-NH-、N,N-二(C1-3烷基)氨基、C1-3烷基-O-、C1-3烷基-S-、C3-6环烷基和3～6元杂环烷基，其他变量如上述所定义。 本发明的一些方案中，上述R选自H、OH、CN、NH2、COOH、卤素，或选自任选被1、2或3个R’取代的：Me、Et、异丙基、环丙基、NH(CH3)、N(CH3)2、苯基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基、吡唑基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、恶唑基、异恶唑基、噻唑基、异噻唑基、吡咯烷基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基、氮杂环丁烷基，其他变量如上述所定义。 本发明的一些方案中，上述R选自：H、OH、CN、NH2、COOH、F、Cl、Br、I、Me、Et、CH2F、CHF2、CF3、NH(CH3)、N(CH3)2、环丙基、其他变量如上述所定义。 本发明的一些方案中，上述R31选自H、F、Cl、Br、I、CN、OH、氨基，或选自任选被1、2或3个R取代的：5～6元芳基、5～6元杂芳基、C1-3烷基、C1-3烷基-NH-、N,N-二(C1-3烷基)氨基、C1-3烷基-O-、C1-3烷基-S-、C3-6环烷基和3～6元杂环烷基，其他变量如上述所定义。 本发明的一些方案中，上述R31选自H、F、Cl、Br、I、CN、OH、氨基，或选自任选被1、2或3个R取代的：Me、Et、异丙基、NH(CH3)、N(CH3)2、苯基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基、吡唑基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、恶唑基、异恶唑基、噻唑基、异噻唑基、吡咯烷基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基、氮杂环丁烷基、环丙基，其他变量如上述所定义。 本发明的一些方案中，上述R31选自H、F、Cl、Br、I、CN、OH、氨基，或选自任选被1、2或3个R取代的：Me、Et、异丙基、NH(CH3)、N(CH3)2、其他变量如上述所定义。 本发明的一些方案中，上述R31选自：H、F、Cl、Br、I、CN、OH、氨基、Me、Et、异丙基、NH(CH3)、N(CH3)2、其他变量如上述所定义。 本发明的一些方案中，上述D3选自：-CH2-、-CH(OH)-、-O、-S-、-NH-、-C(＝O)-、-C(＝O)O-、-S(＝O)-、-S(＝O)2-、-C(＝O)NH-、-NHC(＝O)NH-，其他变量如上述所定义。 本发明还有一些方案是由上述变量任意组合而来。 本发明的化合物选自：
本发明的另一个目的在于提供一种药物组合物，其含有治疗有效量的上述化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体。 本发明的另一个目的在于提供上述化合物或其药学上可接受的盐或上述药物组合物在制备治疗EZH2受体相关各种病症的药物中的应用。 定义和说明 除非另有说明，本文所用的下列术语和短语旨在具有下列含义。一个特定的术语或短语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的，而应该按照普通的含义去理解。当本文中出现商品名时，意在指代其对应的商品或其活性成分。 C1-12选自C1、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9、C10、C11和C12；C3-12选自C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9、C10、C11和C12。 C1-12烷基或杂烷基、C3-12环基或杂环烃基、被C3-12环烃基或杂环烃基取代的C1-12烷基或杂烷基包括但不限于： C1-12烷基、C1-12烷氨基、N,N-二(C1-12烷基)氨基、C1-12烷氧基、C1-12烷酰基、C1-12烷氧羰基、C1-12烷基磺酰基、C1-12烷基亚磺酰基、C3-12环烷基、C3-12环烷氨基、C3-12杂环烷氨基、C3-12环烷氧基、C3-12环烷基酰基、C3-12环烷基氧羰基、C3-12环烷基磺酰基、C3-12环烷基亚磺酰基、5～12元芳基或杂芳基、5～12元芳烷基或杂芳烷基； 甲基、乙基、正丙基、异丙基、-CH2C(CH3)(CH3)(OH)、环丙基、环丁基、丙基亚甲基、环丙酰基、苄氧基、三氟甲基、氨甲基、羟甲基、甲氧基、甲酰基、甲氧羰基、甲磺酰基、甲基亚磺酰基、乙氧基、乙酰基、乙磺酰基、乙氧羰基、二甲基氨基、二乙基氨基、二甲基氨基羰基、二乙基氨基羰基； N(CH3)2,NH(CH3),-CH2CF3,-CH2CH2CF3,-CH2CH2F,-CH2CH2S(＝O)2CH3,-CH2CH2CN,-CH2CH(OH)(CH3)2,-CH2CH(F)(CH3)2,-CH2CH2F,-CH2CF3,-CH2CH2CF3,-CH2CH2NH2,-CH2CH2OH,-CH2CH2OCH3,-CH2CH2CH2OCH3,-CH2CH2N(CH3)2,-S(＝O)2CH3,-CH2CH2S(＝O)2CH3,；和 苯基、噻唑基、联苯基、萘基、环戊基、呋喃基、3-吡咯啉基、吡咯烷基、1,3-氧五环基、吡唑基、2-吡唑啉基、吡唑烷基、咪唑基、恶唑基、噻唑基、1,2,3-唑基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、1,3,4-噻二唑基、4H-吡喃基、吡啶基、哌啶基、1,4-二氧六环基、吗啉基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、哌嗪基、1,3,5-三噻烷基、1,3,5-三嗪基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、嘌呤基、喹啉基、异喹啉基、噌啉基或喹喔啉基； 这里所采用的术语“药学上可接受的”，是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言，它们在可靠的医学判断的范围之内，适用于与人类和动物的组织接触使用，而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。
术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的盐，由本发明发现的具有特定取代基的化合物与相对无毒的酸或碱制备。当本发明的化合物中含有相对酸性的功能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的碱与这类化合物的中性形式接触的方式获得碱加成盐。药学上可接受的碱加成盐包括钠、钾、钙、铵、有机氨或镁盐或类似的盐。当本发明的化合物中含有相对碱性的官能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的酸与这类化合物的中性形式接触的方式获得酸加成盐。药学上可接受的酸加成盐的实例包括无机酸盐，所述无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸，碳酸氢根，磷酸、磷酸一氢根、磷酸二氢根、硫酸、硫酸氢根、氢碘酸、亚磷酸等；以及有机酸盐，所述有机酸包括如乙酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、反丁烯二酸、乳酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸和甲磺酸等类似的酸；还包括氨基酸(如精氨酸等)的盐，以及如葡糖醛酸等有机酸的盐(参见Berge et al.,"Pharmaceutical Salts",Journal of Pharmaceutical Science 66:1-19(1977))。本发明的某些特定的化合物含有碱性和酸性的官能团，从而可以被转换成任一碱或酸加成盐。 优选地，以常规方式使盐与碱或酸接触，再分离母体化合物，由此再生化合物的中性形式。化合物的母体形式与其各种盐的形式的不同之处在于某些物理性质，例如在极性溶剂中的溶解度不同。 本文所用的“药学上可接受的盐”属于本发明化合物的衍生物，其中，通过与酸成盐或与碱成盐的方式修饰所述母体化合物。药学上可接受的盐的实例包括但不限于：碱基比如胺的无机酸或有机酸盐、酸根比如羧酸的碱金属或有机盐等等。药学上可接受的盐包括常规的无毒性的盐或母体化合物的季铵盐，例如无毒的无机酸或有机酸所形成的盐。常规的无毒性的盐包括但不限于那些衍生自无机酸和有机酸的盐，所述的无机酸或有机酸选自2-乙酰氧基苯甲酸、2-羟基乙磺酸、乙酸、抗坏血酸、苯磺酸、苯甲酸、碳酸氢根、碳酸、柠檬酸、依地酸、乙烷二磺酸、乙烷磺酸、富马酸、葡庚糖、葡糖酸、谷氨酸、乙醇酸、氢溴酸、盐酸、氢碘酸盐、羟基、羟萘、羟乙磺酸、乳酸、乳糖、十二烷基磺酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲烷磺酸、硝酸、草酸、双羟萘酸、泛酸、苯乙酸、磷酸、多聚半乳糖醛、丙酸、水杨酸、硬脂酸、亚乙酸、琥珀酸、氨基磺酸、对氨基苯磺酸、硫酸、单宁、酒石酸和对甲苯磺酸。 本发明的药学上可接受的盐可由含有酸根或碱基的母体化合物通过常规化学方法合成。一般情况下，这样的盐的制备方法是：在水或有机溶剂或两者的混合物中，经由游离酸或碱形式的这些化合物与化学计量的适当的碱或酸反应来制备。一般地，优选醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈等非水介质。 除了盐的形式，本发明所提供的化合物还存在前药形式。本文所描述的化合物的前药容易地在生理条件下发生化学变化从而转化成本发明的化合物。此外，前体药物可以在体内环境中通过化学或生化方法被转换到本发明的化合物。 本发明的某些化合物可以以非溶剂化形式或者溶剂化形式存在，包括水合物形式。一般而言，溶剂化形式与非溶剂化的形式相当，都包含在本发明的范围之内。 本发明的某些化合物可以具有不对称碳原子(光学中心)或双键。外消旋体、非对映异构体、几何异构体和单个的异构体都包括在本发明的范围之内。 本文中消旋体、ambiscalemic and scalemic或者对映体纯的化合物的图示法来自Maehr,J.Chem.Ed.1985,62:114-120。1985年，62：114-120。除非另有说明，用楔形键和虚线键表示一个立体中心的绝
对构型。当本文所述化合物含有烯属双键或其它几何不对称中心，除非另有规定，它们包括E、Z几何异构体。同样地，所有的互变异构形式均包括在本发明的范围之内。 本发明的化合物可以存在特定的几何或立体异构体形式。本发明设想所有的这类化合物，包括顺式和反式异构体、(-)-和(+)-对对映体、(R)-和(S)-对映体、非对映异构体、(D)-异构体、(L)-异构体，及其外消旋混合物和其他混合物，例如对映异构体或非对映体富集的混合物，所有这些混合物都属于本发明的范围之内。烷基等取代基中可存在另外的不对称碳原子。所有这些异构体以及它们的混合物，均包括在本发明的范围之内。 可以通过的手性合成或手性试剂或者其他常规技术制备光学活性的(R)-和(S)-异构体以及D和L异构体。如果想得到本发明某化合物的一种对映体，可以通过不对称合成或者具有手性助剂的衍生作用来制备，其中将所得非对映体混合物分离，并且辅助基团裂开以提供纯的所需对映异构体。或者，当分子中含有碱性官能团(如氨基)或酸性官能团(如羧基)时，与适当的光学活性的酸或碱形成非对映异构体的盐，然后通过本领域所公知的常规方法进行非对映异构体拆分，然后回收得到纯的对映体。此外，对映异构体和非对映异构体的分离通常是通过使用色谱法完成的，所述色谱法采用手性固定相，并任选地与化学衍生法相结合(例如由胺生成氨基甲酸盐)。 本发明的化合物可以在一个或多个构成该化合物的原子上包含非天然比例的原子同位素。例如，可用放射性同位素标记化合物，比如氚(3H)，碘-125(125I)或C-14(14C)。本发明的化合物的所有同位素组成的变换，无论放射性与否，都包括在本发明的范围之内。 术语“药学上可接受的载体”是指能够递送本发明有效量活性物质、不干扰活性物质的生物活性并且对宿主或者患者无毒副作用的任何制剂或载体介质代表性的载体包括水、油、蔬菜和矿物质、膏基、洗剂基质、软膏基质等。这些基质包括悬浮剂、增粘剂、透皮促进剂等。它们的制剂为化妆品领域或局部药物领域的技术人员所周知。关于载体的其他信息，可以参考Remington:The Science and Practice of Pharmacy,21st Ed.,Lippincott,Williams&Wilkins(2005)，该文献的内容通过引用的方式并入本文。 术语“赋形剂”通常是指配制有效的药物组合物所需要载体、稀释剂和/或介质。 针对药物或药理学活性剂而言，术语“有效量”或“治疗有效量”是指无毒的但能达到预期效果的药物或药剂的足够用量。对于本发明中的口服剂型，组合物中一种活性物质的“有效量”是指与该组合物中另一种活性物质联用时为了达到预期效果所需要的用量。有效量的确定因人而异，取决于受体的年龄和一般情况，也取决于具体的活性物质，个案中合适的有效量可以由本领域技术人员根据常规试验确定。 术语“活性成分”、“治疗剂”，“活性物质”或“活性剂”是指一种化学实体，它可以有效地治疗目标紊乱、疾病或病症。 术语“被取代的”是指特定原子上的任意一个或多个氢原子被取代基取代，包括重氢和氢的变体，只要特定原子的价态是正常的并且取代后的化合物是稳定的。当取代基为酮基(即＝O)时，意味着两个氢原子被取代。酮取代不会发生在芳香基上。术语“任选被取代的”是指可以被取代，也可以不被取代，除非另有规定，取代基的种类和数目在化学上可以实现的基础上可以是任意的。 当任何变量(例如R)在化合物的组成或结构中出现一次以上时，其在每一种情况下的定义都是独立的。因此，例如，如果一个基团被0-2个R所取代，则所述基团可以任选地至多被两个R所取代，
并且每种情况下的R都有独立的选项。此外，取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。 当一个连接基团的数量为0时，比如-(CRR)0-，表示该连接基团为单键。 当其中一个变量选自单键时，表示其连接的两个基团直接相连，比如A-L-Z中L代表单键时表示该结构实际上是A-Z。 当一个取代基为空缺时，表示该取代基是不存在的，比如A-X中X为空缺时表示该结构实际上是A。当一个取代基的键可以交叉连接到一个环上的两个原子时，这种取代基可以与这个环上的任意原子相键合。当所列举的取代基中没有指明其通过哪一个原子连接到化学结构通式中包括但未具体提及的化合物时，这种取代基可以通过其任何原子相键合。取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。例如，结构单元表示其可在环己基或者环己二烯上的任意一个位置发生取代。 除非另有规定，术语“卤代素”或“卤素”本身或作为另一取代基的一部分表示氟、氯、溴或碘原子。此外，术语“卤代烷基”意在包括单卤代烷基和多卤代烷基。例如，术语“卤代(C1-C4)烷基”意在包括但不仅限于三氟甲基、2，2，2-三氟乙基、4-氯丁基和3-溴丙基等等。 卤代烷基的实例包括但不仅限于：三氟甲基、三氯甲基、五氟乙基，和五氯乙基。“烷氧基”代表通过氧桥连接的具有特定数目碳原子的上述烷基。C1-6烷氧基包括C1、C2、C3、C4、C5和C6的烷氧基。烷氧基的例子包括但不限于：甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基和S-戊氧基。“环烷基”包括饱和环基，如环丙基、环丁基或环戊基。3-7环烷基包括C3、C4、C5、C6和C7环烷基。“链烯基”包括直链或支链构型的烃链，其中该链上任何的稳定位点上存在一个或多个碳-碳双键，例如乙烯基和丙烯基。 术语“卤”或“卤素”是指氟、氯、溴和碘。 除非另有规定，术语“杂”表示杂原子或杂原子团(即含有杂原子的原子团)，包括碳(C)和氢(H)以外的原子以及含有这些杂原子的原子团，例如包括氧(O)、氮(N)、硫(S)、硅(Si)、锗(Ge)、铝(Al)、硼(B)、-O-、-S-、＝O、＝S、-C(＝O)O-、-C(＝O)-、-C(＝S)-、-S(＝O)、-S(＝O)2-，以及任选被取代的-C(＝O)N(H)-、-N(H)-、-C(＝NH)-、-S(＝O)2N(H)-或-S(＝O)N(H)-。 除非另有规定，“环”表示被取代或未被取代的环烷基、杂环烷基、环烯基、杂环烯基、环炔基、杂环炔基、芳基或杂芳基。所谓的环包括单环、联环、螺环、并环或桥环。环上原子的数目通常被定义为环的元数，例如，“5～7元环”是指环绕排列5～7个原子。除非另有规定，该环任选地包含1～3个杂原子。因此，“5～7元环”包括例如苯基、吡啶和哌啶基；另一方面，术语“5～7元杂环烷基环”包括吡啶基和哌啶基，但不包括苯基。术语“环”还包括含有至少一个环的环系，其中的每一个“环”均独立地符合上述定义。 除非另有规定，术语“杂环”或“杂环基”意指稳定的含杂原子或杂原子团的单环、双环或三环，它们可以是饱和的、部分不饱和的或不饱和的(芳族的)，它们包含碳原子和1、2、3或4个独立地选自N、O和S的环杂原子，其中上述任意杂环可以稠合到一个苯环上形成双环。氮和硫杂原子可任选被氧化(即NO和S(O)p，p是1或2)。氮原子可以是被取代的或未取代的(即N或NR，其中R是H或本文已
经定义过的其他取代基)。该杂环可以附着到任何杂原子或碳原子的侧基上从而形成稳定的结构。如果产生的化合物是稳定的，本文所述的杂环可以发生碳位或氮位上的取代。杂环中的氮原子任选地被季铵化。一个优选方案是，当杂环中S及O原子的总数超过1时，这些杂原子彼此不相邻。另一个优选方案是，杂环中S及O原子的总数不超过1。如本文所用，术语“芳族杂环基团”或“杂芳基”意指稳定的5、6、7元单环或双环或7、8、9或10元双环杂环基的芳香环，它包含碳原子和1、2、3或4个独立地选自N、O和S的环杂原子。氮原子可以是被取代的或未取代的(即N或NR，其中R是H或本文已经定义过的其他取代基)。氮和硫杂原子可任选被氧化(即NO和S(O)p，p是1或2)。值得注意的是，芳香杂环上S和O原子的总数不超过1。桥环也包含在杂环的定义中。当一个或多个原子(即C、O、N或S)连接两个不相邻的碳原子或氮原子时形成桥环。优选的桥环包括但不限于：一个碳原子、两个碳原子、一个氮原子、两个氮原子和一个碳-氮基。值得注意的是，一个桥总是将单环转换成三环。桥环中，环上的取代基也可以出现在桥上。 杂环化合物的实例包括但不限于：吖啶基、吖辛因基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并巯基呋喃基、苯并巯基苯基、苯并恶唑基、苯并恶唑啉基、苯并噻唑基、苯并三唑基、苯并四唑基、苯并异恶唑基、苯并异噻唑基、苯并咪唑啉基、咔唑基、4aH-咔唑基、咔啉基、苯并二氢吡喃基、色烯、噌啉基十氢喹啉基、2H,6H-1,5,2-二噻嗪基、二氢呋喃并[2,3-b]四氢呋喃基、呋喃基、呋咱基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、1H-吲唑基、吲哚烯基、二氢吲哚基、中氮茚基、吲哚基、3H-吲哚基、异苯并呋喃基、异吲哚基、异二氢吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、异恶唑基、亚甲二氧基苯基、吗啉基、萘啶基，八氢异喹啉基、恶二唑基、1,2,3-恶二唑基、1,2,4-恶二唑基、1,2,5-恶二唑基、1,3,4-恶二唑基、恶唑烷基、恶唑基、羟吲哚基、嘧啶基、菲啶基、菲咯啉基、吩嗪、吩噻嗪、苯并黄嘌呤基、酚恶嗪基、酞嗪基、哌嗪基、哌啶基、哌啶酮基、4-哌啶酮基、胡椒基、蝶啶基、嘌呤基、吡喃基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡唑基、哒嗪基、吡啶并恶唑、吡啶并咪唑、吡啶并噻唑、吡啶基、吡咯烷基、吡咯啉基、2H-吡咯基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、4H-喹嗪基、喹喔啉基、奎宁环基、四氢呋喃基、四氢异喹啉基、四氢喹啉基、四唑基，6H-1,2,5-噻二嗪基、1,2,3-噻二唑基、1,2,4-噻二唑基、1,2,5-噻二唑基、1,3,4-噻二唑基、噻蒽基、噻唑基、异噻唑基噻吩基、噻吩并恶唑基、噻吩并噻唑基、噻吩并咪唑基、噻吩基、三嗪基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、1,2,5-三唑基、1,3,4-三唑基和呫吨基。还包括稠环和螺环化合物。 除非另有规定，术语“烃基”或者其下位概念(比如烷基、烯基、炔基、苯基等等)本身或者作为另一取代基的一部分表示直链的、支链的或环状的烃原子团或其组合，可以是完全饱和的、单元或多元不饱和的，可以是单取代、二取代或多取代的，可以是一价(如甲基)、二价(如亚甲基)或者多价(如次甲基)，可以包括二价或多价原子团，具有指定数量的碳原子(如C1-C10表示1至10个碳)。“烃基”包括但不限于脂肪烃基和芳香烃基，所述脂肪烃基包括链状和环状，具体包括但不限于烷基、烯基、炔基，所述芳香烃基包括但不限于6-12元的芳香烃基，例如苯、萘等。在一些实施例中，术语“烃基”表示直链的或支链的原子团或它们的组合，可以是完全饱和的、单元或多元不饱和的，可以包括二价和多价原子团。饱和烃原子团的实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基、异丁基、环己基、(环己基)甲基、环丙基甲基，以及正戊基、正己基、正庚基、正辛基等原子团的同系物或异构体。不饱和烷基具有一个或多个双键或三键，其实例包括但不限于乙烯基、2-丙
烯基、丁烯基、巴豆基、2-异戊烯基、2-(丁二烯基)、2，4-戊二烯基、3-(1，4-戊二烯基)、乙炔基、1-和3-丙炔基，3-丁炔基，以及更高级的同系物和异构体。 除非另有规定，术语“杂烃基”或者其下位概念(比如杂烷基、杂烯基、杂炔基、杂芳基等等)本身或者与另一术语联合表示稳定的直链的、支链的或环状的烃原子团或其组合，有一定数目的碳原子和至少一个杂原子组成。在一些实施例中，术语“杂烷基”本身或者与另一术语联合表示稳定的直链的、支链的烃原子团或其组合物，有一定数目的碳原子和至少一个杂原子组成。在一个典型实施例中，杂原子选自B、O、N和S，其中氮和硫原子任选地被氧化，氮杂原子任选地被季铵化。杂原子或杂原子团可以位于杂烃基的任何内部位置(包括该烃基附着于分子其余部分的位置)。实例包括但不限于-CH2-CH2-O-CH3、-CH2-CH2-NH-CH3、-CH2-CH2-N(CH3)-CH3、-CH2-S-CH2-CH3、-CH2-CH2、-S(O)-CH3、-CH2-CH2-S(O)2-CH3、-CH＝CH-O-CH3、-CH2-CH＝N-OCH3和–CH＝CH-N(CH3)-CH3。至多两个杂原子可以是连续的，例如-CH2-NH-OCH3。 术语“烷氧基”、“烷氨基”和“烷硫基”(或硫代烷氧基)属于惯用表达，是指分别通过一个氧原子、氨基或硫原子连接到分子的其余部分的那些烷基基团。 除非另有规定，术语“环烃基”、“杂环烃基”或者其下位概念(比如芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基、环烯基、杂环烯基、环炔基、杂环炔基等等)本身或与其他术语联合分别表示环化的“烃基”、“杂烃基”。此外，就杂烃基或杂环烃基(比如杂烷基、杂环烷基)而言，杂原子可以占据该杂环附着于分子其余部分的位置。环烃基的实例包括但不限于环戊基、环己基、1-环己烯基、3-环己烯基、环庚基等。杂环基的非限制性实例包括1-(1,2,5,6-四氢吡啶基)、1-哌啶基、2-哌啶基，3-哌啶基、4-吗啉基、3-吗啉基、四氢呋喃-2-基、四氢呋喃吲哚-3-基、四氢噻吩-2-基、四氢噻吩-3-基，1-哌嗪基和2-哌嗪基。 除非另有规定，术语“芳基”表示多不饱和的芳族烃取代基，可以是单取代、二取代或多取代的，可以是一价、二价或者多价，它可以是单环或多环(比如1至3个环；其中至少一个环是芳族的)，它们稠合在一起或共价连接。术语“杂芳基”是指含有一至四个杂原子的芳基(或环)。在一个示范性实例中，杂原子选自B、N、O和S，其中氮和硫原子任选地被氧化，氮原子任选地被季铵化。杂芳基可通过杂原子连接到分子的其余部分。芳基或杂芳基的非限制性实施例包括苯基、1-萘基、2-萘基、4-联苯基、1-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基、3-吡唑基、2-咪唑基、4-咪唑基、吡嗪基、2-恶唑基、4-恶唑基、2-苯基-4-恶唑基、5-恶唑基、3-异恶唑基、4-异恶唑基、5-异恶唑基、2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基、2-呋喃基、3-呋喃基、2-噻吩基、3-噻吩基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-苯并噻唑基、嘌呤基、2-苯并咪唑基、5-吲哚基、1-异喹啉基、5-异喹啉基、2-喹喔啉基、5-喹喔啉基、3-喹啉基和6-喹啉基。上述任意一个芳基和杂芳基环系的取代基选自下文所述的可接受的取代基。 除非另有规定，芳基在与其他术语联合使用时(例如芳氧基、芳硫基、芳烷基)包括如上定义的芳基和杂芳基环。因此，术语“芳烷基”意在包括芳基附着于烷基的那些原子团(例如苄基、苯乙基、吡啶基甲基等)，包括其中碳原子(如亚甲基)已经被例如氧原子代替的那些烷基，例如苯氧基甲基、2-吡啶氧甲基3-(1-萘氧基)丙基等。 术语“离去基团”是指可以被另一种官能团或原子通过取代反应(例如亲和取代反应)所取代的官能团或原子。例如，代表性的离去基团包括三氟甲磺酸酯；氯、溴、碘；磺酸酯基，如甲磺酸酯、甲苯磺
酸酯、对溴苯磺酸酯、对甲苯磺酸酯等；酰氧基，如乙酰氧基、三氟乙酰氧基等等。 术语“保护基”包括但不限于“氨基保护基”、“羟基保护基”或“巯基保护基”。术语“氨基保护基”是指适合用于阻止氨基氮位上副反应的保护基团。代表性的氨基保护基包括但不限于：甲酰基；酰基，例如链烷酰基(如乙酰基、三氯乙酰基或三氟乙酰基)；烷氧基羰基，如叔丁氧基羰基(Boc)；芳基甲氧羰基，如苄氧羰基(Cbz)和9-芴甲氧羰基(Fmoc)；芳基甲基，如苄基(Bn)、三苯甲基(Tr)、1,1-二-(4'-甲氧基苯基)甲基；甲硅烷基，如三甲基甲硅烷基(TMS)和叔丁基二甲基甲硅烷基(TBS)等等。术语“羟基保护基”是指适合用于阻止羟基副反应的保护基。代表性羟基保护基包括但不限于：烷基，如甲基、乙基和叔丁基；酰基，例如链烷酰基(如乙酰基)；芳基甲基，如苄基(Bn)，对甲氧基苄基(PMB)、9-芴基甲基(Fm)和二苯基甲基(二苯甲基，DPM)；甲硅烷基，如三甲基甲硅烷基(TMS)和叔丁基二甲基甲硅烷基(TBS)等等。 本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。 本发明所使用的溶剂可经市售获得。本发明采用下述缩略词：aq代表水；HATU代表O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N'，N'-四甲基脲六氟磷酸盐；EDC代表N-(3-二甲基氨基丙基)-N'-乙基碳二亚胺盐酸盐；m-CPBA代表3-氯过氧苯甲酸；eq代表当量、等量；CDI代表羰基二咪唑；DCM代表二氯甲烷；PE代表石油醚；DIAD代表偶氮二羧酸二异丙酯；DMF代表N，N-二甲基甲酰胺；DMSO代表二甲亚砜；EtOAc代表乙酸乙酯；EtOH代表乙醇；MeOH代表甲醇；CBz代表苄氧羰基，是一种胺保护基团；BOC代表叔丁基羰基是一种胺保护基团；HOAc代表乙酸；NaCNBH3代表氰基硼氢化钠；r.t.代表室温；O/N代表过夜；THF代表四氢呋喃；Boc2O代表二-叔丁基二碳酸酯；TFA代表三氟乙酸；DIPEA代表二异丙基乙基胺；SOCl2代表氯化亚砜；CS2代表二硫化碳；TsOH代表对甲苯磺酸；NFSI代表N-氟-N-(苯磺酰基)苯磺酰胺；NCS代表1-氯吡咯烷-2,5-二酮；n-Bu4NF代表氟化四丁基铵；iPrOH代表2-丙醇；mp代表熔点；LDA代表二异丙基胺基锂。 化合物经手工或者软件命名，市售化合物采用供应商目录名称。 实施例1 4'-(1,2-二羟基乙基)-N-((4,6-二甲基-2-氧-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-5-(乙基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨)-4-甲基-[1,1'-二苯基]-3-甲酰胺
步骤1：将化合物溴甲基(三苯基)磷(21.24g,59.46mmol)加入到THF(100.00mL)中，0℃下加入NaH(60％,1.30g,54.05mmol)并搅拌30分钟，然后加入对溴苯甲醛1-1(10.00g,54.05mmol)，0℃下继续搅拌12小时。反应完毕将该反应液浓缩，EtOAc(80mL*3)萃取，浓缩，残余物用硅胶柱纯化得到化合物1-2(7.8g,收率79％)为无色油状液体。MS ESI计算值C8H7Br[M+H]+183,实测值183. 步骤2：将化合物1-2(100.00mg,546.30umol)，甲基3-[乙基(四氢吡喃-4-基)氨]-2-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)苯甲酸酯(146.89mg,364.20umol)，Cs2CO3(355.99mg,1.09mmol)和Pd(dppf)Cl2(26.65mg,36.42umol加入到THF(10.00mL)/H2O(2.00mL)的混合溶剂中，氮气保护下在80℃搅拌12小时。反应完毕，将该反应液浓缩，EtOAc(80mL*3)萃取，浓缩，用硅胶柱纯化得到化合物1-3(110mg,收率79％)为无色油状液体。MS ESI计算值C24H29NO3[M+H]+380,实测值380. 步骤3：将化合物1-3(110.00mg,289.86umol)加入到H2O(5.00mL)/MeOH(5.00mL)/THF(5.00mL)的混合溶剂中，0℃加入OsO4(14.74mg,57.97umol)和NMO(67.91mg,579.72umol)，室温下搅拌12小时。将该反应液浓缩，残余物用制备板分离纯化得化合物1-4(100mg,收率83％)为无色油状液体。MS ESI计算值C24H31NO5[M+H]+414,实测值414. 步骤4：将化合物1-4(100.00mg,241.83umol)加入到EtOH(10.00mL)/H2O(3.00mL)的混合溶剂中，然后加入NaOH(29.02mg,725.50umol)，该反应物在60℃搅拌12小时。反应完毕，用HCl(2M)将该反应液调整pH至6-7，浓缩过滤得化合物1-5(60.00mg,粗品)为棕色油状液体。MS ESI计算值C23H29NO5[M+H]+400,实测值400. 步骤5：将化合物1-5(50.00mg,125.16umol)加入到DMSO(3.00mL)中，然后加入HOBt(25.37mg,187.74umol)，EDCI(35.99mg,187.74umol)和Et3N(38.00mg,375.49umol)，室温下搅拌2小时，再加入化合物1-6，50℃下搅拌22小时。将该混合物倒入水中，过滤，滤饼水洗，制备板纯化得目标化合物1。1H NMR(400MHz,METHANOL-d4)δ8.33(br s,1H)7.58(d,J＝8.28Hz,2H)7.43-7.50(m,3H)7.33(d,J＝1.25Hz,1H)6.13(s,1H)4.69-4.78(m,1H)4.47-4.55(m,2H)3.94(br d,J＝11.04Hz,2H)3.60-3.70(m,2H)3.35-3.45(m,2H)3.10-3.25(m,3H)2.41(s,3H)2.34(s,3H)2.26(s,3H)1.74-1.86(m,2H)1.57-1.71(m,2H)0.92(t,J＝7.03Hz,3H).MS ESI计算值C31H39N3O5[M+H]+534,实测值534.
实施例2 N-((4,6-二甲基-2-氧-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(乙基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨)-5-(1-羟基-2-吗啉代乙基)-2-甲基苯甲酰胺 步骤1：将化合物2-1(400.00mg,1.05mmol)加入到DCM(15.00mL)中，0℃下加入mCPBA(363.79mg,2.11mmol)，在室温下搅拌12小时。反应完毕，加入饱和NaHCO3(40mL)水溶液，用DCM(50mL*3)萃取，NaHSO3(2M,70mL)水溶液洗涤，用硅胶柱纯化得到化合物2-2(200mg,收率48％)为黄色油状液体。MS ESI计算值C24H29NO4[M+H]+396,实测值396. 步骤2：将化合物2-2(150.00mg,379.28umol)加入到EtOH(15.00mL)，然后加入吗菲林(66.09mg,758.55umol)和Et3N(115.14mg,1.14mmol)。反应结束，将该反应液浓缩，制备板纯化得化合物2-3(100mg,收率54％)为无色油状液体。MS ESI计算值C28H38N2O5[M+H]+483,实测值483. 步骤3：将化合物2-3(100.00mg,207.21umol)加入到二氧六环(10.00mL)/水(2.00mL)的混合溶剂中，加入NaOH(24.87mg,621.63umol)，该反应物在60℃搅拌12小时。反应完毕，用HCl(2M)将该反应液调整pH至6-7，浓缩过滤得化合物2-4粗品(60.00mg)为白色固体。MS ESI计算值C27H36N2O5[M+H]+469,实测值469. 步骤4：将化合物2-4(60.00mg,128.04umol)加入到DMF(3.00mL)中，然后加入TBTU(82.22mg,256.08umol)，DIEA(33.10mg,256.08umol)和3-(氨甲基)-4,6-二甲基-1H-吡啶-2-酮(38.97mg,256.08umol)，室温下搅拌12小时。用制备色谱分离得目标化合物2(20.00mg,收率25％)。1H NMR(400MHz,METHANOL-d4)δ7.91(br s,1H)7.82(d,J＝8.28Hz,1H)7.71-7.77(m,2H)7.68(d,J＝8.28Hz,1H)7.56(d,J＝8.03Hz,1H)6.12(s,1H)4.48(s,1H)4.44-4.58(m,1H)4.40-4.44(m,1H)4.07(m,1H)4.03-4.22(m,1H)3.90-4.04(m,4H)3.83-3.90(m,1H)3.70-3.89(m,4H)3.50-3.91(m,2H)3.30-3.39(m,3H)3.00-3.25(m,2H)2.42(s,3H)2.36(s,3H)2.22(s,3H)1.74-2.01(m,3H)0.96-1.06(m,3H)。
MS ESI计算值C35H46N4O5[M+H]+603,实测值603. 实施例3 N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-4-甲基-4'-(吗啉代)-5-(1-吗啉代丙基)-[1,1'-联苯]-3-甲酰胺 步骤1：向化合物3-1(20.00g，92.16mmol)的MeOH(150.00ml)溶液中加入浓硫酸(3.71g，37.79mmol，2.01ml)，该悬浮液在80℃下搅拌12小时，在减压蒸馏下浓缩，然后加入水和二氯甲烷萃取，经饱和食盐水和无水硫酸钠干燥后浓缩。将粗品经过柱纯化，得到化合物3-2(19.4g，收率91.11％)为白色固体。1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δ10.70(s,1H)，7.96(d,J＝2.51Hz,1H)，7.54(dd,J＝8.78,2.51Hz,1H)，6.89(d,J＝8.78Hz,1H)，3.97(s,3H)。 步骤2：向化合物3-2(11.00g，47.61mmol)和化合物3-3(11.01g，119.03mmol，11.01ml)的混合
物中加入无水AlCl3(19.05g，142.83mmol，7.81ml)，该悬浮液在80℃下搅拌7小时，在0℃下加入水和二氯甲烷萃取，经饱和食盐水和无水硫酸钠干燥后浓缩。将粗品经过柱纯化，得到化合物3-4(6.90g，收率50.47％)为黄色固体。1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δ12.17(s,1H)，8.14(d,J＝2.51Hz,1H)，8.07(d,J＝2.76Hz,1H)，3.98(s,3H)，3.08(d,J＝7.03Hz,2H)，1.20(t,J＝7.15Hz,3H)。 步骤3：将化合物3-4(2.00g，6.97mmol)和化合物3-5(2.32g，7.67mmol)的二氧六环(15ml)/水(3ml)的混合溶液中加入K2CO3(1.93g，13.9mmol)和Pd(dppf)Cl2(509.71mg，697.00μmol)。在氮气保护下105℃搅拌0.5小时。将混合物通过硅藻土过滤，滤液用水稀释并用二氯甲烷萃取，萃取液用盐水和无水硫酸钠干燥后浓缩。将残余物通过硅胶柱纯化，得到化合物3-6(1.92g，收率48.89％)为黑褐色油状物。MS ESI计算值C22H25NO5[M+H]+384,实测值384. 步骤4：向化合物3-6(1.6g，3.97mmol)的DCM(20ml)溶液中加入Et3N(1.77g，17.54mmol，2.43ml)，混合物冷却到0℃并缓慢滴加化合物3-7(2.12g，7.51mmol，1.24ml)。该悬浮液在0℃下搅拌2小时。用水稀释并用二氯甲烷萃取，萃取液用盐水和无水硫酸钠干燥后浓缩。将残余物通过硅胶柱纯化，得到化合物3-8(1.90g，收率47.53％)为黑褐色油状物。MS ESI计算值C23H24F3NO7S[M+H]+516,实测值516. 步骤5：将化合物3-8(2.20g，4.27mmol)和化合物3-9(510.93mg，8.54mmol)的四氢呋喃(20ml)溶液中，在氮气保护下加入K3PO4(1.81g，8.54mmol)和Pd(dppf)Cl2(312.27mg，427.00μmol)。在氮气保护下66℃搅拌4小时。将混合物通过硅藻土过滤，滤液用水稀释并用乙酸乙酯萃取，萃取液用盐水和无水硫酸钠干燥后浓缩。将残余物通过硅胶柱纯化，得到化合物3-10(1.30g，收率35.77％)为黑褐色油状物。MS ESI计算值C23H24NO7[M+H]+382,实测值382. 步骤6：在0℃下向化合物3-10(800.00mg，2.10mmol)的MeOH(8.00ml)溶液中加入硼氢化钠(119.00mg，3.15mmol)。该悬浮液在25℃下搅拌1小时。用水稀释并用二氯甲烷萃取，萃取液用盐水和无水硫酸钠干燥后浓缩。将残余物通过硅胶柱纯化，得到化合物3-11(150.00mg，收率18.65％)为黄色油状物。1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δ8.07(d,J＝1.76Hz,1H)，7.67(d,J＝1.76Hz,1H)，7.54(d,J＝8.28Hz,2H)，7.42(d,J＝8.03Hz,2H)，3.93(s,3H)，3.69-3.74(m,4H)，3.55(s,2H)，2.83-2.95(m,2H)，2.55(s,3H)，2.48(br.s.,4H)，1.22(t,J＝7.28Hz,3H)。MS ESI计算值C23H29NO4[M+H]+384,实测值384. 步骤7：在0℃下向化合物3-11(75.00ml，195.58μmol)的DCM(5.00ml)溶液中缓慢滴加亚硫酰氯(46.54mg，391.16μmol，28.38μL)。该悬浮液在20℃下搅拌12小时。用水稀释并用二氯甲烷萃取，萃取液用盐水和无水硫酸钠干燥后浓缩，得到化合物3-12(70.00mg，粗品)为白色固体。MS ESI计算值C23H28ClNO3[M+H]+402,实测值402. 步骤8：将化合物3-12(70.00mg，174.16μmol)的MeCN(5.00ml)的溶液中加入化合物3-13(22.76mg，261.24μmol，22.99μl)，将混合物在20℃下搅拌2小时，然后加入K2CO3(48.14mg，348.32μmol)，并将该混合物在90℃下再搅拌2小时。用水稀释并用二氯甲烷萃取，萃取液用盐水和无水硫酸钠干燥后浓缩。将残余物通过硅胶柱纯化，得到化合物3-14(20.00mg，收率23.59％)为黄色油状物。MS ESI计算值C28H37NO4[M+H]+452,实测值452.
步骤9：向化合物3-14(20.00mg,44.19μmol)的MeOH/THF/H2O(1.00mL,1.00mL，0.5mL)中加入NaOH(4.42mg,110.48μmol)，该悬浮液在80℃下搅拌1小时，浓缩除去有机相并将混合物用2M稀盐酸调节pH＝5～6，再次浓缩得到化合物3-15(20.00mg，粗品)为白色固体。MS ESI计算值C26H34N2O4[M+H]+439,实测值439. 步骤10：向化合物3-15(20.00mg,45.60μmol)和化合物3-16(10.41mg，68.40μmol)的DMF(5ml)溶液中加入DIEA(17.68mg，136.80μmol，23.89μL)和TBTU(21.96mg，68.40μmol)。将混合物在25℃下搅拌12小时，将粗产物通过制备型HPLC纯化得目标化合物3(15mg，收率56.82％)。1H NMR(400MHz,METHANOL-d4)δ7.75(s,1H)，7.60(d,J＝8.03Hz,2H)，7.44-7.50(m,2H)，7.43(s,1H)，6.14(s,1H)，4.51(s,2H)，3.70-3.76(m,4H)，3.67(br.s.,4H)，3.58(s,2H)，2.60(br.s.,2H)，2.50(br.s.,4H)，2.41(s,4H)，2.38(s,3H)，2.26(s,3H)，1.96-2.10(m,1H)，1.69-1.88(m,1H)，0.74(t,J＝7.40Hz,3H)。MS ESI计算值C34H44N4O4[M+H]+573,实测值573. 对化合物EZH2酶的抑制活性测试(基于微型放射性同位素滤膜结合试验) 材料: EZH2反应缓冲液；50mM Tris-HCl(pH 8.0),0.01％Brij35,1mM EDTA,1mM DTT,1mM PMSF,1％DMSO SET8and PRMT5(non-complex)缓冲液；50mM Tris-HCl(pH 8.5),0.01％Brij35,1mM DTT,1％DMSO NSD3反应缓冲液；50mM Bicine(pH 8.5),0.01％Brij35,1mM DTT,1％DMSO 其它HMTs反应缓冲液；50mM Tris-HCl(pH 8.5),5mM MgCl2,50mM NaCl,0.01％Brij35,1mM DTT,1％DMSO DNMT1反应缓冲液；50mM Tris-HCl(pH 7.5),5mM EDTA,0.01％Brij35,5mM DTT,0.1mM PMSF,5％glycerol,1％DMSO DNMTs反应缓冲液；50mM Tris-HCl(pH 7.5),50mM NaCl,5mM EDTA,5mM DTT,0.1mM PMSF,5％glycerol,1％DMSO 甲基供体:S-腺苷-1-[甲基-3H]甲硫氨酸(SAM) 标准反应条件； 基材：5M组蛋白，或0.05mg/mL HeLa细胞的核小体或从小鸡的核心组蛋白,S-腺苷基-L-[甲基-3H-]甲硫氨酸：1uM 反应过程 1.新鲜配制所示底物的反应缓冲溶液 2.将指定的MT加入到底物溶液中，轻轻混匀 3.将纳升(nanoliter)的化合物DMSO溶液转入到MT反应混合物中(通过用Acoustic Technology(Echo550，LabCyte Inc.Sunnyvale,CA))，在室温下孵育10-15分钟. 4.将3H-SAM加入到反应混合物中以引发反应 5.在30℃.孵育30分钟到1小时 6.将反应混合物转移到滤纸进行检测
7.使用Excel和GraphPad Prism软件IC50分析数据和曲线拟合,得到IC50. 化合物抑制活性结果见表1。 表1化合物抑制活性结果 A<100nM；100nM≤B<1000nM
Disclosed is a novel type of compounds serving as an EZH2 inhibitor; specifically disclosed are a compound as represented by formula (III) and a pharmaceutically acceptable salt thereof. 式(Ⅲ)所示化合物、其药学上可接受的盐及其互变异构体， 其中， R31选自H、卤素、CN、OH、氨基，或选自任选被1、2或3个R取代的：5～6元芳基、5～12元杂芳基、C1-6烷基、C1-6杂烷基、C3-9环烷基和3～9元杂环烷基； D3选自-[C(R)2]1-3-、-O、-S-、-N(R)-、-C(＝O)-、-C(＝O)O-、-S(＝O)-、-S(＝O)2-、-C(＝O)N(R)-、-N(R)C(＝O)N(R)-；T分别独立地选自N或CH； R选自H、OH、CN、NH2、COOH、卤素，或选自任选被1、2或3个R’取代的：5～6元芳基、5～12元杂芳基、C1-6烷基、C1-6杂烷基、C3-9环烷基和3～9元杂环烷基； R’选自F、Cl、Br、I、OH、CN、NH2、COOH、Me、Et、CH2F、CHF2、CF3、NH(CH3)、N(CH3)2；“杂”表示杂原子或杂原子团，选自-C(＝O)N(R)-、-N(R)-、-C(＝NR)-、-S(＝O)2N(R)-、-S(＝O)N(R)-、-O-、-S-、＝O、＝S、-O-N＝、-C(＝O)O-、-C(＝O)-、-C(＝S)-、-S(＝O)-、-S(＝O)2-和-N(R)C(＝O)N(R)-； 以上任何一种情况下，杂原子或杂原子团的数目分别独立地选自1、2或3。 根据权利要求1所述化合物、其药学上可接受的盐及其互变异构体，其中，R选自H、OH、CN、NH2、COOH、卤素，或选自任选被1、2或3个R’取代的：5～6元芳基、5～6元杂芳基、C1-3烷基、C1-3烷基-NH-、N,N-二(C1-3烷基)氨基、C1-3烷基-O-、C1-3烷基-S-、C3-6环烷基和3～6元杂环烷基。 根据权利要求2所述化合物、其药学上可接受的盐及其互变异构体，其中，R选自H、OH、CN、NH2、COOH、卤素，或选自任选被1、2或3个R’取代的：Me、Et、异丙基、环丙基、NH(CH3)、N(CH3)2、苯基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基、吡唑基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、恶唑基、异恶唑基、噻唑基、异噻唑基、吡咯烷基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基、氮杂环丁烷基。 根据权利要求3所述化合物、其药学上可接受的盐及其互变异构体，其中，R选自：H、OH、CN、NH2、COOH、F、Cl、Br、I、Me、Et、CH2F、CHF2、CF3、NH(CH3)、N(CH3)2、环丙基、 根据权利要求1～4任意一项所述化合物、其药学上可接受的盐及其互变异构体，其中，R31选自H、F、Cl、Br、I、CN、OH、氨基，或选自任选被1、2或3个R取代的：5～6元芳基、5～6元杂芳基、C1-3烷基、C1-3烷基-NH-、N,N-二(C1-3烷基)氨基、C1-3烷基-O-、C1-3烷基-S-、C3-6环烷基和3～6元杂环烷基。
根据权利要求5所述化合物、其药学上可接受的盐及其互变异构体，其中，R31选自H、F、Cl、Br、I、CN、OH、氨基，或选自任选被1、2或3个R取代的：Me、Et、异丙基、NH(CH3)、N(CH3)2、苯基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基、吡唑基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、恶唑基、异恶唑基、噻唑基、异噻唑基、吡咯烷基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基、氮杂环丁烷基、环丙基。 根据权利要求6所述化合物、其药学上可接受的盐及其互变异构体，其中，R31选自H、F、Cl、Br、I、CN、OH、氨基，或选自任选被1、2或3个R取代的：Me、Et、异丙基、NH(CH3)、N(CH3)2、 根据权利要求7所述化合物、其药学上可接受的盐及其互变异构体，其中，R31选自：H、F、Cl、Br、I、CN、OH、氨基、Me、Et、异丙基、NH(CH3)、N(CH3)2、 根据权利要求1～4任意一项所述化合物、其药学上可接受的盐及其互变异构体，其中，D3选自：-CH2-、-CH(OH)-、-O、-S-、-NH-、-C(＝O)-、-C(＝O)O-、-S(＝O)-、-S(＝O)2-、-C(＝O)NH-、-NHC(＝O)NH-。 根据权利要求1～9任意一项所述化合物、其药学上可接受的盐及其互变异构体，其选自： 其中， R31和D3如权利要求1～9所定义。 根据权利要求1～4任意一项所述化合物，其选自： 一种药物组合物，其含有治疗有效量的根据权利要求1～11任意一项所述的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体。
根据权利要求1～11任意一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或根据权利要求12所述的药物组合物在制备治疗EZH2受体相关各种病症的药物中的应用。
发明领域
具体实施方式