ANTI-INFLUENZA VIRUS TRICYCLIC DERIVATIVE

相关申请的引用

本申请主张如下优先权：

CN201810785083.8，申请日为2018年07月17日；

CN201811416150.5，申请日为2018年11月26日。

本发明涉及一类抗流感病毒化合物，及其在制备治疗与流感病毒相关疾病的药物中的应用，具体涉及式(Ⅰ)所示化合物、其药学上可接受的盐及其光学异构体。

流行性感冒病毒，即流感病毒(influenza virus,IFV)，是一种能够导致人和动物患流行感冒的分节状单链反义RNA病毒。流感病毒可引起非常高的发病率和死亡率，尤其A型流感病毒还能够导致全球性的大流行，比如1918～1920年的“西班牙流感”(H1N1亚型)、1957～1958年“亚洲流感”(H2N2亚型)、1968～1969年“亚洲流感”(H3N2亚型)、1977～1978年“香港流感”(H1N1亚型)以及2009年3月在墨西哥首先暴发的甲型H1N1流感。流感大爆发导致成千上万人死亡，引起巨大社会恐慌并增加社会不稳定因素。

A型流感病毒为单负链RNA病毒，基因组分为8个片段，编码8个蛋白。流感病毒基因组片段5’末端和3’末端高度保守，该两个末端的序列互补而形成柄环状结构，该结构在启动病毒RNA复制时发挥重要作用。病毒各个基因片段编码的蛋白大小不同，而且在流感病毒的生命周期中发挥着不同的作用，先将几种主要的蛋白的基本功能介绍如下。流感病毒的HA是流感病毒识别宿主受体的配体，与细胞表面病毒特异性受体结合，介导病毒外膜与细胞内小体膜融合释放病毒核衣壳进入胞浆。流感病毒的受体具有特异性，A型流感病毒的受体为唾液酸糖蛋白。流感病毒的NA蛋白在复制过程中可除去病毒颗粒表面的唾液酸，使病毒颗粒不能继续在宿主细胞表面聚集，从而有利于病毒子的释放并进一步感染更多的宿主细胞。

流感病毒的M2蛋白的作用：流感病毒的HA蛋白和唾液酸结合，流感病毒被宿主细胞内吞。吞噬泡中的酸碱性对于病毒脱衣壳起着至关重要的作用，病毒膜上的M2蛋白的离子通道可以使吞噬泡的pH值逐步降低，当pH值降至5.0-6.0时，导致HA2蛋白的发生变构，位于HA2蛋白氨基末端的融合肽移位，进而激活融合过程，导致病毒的双层类脂膜与细胞膜融合，释放出病毒颗粒内部的RNPs到宿主细胞浆。M2蛋白是一个跨膜的离子通道，仅在A型流感病毒中被发现，它有一部分延伸至病毒外膜表面。

流感病毒蛋白的合成也是利用宿主细胞翻译机制，甚至病毒可以暂停宿主蛋白的翻译，加快自身蛋白的合成。宿主细胞mRNA的多聚腺苷酸化是通过特异的腺苷酸化酶完成的，与之不同的是，病毒mRNA的腺苷酸尾是由负链的vRNA上连续的5-7个尿嘧啶转录形成的。病毒各个信使RNA(mRNA)的加帽是以相似的方式完成的：PA和PB2蛋白攫取宿主pre-mRNA转录体的5’加帽引物，并进而启动病毒mRNA 合成，这个过程被称为“cap snatching”。在完成了多聚腺苷酸化过程和加帽过程，病毒的mRNA即出核，进入细胞质，并像宿主细胞的mRNA一样进行翻译，病毒vRNA片段的核输出是由病毒的M1蛋白和NS2蛋白介导的，M1蛋白可以与vRNA和NP蛋白相互作用时，同时也与核输出蛋白NS2作用；由此，核输出蛋白NS2介导M1-RNP以核蛋白形式出核进入宿主细胞的细胞质。

流感会产生由于丧失生产力和相关医疗资源的直接成本以及预防措施的间接成本。在美国，流感累计每年大约造成100亿美元的损失，据估计未来的流感大流行可引起数千亿美元的直接和间接成本。预防成本也非常高，全球各国政府已花费数十亿美元为可能的H5N1禽流感大流行做准备和计划，成本和购买药物和疫苗，以及发展灾难演练和提高边境管制的策略相关。

目前的流感治疗选择包括接种疫苗和用抗病毒药物进行化疗和化学预防。经常向高危群体，例如儿童和老年人，或有哮喘、糖尿病或心脏病的人推荐接种抗流感的流感疫苗，但是，即使接种疫苗也不能完全避免患流感。每个季节重新制备一些特定流感株的疫苗，但不可能涵盖该季节时全球主动感染人的各种病毒株。另外，由于流感病毒会发生一定程度的抗原漂移，如果超过一种病毒感染了单个细胞，则基因组中8个单独的vRNA片段发生混合或重配，所导致的病毒遗传学上的快速变化可产生抗原转变并使得病毒能感染新宿主物种并迅速克服保护性免疫。

抗病毒药物也可以用于治疗流感，其中神经氨酸酶抑制剂，如奥司他韦(达菲)，对于甲型流感病毒效果明显，但是经过临床观察发现，对于该类神经氨酸酶抑制剂已经出现了耐药的病毒株。在抗流感病毒领域，临床上亟需全新作用机制的抗流感病毒药物，能够支持单药使用治疗甲型流感，或者通过和已上市的其他作用机制的抗流感病毒药物联用，用于甲型流感的预防和治疗。

其中WO2016175224报道了如下化合物及其前药：

发明内容

本发明提供了式(II)所示化合物、其药学上可接受的盐及其光学异构体，

其中，

R₁选自O和N(R₄)；

R₂选自H、F、Cl、Br、I、OH和NH₂；

R₃选自H、F、Cl、Br、I、OH和NH₂；

R₄选自H、OH和C_1-3烷氧基，所述C_1-3烷氧基任选被1、2或3个R取代；

R₅选自H和C_1-6烷基，所述C_1-6烷基任选被1、2或3个R_a取代；

R₆选自H和C_1-6烷基，所述C_1-6烷基任选被1、2或3个R_a取代；

或者R₅、R₆连接在一起与其相连的碳原子一起形成C_3-6环烷基；

R分别独立地选自F、Cl、Br、OH和NH₂；

R_a分别独立地选自F、Cl、Br、I、OH、NH₂和CN；

带“*”碳原子为手性碳原子，以(R)或(S)单一对映体形式或富含一种对映体形式存在。

本发明提供了式(II)所示化合物、其药学上可接受的盐及其光学异构体，

其中，

R₁选自O和N(R₄)；

R₂选自H、F、Cl、Br、I、OH和NH₂；

R₃选自H、F、Cl、Br、I、OH和NH₂；

R₄选自H、OH和C_1-3烷氧基，所述C_1-3烷氧基任选被1、2或3个R取代；

R₅选自H；

R₆选自H；

或者R₅、R6连接在一起形成C_3-5环烷基；

R选自F、Cl、Br、OH和NH₂；

带“*”碳原子为手性碳原子，以(R)或(S)单一对映体形式或富含一种对映体形式存在。

本发明提供了式(Ⅰ)所示化合物、其药学上可接受的盐及其光学异构体，

其中，

R₁选自O和N(R₄)；

R₂选自H、F、Cl、Br、I、OH和NH₂；

R₃选自H、F、Cl、Br、I、OH和NH₂；

R₄选自H、OH和C_1-3烷氧基，所述C_1-3烷氧基任选被1、2或3个R取代；

R选自F、Cl、Br、OH和NH₂。

本发明的一些方案中，上述R₄选自H、OH和 所述 任选被1、2或3个R取代，其它变量如本发明所定义。

本发明的一些方案中，上述R₄选自H、OH和 其它变量如本发明所定义。

本发明的一些方案中，上述R₁选自O、N(OH)和N(OCH₃)，其它变量如本发明所定义。

本发明的一些方案中，上述R₅选自H和C_1-3烷基，所述C_1-3烷基任选被1、2或3个R_a取代，其它变量如本发明所定义。

本发明的一些方案中，上述R₅选自H和CH₃，其它变量如本发明所定义。

本发明的一些方案中，上述R₆选自H和C_1-3烷基，所述C_1-3烷基任选被1、2或3个R_a取代，其它变量如本发明所定义。

本发明的一些方案中，上述R₆选自H和CH₃，其它变量如本发明所定义。

本发明的一些方案中，上述结构单元 选自 其它变量如本发明所定义。

本发明的一些方案中，上述其中结构单元 选自

在本发明的一些方案中，上述述化合物、其药学上可接受的盐及其光学异构体，其选自

R₁、R₂、R₃、R₅和R₆如权利要求1～5任意一项所定义；

本发明还有一些方案可由上述变量任意组合而来。

本发明提供了下式化合物、其药学上可接受的盐及其光学异构体，

本发明的一些方案中，上述化合物、其药学上可接受的盐及其光学异构体，其选自

本发明还提供一种药物组合物，包含治疗有效量的上述的化合物、其药学上可接受的盐及其光学异构体以及药学上可接受的载体。

本发明还提供上述化合物、其药学上可接受的盐及其光学异构体或者上述组合物在制备治疗与流感病毒相关疾病的药物中的应用。

技术效果

本发明化合物，在细胞水平抑制流感病毒复制试验中展示出积极效应

定义和说明

除非另有说明，本文所用的下列术语和短语旨在具有下列含义。一个特定的术语或短语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的，而应该按照普通的含义去理解。当本文中出现商品名时，意在指代其对应的商品或其活性成分。

这里所采用的术语“药学上可接受的”，是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言，它们在可靠的医学判断的范围之内，适用于与人类和动物的组织接触使用，而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。

术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的盐，由本发明发现的具有特定取代基的化合物与相对无毒的酸或碱制备。当本发明的化合物中含有相对酸性的功能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的碱与这类化合物的中性形式接触的方式获得碱加成盐。药学上可接受的碱加成盐包括钠、钾、钙、铵、有机胺或镁盐或类似的盐。当本发明的化合物中含有相对碱性的官能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的酸与这类化合物的中性形式接触的方式获得酸加成盐。药学上可接受的酸加成盐的实例包括无机酸盐，所述无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸，碳酸氢根，磷酸、磷酸一氢根、磷酸二氢根、硫酸、硫酸氢根、氢碘酸、亚磷酸等；以及有机酸盐，所述有机酸包括如乙酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、反丁烯二酸、乳酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸和甲磺酸等类似的酸；还包括氨基酸(如精氨酸等)的盐，以及如葡糖醛酸等有机酸的盐。本发明的某些特定的化合物含有碱性和酸性的官能团，从而可以被转换成任一碱或酸加成盐。

本发明的药学上可接受的盐可由含有酸根或碱基的母体化合物通过常规化学方法合成。一般情况下，这样的盐的制备方法是：在水或有机溶剂或两者的混合物中，经由游离酸或碱形式的这些化合物与化学计量的适当的碱或酸反应来制备。

本发明的化合物可以存在特定的几何或立体异构体形式。本发明设想所有的这类化合物，包括、(R)-和(S)-对映体及其混合物和其他混合物，例如、(R)-和(S)-对映体的混合物，所有这些混合物都属于本发明的范围之内。烷基等取代基中可存在另外的不对称碳原子。所有这些异构体以及它们的混合物，均包括在本发明的范围之内。

除非另有说明，术语“光学异构体”是指互为镜像关系的立体异构体。

除非另有说明，用楔形实线键 和楔形虚线键 表示一个立体中心的绝对构型，用直形实线键 和直形虚线键 表示立体中心的相对构型，用波浪线 表示楔形实线键 或楔形虚线键 或用波浪线 表示直形实线键 和直形虚线键

除非另有说明，当化合物中存在双键结构，如碳碳双键、碳氮双键和氮氮双键，且双键上的各个原子均连接有两个不同的取代基时(包含氮原子的双键中，氮原子上的一对孤对电子视为其连接的一个取代基)，如果该化合物中双键上的原子与其取代基之间用波浪线 连接，则表示该化合物的(Z)型异构体、(E)型异构体或两种异构体的混合物。例如下式(A)表示该化合物以式(A-1)或式(A-2)的单一异构体形式存在或以式(A-1)和式(A-2)两种异构体的混合物形式存在；下式(B)表示该化合物以式(B-1)或式(B-2)的单一异构体形式存在或以式(B-1)和式(B-2)两种异构体的混合物形式存在。下式(C)表示该化合物以式(C-1)或式(C-2)的单一异构体形式存在或以式(C-1)和式(C-2)两种异构体的混合物形式存在。

除非另有说明，术语“富含一种异构体”、“异构体富集”、“富含一种对映体”或者“对映体富集”指其中一种异构体或对映体的含量小于100％，并且，该异构体或对映体的含量大于等于60％，或者大于等于70％，或者大于等于80％，或者大于等于90％，或者大于等于95％，或者大于等于96％，或者大于等于97％，或者大于等于98％，或者大于等于99％，或者大于等于99.5％，或者大于等于99.6％，或者大于等于99.7％，或者大于等于99.8％，或者大于等于99.9％。

可以通过的手性合成或手性试剂或者其他常规技术制备光学活性的(R)-和(S)-异构体以及D和L异构体。如果想得到本发明某化合物的一种对映体，可以通过不对称合成或者具有手性助剂的衍生作用来制备，其中将所得非对映体混合物分离，并且辅助基团裂开以提供纯的所需对映异构体。或者，当分子中含有碱性官能团(如氨基)或酸性官能团(如羧基)时，与适当的光学活性的酸或碱形成非对映异构体的盐，然后通过本领域所公知的常规方法进行非对映异构体拆分，然后回收得到纯的对映体。此外，对映异构体和非对映异构体的分离通常是通过使用色谱法完成的，所述色谱法采用手性固定相，并任选地与化学衍生法 相结合(例如由胺生成氨基甲酸盐)。本发明的化合物可以在一个或多个构成该化合物的原子上包含非天然比例的原子同位素。例如，可用放射性同位素标记化合物，比如氚(³H)，碘-125(¹²⁵I)或C-14(¹⁴C)。又例如，可用重氢取代氢形成氘代药物，氘与碳构成的键比普通氢与碳构成的键更坚固，相比于未氘化药物，氘代药物有降低毒副作用、增加药物稳定性、增强疗效、延长药物生物半衰期等优势。本发明的化合物的所有同位素组成的变换，无论放射性与否，都包括在本发明的范围之内。“任选”或“任选地”指的是随后描述的事件或状况可能但不是必需出现的，并且该描述包括其中所述事件或状况发生的情况以及所述事件或状况不发生的情况。

术语“被取代的”是指特定原子上的任意一个或多个氢原子被取代基取代，可以包括重氢和氢的变体，只要特定原子的价态是正常的并且取代后的化合物是稳定的。当取代基为氧(即＝O)时，意味着两个氢原子被取代。氧取代不会发生在芳香基上。术语“任选被取代的”是指可以被取代，也可以不被取代，除非另有规定，取代基的种类和数目在化学上可以实现的基础上可以是任意的。

当任何变量(例如R)在化合物的组成或结构中出现一次以上时，其在每一种情况下的定义都是独立的。因此，例如，如果一个基团被0-2个R所取代，则所述基团可以任选地至多被两个R所取代，并且每种情况下的R都有独立的选项。此外，取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。

除非另有规定，术语“C_1-6烷基”用于表示直链或支链的由1至6个碳原子组成的饱和碳氢基团。所述C_1-6烷基包括C_1-5、C_1-4、C_1-3、C_1-2、C_2-6、C_2-4、C₆和C₅烷基等；其可以是一价(如甲基)、二价(如亚甲基)或者多价(如次甲基)。C_1-6烷基的实例包括但不限于甲基(Me)、乙基(Et)、丙基(包括n-丙基和异丙基)、丁基(包括n-丁基，异丁基，s-丁基和t-丁基)、戊基(包括n-戊基，异戊基和新戊基)、己基等。

除非另有规定，术语“C_1-3烷基”用于表示直链或支链的由1至3个碳原子组成的饱和碳氢基团。所述C_1-3烷基包括C_1-2和C_2-3烷基等；其可以是一价(如甲基)、二价(如亚甲基)或者多价(如次甲基)。C_1-3烷基的实例包括但不限于甲基(Me)、乙基(Et)、丙基(包括n-丙基和异丙基)等。

除非另有规定，术语“C_1-3烷氧基”表示通过一个氧原子连接到分子的其余部分的那些包含1至3个碳原子的烷基基团。所述C_1-3烷氧基包括C_1-2、C_2-3、C₃和C₂烷氧基等。C_1-3烷氧基的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基(包括正丙氧基和异丙氧基)等。

除非另有规定，“C_3-6环烷基”表示由3至6个碳原子组成的饱和环状碳氢基团，其为单环和双环体系，所述C_3-6环烷基包括C_3-5、C_4-5和C_5-6环烷基等；其可以是一价、二价或者多价。C_3-6环烷基的实例包括，但不限于，环丙基、环丁基、环戊基、环己基等。

除非另有规定，“C_3-5环烷基”表示由3至5个碳原子组成的饱和环状碳氢基团，其为单环体系，所述C_3-5环烷基包括C_3-4和C_4-5环烷基等；其可以是一价、二价或者多价。C_3-5环烷基的实例包括，但不限于，环丙基、环丁基、环戊基等。

本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。

本发明所使用的溶剂可经市售获得。本发明采用下述缩略词：CAN代表；TFA代表三氟乙酸；M代表mol/L；aq代表水；HATU代表O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N'，N'-四甲基脲六氟磷酸盐；EDC代表N-(3-二甲基氨基丙基)-N'-乙基碳二亚胺盐酸盐；m-CPBA代表3-氯过氧苯甲酸；eq代表当量、等量；CDI代表羰基二咪唑；DCM代表二氯甲烷；PE代表石油醚；DIAD代表偶氮二羧酸二异丙酯；DMF代表N，N-二甲基甲酰胺；DMSO代表二甲亚砜；EtOAc代表乙酸乙酯；EtOH代表乙醇；MeOH代表甲醇；CBz代表苄氧羰基，是一种胺保护基团；BOC代表叔丁氧羰基是一种胺保护基团；HOAc代表乙酸；NaCNBH₃代表氰基硼氢化钠；r.t.代表室温；O/N代表过夜；THF代表四氢呋喃；Boc₂O代表二-叔丁基二碳酸酯；TFA代表三氟乙酸；DIPEA代表二异丙基乙基胺；SOCl₂代表氯化亚砜；CS₂代表二硫化碳；TsOH代表对甲苯磺酸；NFSI代表N-氟-N-(苯磺酰基)苯磺酰胺；；n-Bu₄NF代表氟化四丁基铵；iPrOH代表2-丙醇；mp代表熔点；LDA代表二异丙基胺基锂。

化合物依据本领域常规命名原则或者使用 软件命名，市售化合物采用供应商目录名称。

硅胶柱纯化如无特殊说明，本发明所述硅胶柱纯化、硅胶柱层析、制备型高效液相、超临界流体色谱柱中所用溶剂的比例均为体积比。

下面通过实施例对本发明进行详细描述，但并不意味着对本发明任何不利限制。本文已经详细地描述了本发明，其中也公开了其具体实施例方式，对本领域的技术人员而言，在不脱离本发明精神和范围的情况下针对本发明具体实施方式进行各种变化和改进将是显而易见的。

参考例1：片段BB-1和BB-2

合成路线：

步骤1：化合物BB-1-2的合成

将BB-1-1(10g,58.10mmol)溶于甲醇(100mL)，加入氯化亚砜(13.82g,116.19mmol)，反应液在80℃下搅拌3小时。将反应液浓缩干得到粗品BB-1-2，直接用于下一步反应。

步骤2：化合物BB-1-3的合成

将化合物BB-1-2(10g，53.72mmol)溶于二氯乙烷(150mL)，加入溴代丁二酰亚胺(10.52g，59.09mmol)和过氧化苯甲酰(390.36mg，1.61mmol)，反应液于80℃下搅拌12小时。将反应液分别用氢氧化钠水溶液(0.1M,200mL)和饱和食盐水(200mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得粗品BB-1-3直接用于下一步反应。

步骤3：化合物BB-1-4的合成

将化合物BB-1-3(14g，36.97mmol)溶于二氯甲烷(100mL)，加入苯硫酚(4.41g，40.03mmol)和DBU(6.19g，40.67mmol)，反应液在25℃搅拌12小时。将反应液中加入水(50mL)，用二氯甲烷(50mL×2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(100mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得粗品经硅胶柱纯化(石油醚:乙酸乙酯＝50:1至20:1)得化合物BB-1-4。

步骤4：化合物BB-1-5的合成

将化合物BB-1-4(6g，20.39mmol)溶于甲醇(50mL)和水(5mL)中，加入氢氧化钠(1.63g，40.77mmol)，反应液在25℃搅拌12小时。将反应液用稀盐酸(2M)调节pH至5，所得溶液用乙酸乙酯(40mL×2)萃取。将有机相合并，用无水硫酸钠干燥，过滤。滤液减压浓缩得粗品BB-1-5，直接用于下一步 反应。

步骤5：化合物BB-1-6的合成

将混合物BB-1-5(1g，3.57mmol)和多聚磷酸(10g，23.78mmol)在120℃下搅拌12小时。将反应液加入冰水(20mL)中搅拌10分钟，用乙酸乙酯(30mL×2)萃取，合并有机相用饱和碳酸氢钠(50mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得粗品用硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝50:1至20:1，体积比)纯化得BB-1-6。

步骤6：化合物BB-1的合成

将化合物BB-1-6(3g，11.44mmol)溶于乙醇(60mL)，在0℃下分批加入硼氢化钠(865.49mg,22.88mmol)，然后将反应液在25℃下搅拌2小时。反应液用稀盐酸(1M)在℃下淬灭，然后用乙酸乙酯(50mL×2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得BB-1。¹H NMR(400MHz,氘代氯仿)δ7.46-7.47(m,1H),7.14-7.20(m,4H),7.00–7.14(m,1H),6.09(s,1H),4.66-4.70(m,1H),4.19-4.22(m,1H),2.79(s,1H).

步骤7：化合物BB-2的合成

将化合物BB-1(0.3g,1.14mmol)溶于DCM(5mL)中，缓慢滴加氯化亚砜(675.22mg,5.68mmol,411.72uL),反应液在室温下搅拌过夜。将反应液减压浓缩得粗品BB-2，直接用于下一步反应。

实施例1

步骤1：化合物1-2的合成

在冰浴下，向化合物1-1(3.35g,13.61mmol)的甲醇(8mL)和四氢呋喃(32mL)溶液中滴加三甲基硅烷重氮甲烷溶液(2M,13.61mL，27.22mmol)，滴加完后将反应液升温至20℃搅拌1小时。向反应液中加入饱和柠檬酸溶液(100mL)，用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，合并有机相，分别用饱和碳酸氢钠溶液(100mL)和饱和食盐水(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，得到化合物1-2粗品，直接用于下一步反应。

步骤2：化合物1-3的合成

将化合物1-2(3.98g,15.29mmol)，肼基甲酸叔丁酯(2.02g,15.29mmol)和对甲苯磺酸吡啶盐(3.84g,15.29mmol)加入N，N-二甲基乙酰胺(80mL)，反应液于60℃反应12小时。将反应液冷却至室温，加入水(200mL)，用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，合并有机相，分别用水(200mL)和饱和食盐水(200mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干。粗品经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝3:1至1:2)纯化得到化合物1-3。

步骤3：化合物1-4的合成

将化合物1-3(2.7g,7.21mmol)，丙烯酸甲酯(1.24g,14.42mmol,1.30mL)，N,N-二异丙基乙基胺(2.80g,21.64mmol,3.77mL)溶于乙腈(35mL)，反应液于50℃反应12小时。将反应液浓缩旋干，粗品经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝4:1至1:2，体积比)纯化得到化合物1-4。

步骤4：化合物1-5的合成

向化合物1-4(1.6g,3.47mmol)的乙酸乙酯(20mL)溶液中加入盐酸乙酸乙酯溶液(4M,10mL)，反应液在25℃搅拌1小时。将反应液旋干得到粗品1-5，直接用于下一步反应。

步骤5：化合物1-6的合成

将化合物1-5(1.18g,3.27mmol)和叔丁醇钾(955.32mg,8.51mmol)加入乙腈(20mL)，反应液于25℃搅拌1小时。加入甲醇(30mL)，浓缩，旋干。粗品经硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝3:1至0:1，体积比,然后二氯甲烷：甲醇＝10:1至0:1)分离纯化，得到化合物1-6。

步骤6：化合物1-7的合成

在25℃下，将化合物1-6(0.485g,1.48mmol)，BB-1(390.42mg,1.48mmol)和1-丙基磷酸酐(1.41g,2.22mmol,1.32mL,50％w/w)溶于乙酸乙酯(5mL)，然后加入甲烷磺酸(283.95mg,2.95mmol,210.33μL)，反应液于70℃搅拌反应1小时。反应液冷却至室温，加水(10mL)稀释，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(10mL×2),无水硫酸钠干燥，过滤，旋干。粗品经硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝3:1至0:1,然后乙酸乙酯：甲醇＝25:1至10:1，体积比)，得到化合物1-7。

步骤7：化合物1的合成

将化合物1-7(0.460g,800.57μmol)，氯化钠溶液(116.96mg,2.00mmol溶于水0.25mL)加入二甲亚砜(7mL)，反应液于110℃搅拌反应2小时。反应液冷却至室温，加水(15mL)稀释，乙酸乙酯(15mL×3)萃取，合并有机相，饱和食盐水(15mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干。粗品经硅胶柱层析分离(石油醚：乙酸乙酯＝3:1至0:1,然后二氯甲烷：甲醇＝10:1至0:1)，得到化合物1-8和粗品化合物1，粗品化合物1经制备高效液相分离(柱:Phenomenex Synergi C18 150×25mm×10μm；流动相:[A-水(0.225％TFA)，B-ACN]；B％:35％-65％,10min)，得到化合物1。MS(ESI)m/z:427.1(M+H⁺)。¹H NMR(400MHz,氘代甲醇)δ7.30-7.47(m,2H),7.15–7.26(m,1H),7.09–7.15(m,2H),6.68-6.92(m,2H),5.83-5.93(m,1H),5.56-5.71(m,1H),5.42–5.51(m,1H),4.02-4.18(m,1H),3.76-3.96(m,1H),3.41-3.60(m,1H),3.01-3.21(m,1H),2.53-2.76(br s,1H).

步骤8：化合物1-8A和1-8B的合成

化合物1-8经超临界流体色谱柱检测(柱子型号：Chiralpak AD-3 50×4.6mm I.D.,3μm；流动相:[A：二氧化碳，B：0.05％二乙胺乙醇溶液，梯度：B％:40％]；流速：3mL/min；柱温：40℃；波长：220nm)分析为外消旋化合物，分离得到1-8A(保留时间0.914min)和1-8B保留时间1.085min).

步骤9：化合物1A的合成

将化合物1-8A(0.1g,193.59μmol)和氯化锂(82.06mg,1.94mmol)的N,N-二甲基乙酰胺溶液(3mL)置于80℃搅拌反应12小时。反应液加水(10mL)稀释，乙酸乙酯(15mL×3)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗(15mL×2),无水硫酸钠干燥，过滤，旋干。粗品经制备型高效液相分离纯化(柱子型号:Phenomenex Synergi C18 150×30mm×4μm；流动相:[A:水(0.225％甲酸)，B：乙腈]；梯度：B％:36％-66％,保留时间：10min)，得到化合物1A.MS(ESI)m/z:427.2(M+H⁺)。¹H NMR(400MHz,d₄-MeOH)δ＝7.40(d,J＝7.4Hz,1H),7.28-7.37(m,1H),7.16-7.25(m,1H),7.08-7.15(m,2H),6.74-6.89(m,2H),5.87(d,J＝7.2Hz,1H),5.64(d,J＝13.6Hz,1H),5.47(s,1H),4.09(d,J＝13.8Hz,1H),3.78-3.94(m,1H),3.44-3.56(m,1H),3.20-3.28(m,1H),2.58-2.74(m,1H).

步骤10：化合物1B的合成

将化合物1-8B(0.1g,193.59μmol)和氯化锂(82.06mg,1.94mmol)的N，N-二甲基乙酰胺溶液(3mL)置于80℃搅拌反应12小时。反应液加水(10mL)稀释，乙酸乙酯(15mL×3)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗(15mL×2),无水硫酸钠干燥，过滤，旋干。粗品经制备型高效液相分离纯化(柱子型号:Phenomenex Synergi C18 150×30mm×4μm；流动相:[A:水(0.225％甲酸)，B：乙腈]；梯度：B％:36％-66％,保留时间：10min)，得到化合物1B。MS(ESI)m/z:427.2(M+H⁺)。¹H NMR(400MHz,d₄-MeOH)δ＝7.40(d,J＝7.4Hz,1H),7.27-7.37(m,1H),7.16–7.26(m,1H),7.08-7.15(m,2H),6.75-6.89(m,2H),5.87(d,J＝7.2Hz,1H),5.63(d,J＝15.6Hz,1H),5.42-5.52(m,1H),4.09(d,J＝13.8Hz,1H),3.83-3.99(m,1H),3.44-3.58(m,1H),3.07-3.25(m,1H),2.55-2.76(m,1H).

实施例2

合成路线：

步骤1：化合物2的合成

将化合物1(20mg,46.90μmol,1eq)，盐酸羟胺(16.30mg,234.50μmol,5eq)和乙酸钠(19.24mg,234.50μmol,5eq)溶于乙醇(2mL)中，反应液于70℃反应5小时。将反应液浓缩，旋干，粗品经制备型高效液相分离纯化(柱:Phenomenex Synergi C18 150×25×10μm；流动相:[A-水(0.1％TFA)，B-乙腈]；B％:27％-57％,10min)得到化合物2.MS(ESI)m/z:441.8(M+H⁺)。¹H NMR(400MHz,氘代甲醇)δ7.66(d,J＝7.2Hz,1H),7.30-7.41(m,1H),7.19-7.30(m,1H),7.12-7.16(m,2H),6.79-6.88(m,1H),6.63-6.75(m,1H),6.35(d,J＝7.2Hz,1H),5.63(dd,J＝2.2,14.4Hz,1H),5.34(s,1H),4.14(d,J＝14.0Hz,1H),3.61-3.70(m,1H),3.46-3.55(m,1H),3.14-3.25(m,1H),2.96-3.07(m,1H)。

实施例3

合成路线：

步骤1：化合物3的合成

将化合物1(20mg,46.90μmol)，甲氧基盐酸羟胺(19.59mg,234.50μmol)和乙酸钠(19.24mg,234.50μmol)溶于乙醇(2mL)中。反应液于70℃反应5小时。将反应液浓缩，旋干，粗品经制备型高效液相分离纯化(柱:Phenomenex Synergi C18 150*25*10μm；流动相:[A-水(0.1％TFA)，B-乙腈]；B％:35％-58％,9min)分离得到化合物3。MS(ESI)m/z:455.9(M+H⁺)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.48-7.57(m,1H),7.36-7.44(m,1H),7.29(d,J＝7.4Hz,1H),7.03-7.25(m,2H),6.73-6.94(m,2H),5.91(d,J＝7.4Hz,1H),5.54(d,J＝14.4Hz,1H),5.35(s,1H),4.14(s,3H),4.10(d,J＝13.8Hz,1H),3.40-3.52(m,2H),3.18-3.28(m,1H),2.95-3.11(m,1H),2.64-2.87(m,1H)。

实施例4

步骤1：化合物4-1的合成

在室温下，将碳酸铯(776.41mg,2.38mmol,2.5eq)加入叔丁醇(10ml)中，向反应液中加入化合物1-8(500mg,953.19μmol)，搅拌15分钟后加入化合物(2-氯乙基)二甲基亚砜碘化物(361.08mg,1.43mmol)，在氮气的保护下继续搅拌12小时，升高温度至60℃反应3小时。反应结束后，冷却至室温，向反应液中加入水(30ml)，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(30mL)洗涤,无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得粗品经柱层析分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝5:1至0:1),得到化合物4-1.MS(ESI)m/z:543.2(M+H⁺)。

步骤2：化合物4-1A和4-1B的合成

化合物4-1经超临界流体色谱柱检测(柱子型号：Chiralcel OD-3 50×4.6mm I.D.,3μm；流动相:[A：二氧化碳，B：0.05％二乙胺甲醇溶液，梯度：B％:5％至40％]；流速：3mL/min；柱温：40℃；波长：220nm)分析为外消旋化合物，分离得到手性异构体4-1A(保留时间2.000min)和4-1B(保留时间2.421min).

步骤3：化合物4A的合成

在25℃下，将化合物4-1A(49mg,78.22μmol,86.612％纯度)加入到N，N-二甲基乙酰胺溶液(2ml)中，加入氯化锂(33.16mg,782.16μmol,16.02μL),将反应液升温至90℃，在氮气保护下搅拌4小时，待反应结束后，冷却至室温。向反应液中加入水(10mL),乙酸乙酯/四氢呋喃(4:1,10mL×3)萃取，合并有机相，经饱和食盐水(10mL)洗涤,无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得粗品经制备型高效液相分离纯化(柱子型号:Phenomenex Synergi C18 150×25×10μm；流动相:[A：水(0.225％甲酸)，B:乙腈]；梯度：B％:36％-66％,10min)分离得到化合物4A.MS(ESI)m/z:453.2(M+H⁺)。¹HNMR(400MHz,d₄-MeOH)δ7.53(d,J＝7.2Hz,1H),7.20-7.32(m,2H),7.09-7.15(m,2H),6.78-6.89(m,2H),5.89(d,J＝7.2Hz,1H),5.60-5.66(m,1H),5.52(s,1H),4.19-4.28(m,1H),4.12(d,J＝14.0Hz,1H),2.98-3.06(m,1H),1.89-1.99(m,1H),1.63-1.71(m,1H),1.08-1.17(m,1H),0.94-1.03(m,1H)。

步骤4：化合物4B的合成

在25℃下，将化合物4-1B(71mg,116.16μmol,88.773％纯度)加入到N，N-二甲基乙酰胺溶液(2ml)中，加入氯化锂(49.24mg,1.16mmol,23.79μL),将反应液升温至90℃，在氮气保护下搅拌4小时，待反应结束后，冷却至室温。向反应液中加入水(10mL),乙酸乙酯/四氢呋喃(4:1,10mL×3)萃取，合并有机相，经饱和食盐水洗(10mL),无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得粗品经制备型高效液相分离纯化(柱子型号:Phenomenex Synergi C18 150×25×10μm；流动相:[A：水(0.225％甲酸)，B:乙腈]；梯度：B％:36％-66％,10min)分离得到化合物4B.MS(ESI)m/z:453.2(M+H⁺)。¹HNMR(400MHz,d₄-MeOH)δ7.53(d,J＝7.2Hz,1H),7.19-7.32(m,2H),7.07-7.17(m,2H),6.78–6.88(m,2H),5.89(d,J＝7.6Hz,1H),5.58-5.68(m,1H),5.52(s,1H),4.19-4.27(m,1H),4.12(d,J＝13.8Hz,1H),2.98-3.09(m,1H),1.89-1.99(m,1H),1.63-1.71(m,1H),1.07–1.17(m,1H),0.93-1.03(m,1H).

实施例5

步骤1：化合物5-2的合成

将吡咯烷(278.03mg,3.91mmol,326.33μL)和醋酸(1.17g,19.55mmol,1.12mL)分别加入化合物5-1(3g,13.03mmol)和环丁基甲醛(5.48g,65.16mmol,7.93mL)的二甲基亚砜(20mL)溶液中，反应液在室温下搅拌4hr。向反应液中加水入(20mL)，用乙酸乙酯(20mL×3)行萃取，合并有机层，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，滤液减压浓缩。粗品经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1/0至1/1)纯化得化合物5-2。MS(ESI)m/z:314.9(M+H⁺)。

步骤2：化合物5-3的合成

将化合物5-2(2.5g,7.95mmol)溶于甲醇(20mL)中，加入乙酸(716.40mg,11.93mmol,682.29μL)和肼基甲酸叔丁酯(1.26g,9.54mmol)，反应液在30℃下搅拌2hr.。向反应液中加入水(50mL)，用乙酸乙酯(50mL×3)进行萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，减压浓缩。所得粗品经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1/0至1/1)纯化得到化合物5-3。MS(ESI)m/z:373.3(M+H⁺-56)。

步骤3：化合物5-4的合成

将化合物5-3(550mg,1.28mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(3.08g,27.01mmol,2mL)，反应 液在室温下搅拌2hr.。将反应液减压浓缩得到粗品化合物5-4直接用于下一步反应。MS(ESI)m/z:328.9(M+H⁺)。

步骤4：化合物5-5的合成

将化合物5-4(400mg,1.22mmol)溶于乙醇(10mL)中，加入乙酸(525.00mg,8.74mmol,0.5mL)，反应液在70℃下搅拌4hr.。将反应液减压浓缩，所得粗品经薄层层析制备板(二氯甲烷/甲醇＝10/1)纯化得到化合物5-5。MS(ESI)m/z:311.3(M+H⁺)。

步骤5：化合物5-6的合成

将化合物5-5(200mg,644.44μmol)溶于四氢呋喃(3mL)中，加入氰基硼氢化钠(121.49mg,1.93mmol)和一水合对甲苯磺酸(122.58mg,644.44μmol)，反应液在室温下搅拌2hr。将反应液减压浓缩，所得粗品经薄层层析制备板(二氯甲烷/甲醇＝10/1)纯化得到化合物5-6。MS(ESI)m/z:313.3(M+H⁺)。

步骤6：化合物5-7的合成

将化合物5-6(110mg,352.16μmol)和BB-2(181mg,640.17μmol)溶于二氯甲烷(3mL)中，加入三乙胺(79.97mg,790.30μmol,110.00μL)，反应液在15℃下搅拌15hr。向反应液中加入水(10mL)，用二氯甲烷(20mL×3)萃取，合并有机层，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩。所得粗品经薄层层析制备板(二氯甲烷/甲醇＝20/1)纯化得到化合物5-7。MS(ESI)m/z:559.2(M+H⁺)。

步骤7：化合物5-8的合成

将化合物5-7(80mg,143.21μmol)溶于DCM(2mL)中，加入戴斯马丁试剂(78.96mg,186.17μmol)，反应液在20℃条件下搅拌2hr。向反应液中加入饱和硫代硫酸钠(10mL)，搅拌10min后，加入饱和碳酸氢钠(10mL)，搅拌10min，反应液变澄清。用二氯甲烷(20mL×2)进行萃取，合并有机层，用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，滤液减压浓缩。粗品经薄层层析制备板(二氯甲烷/甲醇＝20/1)纯化得化合物5-8。MS(ESI)m/z:557.2(M+H⁺)。

步骤8：化合物5-8A和5-8B的合成

化合物5-8经超临界流体色谱柱检测(柱子型号：Chiralcel OD-3 50×4.6mm I.D.,3μm；流动相:[A：二氧化碳，B：0.05％二乙胺甲醇溶液，梯度：B％:5％至40％]；流速：3mL/min；柱温：40℃；波长：220nm)分析为外消旋化合物，分离得到手性异构体5-8A(保留时间1.924min)和5-8B(保留时间2.505min).

步骤9：化合物5A的合成

将化合物5-8A(16.00mg,28.74μmol,)溶于DMA(1mL)，加入LiCl(2.44mg,57.49μmol)，在90℃下搅拌2hr.。反应液经制备型高效液相分离纯化(柱子型号:Xtimate C18 150*40mm*10μm；流动相:[A：水(0.225％甲酸)，B:乙腈]；梯度：B％:50％-80％,8min)得化合物5A。MS(ESI)m/z:467.1(M+H⁺)。

¹H NMR(400MHz,氘代甲醇)δppm 7.35-7.45(m,1H),6.92-7.16(m,4H),6.51-6.76(m,2H),5.60-5.82(m,1H),5.44-5.58(m,1H),4.93(s,1H),4.03(br d,J＝13.55Hz,1H),3.56(s,2H),2.76-2.95(m,1H),2.31 (br s,2H)2.02-2.18(m,1H)1.84-2.03(m,2H)。

步骤10：化合物5B的合成

将化合物5-8B(16.00mg,28.74μmol)溶于DMA(1mL)，加入LiCl(2.44mg,57.49μmol)，在90℃条件下搅拌2hr.。反应液经制备型高效液相分离纯化(柱子型号:Xtimate C18 150*40mm*10μm；流动相:[A：水(0.225％甲酸)，B:乙腈]；梯度：B％:50％-80％,8min)得化合物5B。MS(ESI)m/z:467.1(M+H⁺)。¹H NMR(400MHz,氘代甲醇)δppm 7.46-7.48(m,1H),7.05-7.16(m,4H),6.74(br s,2H),5.79-5.80(m,1H),5.59-5.63(m,1H),5.01(s,1H),4.09(br d,J＝13.80Hz,1H),3.74(s,2H),2.93(br s,1H),2.38(br s,2H)2.15-2.28(m,1H)1.84-2.06(m,2H).

实施例6

步骤1：化合物6-2的合成

将化合物6-1(4g,17.38mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(30mL)和水(30mL)中，加入环戊醛(2.05g,20.85mmol)和2-氨基-3-苯基-丙酸钾(2.01g,12.16mmol)，反应液在20℃搅拌5小时。向反应液中加入水(30mL),用乙酸乙酯(30mL×3)萃取。合并有机相，用饱和食盐水(50mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。所得粗品经快速硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝2/1至1/2)纯化得到化合物6-2。MS(ESI)m/z:328.9(M+H⁺)。

步骤2：化合物6-3的合成

将化合物6-2(2g,6.09mmol)溶于甲醇(20mL)中，加入肼基甲酸叔丁酯(1.05g,7.92mmol)和乙酸(182.89mg,3.05mmol,174.18μL)，反应液在20℃搅拌3hr。向反应液中加入水(30mL),用乙酸乙酯(30mL×3)萃取。合并有机相，用饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。所得粗品经快速硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝2/1至1/2)纯化得化合物6-3。MS(ESI)m/z:443.21(M+H⁺)。

步骤3：化合物6-4的合成

将化合物6-3(1.2g,2.71mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，加入三氟乙酸(1.54g,13.51mmol,1mL)，反应液在20℃搅拌3hr。将反应液减压浓缩得到粗品化合物6-4，直接用于下一步反应。MS(ESI)m/z:343.1(M+H⁺)。

步骤4：化合物6-5的合成

将化合物6-4(0.9g,2.63mmol)溶于乙醇(10mL)中，加入乙酸(525.00mg,8.74mmol,0.5mL)，反应液在80℃搅拌1.5hr。将反应液减压浓缩，所得粗品经薄层层析制备板纯化(二氯甲烷/甲醇＝10/1)得化合物6-5。MS(ESI)m/z:325.3(M+H⁺)。

步骤5：化合物6-6的合成

将化合物6-5(0.2g,616.57μmol)溶于THF(5mL)，加入氰基硼氢化钠(77.49mg,1.23mmol)和一水合对甲苯磺酸(117.28mg,616.57μmol)，反应液在20℃搅拌1hr。将反应液过滤，滤液减压浓缩，所得粗品经薄层层析制备板纯化(二氯甲烷/甲醇＝10/1)得化合物6-6。MS(ESI)m/z:327.0(M+H⁺)。

步骤6：化合物6-7的合成

将化合物6-6(0.1g,306.38μmol)溶于二氯甲烷(3mL)中，加入BB-2(129.94mg,459.57μmol)和三乙胺(93.01mg,919.15μmol,127.93μL)，反应液在20℃搅拌12hr。将反应液减压浓缩，所得粗品经薄层层析制备板纯化(二氯甲烷/甲醇＝10/1)得化合物6-7。MS(ESI)m/z:573.1(M+H⁺)。

步骤7：化合物6-8的合成

将化合物6-7(90mg,157.16μmol)溶于二氯甲烷(3mL)中，加入戴斯马丁试剂(0.1g,235.77μmol,72.99μL)，反应液在20℃搅拌2hr。加入饱和硫代硫酸钠溶液(5mL)淬灭后用饱和碳酸氢钠溶液(5mL)中和，用二氯甲烷(20mL×2)萃取。合并有机相，用饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，所得粗品经薄层层析制备板纯化(二氯甲烷/甲醇＝15/1)得化合物6-8。MS(ESI)m/z:571.1(M+H⁺)。

步骤8：化合物6-8A和6-8B的合成

化合物6-8经超临界流体色谱柱检测(柱子型号：ChiralPak AD-3 150×4.6mm I.D.,3μm；流动相:[A：二氧化碳，B：0.05％二乙胺乙醇溶液，梯度：B％:40％]；流速：2.5mL/min；柱温：40℃；波长：220nm)分析为外消旋化合物，分离得到手性异构体6-8A(保留时间3.784min)和6-8B(保留时间6.267min).

步骤9：化合物6A的合成

将化合物6-8A(0.017g,26.29μmol)溶于N,N-二甲基乙酰胺(2mL)中，加入氯化锂(11.14mg,262.86μmol)，反应液在80℃搅拌12hr。将反应液过滤，滤液经制备型高效液相分离纯化(柱子型号:Welch Xtimate C18 150*25mm*5μm；流动相:[A：水(0.225％FA)，B：ACN]；梯度：B％:50％-80％,7min)纯化得 到化合物6A。MS(ESI)m/z:481.0(M+H⁺)。¹H NMR(400MHz,氘代甲醇)δ7.57(d,J＝7.53Hz,1H),7.19(br d,J＝5.02Hz,2H),7.10(br d,J＝2.51Hz,2H),6.81(br s,2H),5.87(d,J＝7.53Hz,1H),5.57-5.69(m,1H),5.20(s,1H),4.12(d,J＝13.55Hz,1H),3.87(br d,J＝15.06Hz,1H),3.49(d,J＝15.06Hz,1H),2.59-2.73(m,1H),1.95-2.10(m,2H),1.54-1.91(m,5H)。

步骤10：化合物6B的合成

将化合物6-8B(0.017g,26.29μmol)溶于N,N-二甲基乙酰胺(2mL)中，加入氯化锂(11.14mg,262.86μmol,5.38μL)，反应液在80℃搅拌12hr。反应液过滤，滤液经制备型高效液相分离纯化(柱子型号:Welch Xtimate C18 150*25mm*5μm；流动相:[A：水(0.225％FA)，B：ACN]；梯度：B％:50％-80％,7min)纯化得到化合物6B。MS(ESI)m/z:481.0(M+H⁺)。¹H NMR(400MHz,氘代甲醇)δ7.58(d,J＝7.28Hz,1H),7.20(br d,J＝4.52Hz,2H),7.10(br s,2H),6.82(br s,2H),5.87(d,J＝7.28Hz,1H),5.64(br d,J＝13.30Hz,1H),5.20(s,1H),4.13(d,J＝13.80Hz,1H),3.87(br d,J＝14.81Hz,1H),3.50(br d,J＝15.06Hz,1H),2.61-2.75(m,1H),1.94-2.11(m,2H),1.53-1.93(m,5H)。

实施例7

步骤1：化合物7-2的合成

将化合物7-1(2g,8.69mmol)溶于二甲亚砜(20mL)中，加入环己基甲醛(1.95g,17.38mmol,2.09mL)，吡咯烷(185.36mg,2.61mmol,217.56μL)和乙酸(782.55mg,13.03mmol,745.29μL)，反应液在15℃下搅拌1小时。反应液用乙酸乙酯(100mL)稀释，饱和食盐水(50mL×3)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。所得粗品经快速硅胶柱纯化(乙酸乙酯/石油醚＝1/2至1/1)得化合物7-2。MS(ESI)m/z:343.0(M+H⁺)。¹H NMR(400MHz,氘代氯仿)δ9.72(s,1H),7.64(d,J＝5.52Hz,1H),7.34-7.45(m,5H),6.41(d,J＝5.52Hz,1H),5.17-5.30(m,2H),4.71(d,J＝7.03Hz,1H),2.03-2.12(m,1H),2.00(d,J＝7.28Hz,1H),1.70(br d,J＝15.06Hz,1H),1.54(br dd,J＝4.27,7.78Hz,2H),1.30-1.47(m,2H),1.19-1.29(m,2H),1.12(ddd,J＝3.76,10.54,13.80Hz,1H).

步骤2：化合物7-3的合成

将化合物7-2(1.9g,5.55mmol)溶于甲醇(40mL)中，加入肼基甲酸叔丁酯(880.08mg,6.66mmol)和乙酸(333.24mg,5.55mmol,317.37μL)，反应液在20℃下搅拌1小时。反应液用乙酸乙酯稀释(60mL)，饱和食盐水(20mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。所得粗品经快速硅胶柱纯化(乙酸乙 酯/石油醚＝2/1至3/2)得化合物7-3。MS(ESI)m/z:479.1(M+Na⁺)。¹H NMR(400MHz,氘代氯仿)δ7.58-7.69(m,2H),7.31-7.47(m,5H),7.12(s,1H),6.39(d,J＝5.52Hz,1H),5.22-5.29(m,1H),5.11-5.20(m,1H),4.69(br d,J＝5.77Hz,1H),2.08-2.21(m,1H),1.52-1.58(m,4H),1.51(s,9H),1.30-1.46(m,3H),1.15-1.30(m,2H).步骤3：化合物7-4的合成

将化合物7-3(2.5g,5.48mmol)溶于二氯甲烷(50mL)中，加入氯化氢/二氧六环(4M,5mL,20mmol)，在20℃下搅拌12小时。反应液减压浓缩干，加甲醇(30mL)溶解，然后减压浓缩干得粗品7-4，直接用于下一步反应。MS(ESI)m/z:357.0(M+H⁺)

步骤4：化合物7-5的合成

将化合物7-4(1.9g,5.33mmol)溶于乙醇(80mL)中，加入乙酸(8mL)，反应液在70℃下搅拌12小时，减压浓缩干得粗品。粗品经快速硅胶柱纯化(二氯甲烷/甲醇＝1/0至10/1)得化合物7-5.MS(ESI)m/z:339.0(M+H⁺)

步骤5：化合物7-6的合成

将化合物7-5(400mg,1.18mmol)溶于四氢呋喃(8mL)中，加入氰基硼氢化钠(222.84mg,3.55mmol)，然后分批加入一水合对甲基苯磺酸(337.27mg,1.77mmol)，反应液在20℃下搅拌1小时。反应液用乙酸乙酯(20mL)稀释，饱和食盐水(10mL×2)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。所得粗品经快速硅胶柱纯化(二氯甲烷/甲醇＝1/0至9/1)得化合物7-6。MS(ESI)m/z:341.1(M+H⁺)

步骤6：化合物7-7的合成

将化合物7-6(140mg,411.26μmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入BB-2(174.42mg,616.89μmol)和三乙胺(83.23mg,822.52μmol,114.49μL)，反应液在20℃下搅拌12小时。将反应液减压浓缩，所得粗品经快速硅胶柱纯化(二氯甲烷/甲醇＝1/0至9/1)得化合物7-7.MS(ESI)m/z:587.1(M+H⁺)。

步骤7：化合物7-8的合成

将化合物7-7(75mg,127.84μmol)溶于二氯甲烷(2mL)中，加入戴斯马丁试剂(108.44mg,255.67μmol,79.15μL)，反应液在20℃下搅拌2小时。加入饱和硫代硫酸钠溶液(5mL)，饱和碳酸氢钠溶液(5mL)，搅拌3分钟，用二氯甲烷萃取(5mL×3)，合并有机相，用饱和食盐水洗(5mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩干得粗品。所得粗品经快速硅胶柱纯化(二氯甲烷/甲醇＝1/0至9/1)得化合物7-8.MS(ESI)m/z:585.1(M+H⁺)。

步骤8：化合物7-8A和7-8B的合成

化合物7-8经超临界流体色谱柱检测(柱子型号：DAICEL CHIRALPAK AD(250mm*30mm,10μm)；流动相:[A：二氧化碳，B：0.1％氨水乙醇溶液，梯度：B％:55％])分析为外消旋化合物，分离得到手性异构体7-8A(保留时间0.644min)和7-8B(保留时间0.991min)。

步骤9：化合物7A的合成

将化合物7-8A(30.00mg,51.31μmol)溶于N,N-二甲基乙酰胺(1mL)中，加入氯化锂(6.53mg,153.93μmol,3.15μL)，反应液在80℃下搅拌12小时。取0.3mL反应液，用乙腈稀释(1mL)，过滤得滤液，经制备型高效液相分离纯化(柱子型号:Welch Xtimate C18 150*25mm*5μm；流动相:[A：水(0.225％甲酸)；B：乙腈]；梯度：B％:44％-74％,8.5min)得化合物7A。MS(ESI)m/z:495.3(M+H⁺)。¹H NMR(400MHz,氘代甲醇)δ7.53(br d,J＝7.53Hz,1H),6.99-7.33(m,4H),6.78(br s,2H),5.87(br d,J＝7.03Hz,1H),5.67(br d,J＝14.31Hz,1H),5.12-5.33(m,1H),4.13(br d,J＝13.80Hz,1H),3.55-3.80(m,2H),2.13-2.36(m,1H),1.97(br d,J＝15.31Hz,1H),1.41-1.79(m,4H),1.13-1.38(m,3H),0.82-1.09(m,1H)

步骤10：化合物7B的合成

将化合物7-8B(30.00mg,51.31μmol)溶于N,N-二甲基乙酰胺(1mL)中，加入氯化锂(6.53mg,153.93μmol,3.15μL)，反应液在80℃下搅拌12小时。取0.3mL反应液，用乙腈稀释(1mL)，过滤得滤液，经制备型高效液相分离纯化(柱子型号:Welch Xtimate C18 150*25mm*5μm；流动相:[A：水(0.225％甲酸)；B：乙腈]；梯度：B％:44％-74％,8.5min)得化合物7B。MS(ESI)m/z:495.3(M+H⁺)。¹H NMR(400MHz,氘代甲醇)δ7.54(d,J＝7.28Hz,1H),7.18(br d,J＝4.27Hz,2H),7.10(d,J＝3.51Hz,2H),6.73-6.88(m,2H),5.87(d,J＝7.53Hz,1H),5.67(br d,J＝13.80Hz,1H),5.24(s,1H),4.13(d,J＝13.80Hz,1H),3.60-3.76(m,2H),2.25(br t,J＝13.05Hz,1H),1.98(br d,J＝14.81Hz,1H),1.49-1.74(m,4H),1.16-1.40(m,3H),0.96(br d,J＝11.80Hz,1H).

实施例8

步骤1：化合物8-2的合成

将化合物8-1(5g,21.72mmol)和2-甲基丙醛(3.92g,54.30mmol,4.96mL)溶于DMSO(50mL)，加入吡咯烷(463.39mg,6.52mmol,543.89μL)和醋酸(1.96g,32.58mmol,1.86mL)，反应液在20℃下搅拌4hr.。向反应液中加入水(50mL)，用乙酸乙酯(50mL×3)进行萃取，合并有机层，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。所得粗品经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1/0至1/1)纯化得化合物3-苄氧基-2-(1,3-二羟基-2,2-二甲基-3-吡咯烷-1-基-丙基)吡喃-4-酮。MS(ESI)m/z:495.3(M+H⁺)。将上述化合物用DMSO(20mL)溶解后，加入醋酸(4.18g,69.62mmol,3.98mL)，反应液在80℃条件下搅拌4hr。向反应液中加入水(50mL)，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并有机层，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗品经柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1/1-1/2)得到化合物8-2。MS(ESI)m/z:303.0(M+H⁺)。

步骤2：化合物8-3的合成

将化合物8-2(1g,3.31mmol)溶于甲醇(5mL)中，加入醋酸(297.94mg,4.96mmol,283.76μL)和肼基甲酸叔丁酯(568.30mg,4.30mmol)，反应液在20℃下搅拌2hr.。向反应液中加入水(20mL×3)，用乙酸 乙酯(20mL×3)行萃取，合并有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。所得粗品经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1/0至1/1)纯化得到化合物8-3。MS(ESI)m/z:495.3(M+H⁺-56)。

步骤3：化合物8-4的合成

将化合物8-4(660mg,1.58mmol)溶于二氯甲烷(6mL)中，加入三氟乙酸(1.85g,16.21mmol,1.2mL)，反应液在20℃下搅拌1hr。将反应液减压浓缩得到化合物8-4。MS(ESI)m/z:316.9(M+H⁺)。

步骤4：化合物8-5的合成

将化合物8-4(500mg,1.58mmol)溶于EtOH(3.5mL)中，加入乙酸(681.14mg,11.34mmol,648.71μL)，反应液在70℃条件下搅拌16hr。将反应液浓缩，加入水(10mL)，用二氯甲烷(10mL×3)进行萃取，合并有机层，用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。所得粗品经硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝100/1至100/4)纯化化合物8-5。MS(ESI)m/z:298.9(M+H⁺)。

步骤5：化合物8-6的合成

将化合物8-5(130mg,435.75μmol)溶于四氢呋喃(1.5mL)，加入氰基硼氢化钠(82.15mg,1.31mmol)和一水合对甲苯磺酸(124.33mg,653.63μmol)，反应液在20℃条件下搅拌1hr.。向反应液中加入水(10mL)，用二氯甲烷(10mL×3)进行萃取，合并有机层，用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。所得粗品经柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇＝1/0至100/4)纯化得到化合物8-6。MS(ESI)m/z:300.9(M+H⁺)。

步骤6：化合物8-7的合成

将化合物8-6(100mg,332.94μmol)和BB-2(188.27mg,665.89μmol)溶于二氯甲烷(2mL)中，加入三乙胺(75.61mg,747.18μmol,104.00μL)，反应液在25℃搅拌8hr。向反应液中加入水(20mL)，用二氯甲烷(20mL×3)萃取，合并有机层，用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。所得粗品经薄层层析制备板纯化(二氯甲烷/甲醇＝15/1)纯化得化合物8-7.MS(ESI)m/z:547.9(M+H⁺)。

步骤7：化合物8-8的合成

将化合物8-7(90mg，164.65μmol)溶于二氯甲烷(1mL)中，加入戴斯马丁试剂(104.75mg,246.97μmol,76.46μL)，反应液在20℃条件下搅拌1hr。向反应液中加入饱和硫代硫酸钠(5mL)，搅拌10min后加入饱和碳酸氢钠(5mL)，搅拌10min，反应液澄清。加入二氯甲烷(20mL×2)萃取，合并有机层，用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。所得粗品经薄层层析制备板纯化(二氯甲烷/甲醇＝15/1)纯化得化合物8-8.MS(ESI)m/z:545.3(M+H⁺)。

步骤8：化合物8-8A和8-8B的合成

化合物8-8经超临界流体色谱柱检测(柱子型号：DAICEL CHIRALCEL OD-H(250mm*30mm,5μm)；流动相:[A：二氧化碳，B：0.1％氨水乙醇溶液，梯度：B％:40％])分析为外消旋化合物，分离得到手性异构体8-8A(保留时间1.490min)和8-8B(保留时间1.758min)。

步骤9：化合物8A的合成

将化合物8-8A(29.35mg,53.90μmol)溶于DMA(1mL)中，加入LiCl(22.85mg,538.97μmol)，反应液在90℃搅拌6hr。粗品经制备型高效液相分离纯化(柱子型号:Welch Xtimate C18 150*25mm*5μm；流动相:[A：水(0.225％甲酸)；B：乙腈]；梯度：B％:42％-72％,8min)得8A。MS(ESI)m/z:455.0(M+H⁺)。¹H NMR(400MHz,氘代氯仿)δppm 7.36(br d,J＝7.28Hz,1H),7.03-7.11(m,3H),6.94(br s,1H),6.80(br s,1H),6.65(br d,J＝7.53Hz,1H),5.86(br d,J＝7.28Hz,1H),5.48(br d,J＝13.30Hz,1H),5.05(s,1H),4.09(br d,J＝13.30Hz,1H),3.65(br d,J＝15.31Hz,1H),3.44(br d,J＝14.81Hz,1H),1.50(s,3H),1.22(s,3H).步骤10：

化合物8B的合成

将化合物8-8B(29.35mg,53.90μmol)溶于DMA(1mL)中，加入LiCl(22.85mg,538.97μmol)，反应液在90℃搅拌6hr。粗品经制备型高效液相分离纯化(柱子型号:Welch Xtimate C18 150*25mm*5μm；流动相:[A：水(0.225％甲酸)；B：乙腈]；梯度：B％:42％-72％,8min)得8B。MS(ESI)m/z:454.9(M+H⁺)。¹H NMR(400MHz,氘代氯仿)δppm 7.37(br d,J＝7.53Hz,1H),7.02-7.11(m,3H),6.94(br s,1H),6.81(br s,1H),6.66(br d,J＝7.28Hz,1H),5.87(br d,J＝7.53Hz,1H),5.48(br d,J＝12.80Hz,1H),5.05(s,1H),4.09(br d,J＝13.55Hz,1H),3.65(br d,J＝14.81Hz,1H),3.44(br d,J＝14.56Hz,1H),1.51(s,3H),1.23(s,3H).

生物学部分

实验例1：流感病毒细胞病变(CPE)实验

通过测定化合物的半数有效浓度(EC₅₀)值来评价化合物对流感病毒(Influenza virus,IFV)的抗病毒活性。细胞病变实验被广泛用于测定化合物对病毒感染细胞的保护作用来反映化合物的抗病毒活性。流感病毒CPE实验

将MDCK细胞以2,000细胞每孔的密度种入黑色384孔细胞培养板中，随后置于37℃，5％CO₂培养箱中培养过夜。化合物由Echo555非接触式纳升级声波移液系统进行稀释并加入到细胞孔内(3倍倍比稀释，8个测试浓度点)。流感病毒A/Weiss/43(H1N1)株随后以每孔1-2 90％组织培养感染剂量(TCID90)加入细胞培养孔中，培养基中DMSO终浓度为0.5％。设置病毒对照孔(加入DMSO和病毒，不加化合物)，细胞对照孔(加入DMSO，不加化合物和病毒)和培养基对照孔(只有培养基，不含细胞)。化合物的细胞毒性测定和抗病毒活性测定平行进行，除了不加病毒，其它的实验条件和抗病毒活性实验一致。细胞板置于37℃，5％CO₂培养箱中培养5天。培养5天后使用细胞活力检测试剂盒CCK8检测细胞活性。原始数据用于化合物抗病毒活性和细胞毒性计算。

化合物的抗病毒活性和细胞毒性由化合物分别对病毒引起的细胞病毒效应的抑制率(％)表示。计算公式如下：

使用GraphPad Prism软件对化合物的抑制率和细胞毒性进行非线性拟合分析，得到化合物的EC₅₀值。实验结果见表1.

表1

结果与讨论：本发明化合物，在细胞水平抑制流感病毒复制试验中展示出积极效应。